倪鴻韜 ，王 瑜

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070；2.甘肅省獸醫(yī)局，蘭州 730030；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，蘭州 730050）

復(fù)方楊黃灌注液對奶牛子宮內(nèi)膜炎的藥效試驗

倪鴻韜1，2，王 瑜3

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070；2.甘肅省獸醫(yī)局，蘭州 730030；3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所，蘭州 730050）

采用常規(guī)方法對奶牛子宮內(nèi)膜炎進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查；以液體培養(yǎng)基對倍稀釋法測定復(fù)方楊黃灌注液對奶牛子宮內(nèi)膜炎主要病原菌的最低抑菌濃度（MIC），并以雙黃連注射液作對照，觀察復(fù)方楊黃灌注液對奶牛子宮內(nèi)膜炎的臨床療效。結(jié)果：37例患子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮中共分離到49株細(xì)菌，其中鏈球菌、大腸埃希氏菌和葡萄球菌分別占30.61%、28.57%和24.49%，其他菌的比例較低。復(fù)方楊黃灌注液對奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌均有不同程度的抑制作用，與對照藥物雙黃連注射液作用相仿。復(fù)方楊黃灌注液對奶牛子宮內(nèi)膜炎的治愈率為88.06%，療效優(yōu)于對照藥物（P＜0.05）。

復(fù)方楊黃灌注液；奶牛；子宮內(nèi)膜炎；臨床試驗

奶牛子宮內(nèi)膜炎是奶牛繁殖障礙綜合癥的一種主要類型，病因復(fù)雜［1-4］。該病多發(fā)于產(chǎn)后奶牛，雖然養(yǎng)殖戶投入大量的人力、物力予以防治，但其發(fā)病率仍居高不下，尤其是大量抗生素和消毒藥的長期應(yīng)用，致使病原菌抗藥性增強(qiáng)，在治療中用藥物多次過量沖洗子宮影響其功能恢復(fù)，故臨床上往往得不到滿意的治療效果。復(fù)方楊黃灌注液是中國農(nóng)科院蘭州畜牧與獸藥研究所研制的治療奶牛乳房炎的中藥制劑，由楊樹花、黃連、連翹等中藥水提醇沉制成，在臨床上治療奶牛乳房炎顯示出良好的治療效果，為了擴(kuò)大該藥的治療范圍，筆者采用該藥治療奶牛子宮內(nèi)膜炎，經(jīng)多個奶牛場臨床試驗應(yīng)用證明，其對奶牛子宮內(nèi)膜炎有顯著療效。

1 材料與方法

1.1 動物 選自蘭州、銀川市4家奶牛場的病牛87頭。

1.2 培養(yǎng)基 腸桿菌科細(xì)菌生化編碼微量鑒定管（GYZ-15e）、麥康凱瓊脂：購自中國獸藥飼料監(jiān)察所；營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂：購自杭州微生物試劑廠；卻浦曼瓊脂、改良艾德華瓊脂、血瓊脂、血清肉湯培養(yǎng)基：按文獻(xiàn)［5］的方法自制。

1.3 細(xì)菌學(xué)檢查

1.3.1 病料采集 對病牛外陰部用碘伏洗凈，用滅菌輸精管插入子宮腔，注入生理鹽水20 mL，并立即回抽，將采集病料移入滅菌試管內(nèi)待檢。

1.3.2 細(xì)菌分離和純化 將采集的樣品各取25～100 μL分別接種于70 mL/L血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24～48 h，再接種于麥康凱瓊脂、卻浦曼瓊脂和改良艾德華瓊脂等鑒別培養(yǎng)基上，進(jìn)行分離純化。

1.3.3 細(xì)菌鑒定 分別挑取可見的各類菌落接種于肉湯培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)菌在肉湯中的生長特征，涂片作革蘭氏染色。根據(jù)在不同培養(yǎng)基上的生長情況、菌落特征和鏡檢結(jié)果，初步鑒定細(xì)菌類屬，再分別進(jìn)行特異性生化試驗予以鑒定。

1.4 體外抑菌試驗

1.4.1 試驗藥物及稀釋液的制備 復(fù)方楊黃灌注液由楊樹花、黃連、連翹等3種藥材經(jīng)水提醇沉制得；用肉湯培養(yǎng)液或血清肉湯培養(yǎng)液做對倍稀釋，制成含生藥濃度0.78～100.00 mg/mL的稀釋液。對照藥物雙黃連注射液同樣倍比稀釋制成相同的濃度。

1.4.2 受試菌株 鏈球菌2株、葡萄球菌2株和大腸埃希氏菌3株均系自患子宮內(nèi)膜炎的奶牛中分離得到的菌株。

1.4.3 菌液制備 將試驗菌株接種于肉湯培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)18 h，以平板法計數(shù)，用滅菌生理鹽水稀釋至106CFU/mL，置4℃冰箱備用。

1.4.4 抑菌試驗 用40孔組織培養(yǎng)板，每孔加入相應(yīng)的不同濃度藥物稀釋液190 μL和菌液10 μL，并設(shè)藥物基質(zhì)培養(yǎng)液與肉湯培養(yǎng)液作為陽性對照（試驗重復(fù)3次）。37℃培養(yǎng)24 h，以肉眼觀察無菌生長的藥液最大稀釋濃度為最低抑菌濃度（MIC）。

1.5 臨床試驗

1.5.1 試驗分組和藥物 將87頭患子宮內(nèi)膜炎的奶牛隨機(jī)分為2組，試驗組用復(fù)方楊黃灌注液，對照組選擇雙黃連注射液。

1.5.2 給藥途徑及劑量 試驗組：用滅菌輸精管將復(fù)方楊黃灌注液100 mL輸入子宮內(nèi)，隔日1次，連用3次；對照組：雙黃連注射液100 mL，子宮灌注，隔日1次，連用3次。以上2組均以3次為一療程。

1.5.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 臨床痊愈：患牛全身癥狀消失，直腸檢查子宮大小、形狀、質(zhì)地，子宮恢復(fù)較好、與懷孕前相差無幾、收縮反應(yīng)強(qiáng)烈。陰道和子宮黏膜充血現(xiàn)象消失，分泌物透明且有牽縷性，適時發(fā)情；好轉(zhuǎn)：全身癥狀基本消失，子宮恢復(fù)較快，陰道檢查子宮頸外口黏膜仍帶有少量黏液；無效：治療前后子宮檢查無明顯變化，子宮內(nèi)仍有性分泌物或膿液排出。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌學(xué)檢查 從37例患子宮內(nèi)膜炎奶牛的活體病料中共分離到49株細(xì)菌，結(jié)果見表1。從表1可見，奶牛子宮內(nèi)膜炎細(xì)菌感染以鏈球菌、大腸埃希氏菌和葡萄球菌為主，它們分別占30.61%、28.57%和24.49%；其他菌的檢出比例較低。

表1 奶牛子宮內(nèi)膜炎細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果%

2.2 體外抑菌試驗結(jié)果 復(fù)方楊黃灌注液和雙黃連注射液對奶牛子宮內(nèi)膜炎3種主要病原菌的MIC測定結(jié)果顯示，復(fù)方楊黃灌注液和雙黃連注射液對3種細(xì)菌的MIC均為6.25 mg/mL。結(jié)果見表2。

表2 抑菌實驗結(jié)果mg/mL

2.3 臨床試驗 復(fù)方楊黃灌注液治療奶牛子宮內(nèi)膜炎痊愈率為88.06%，對照組為60.00%，2組差異顯著（P＜0.05）。結(jié)果見表3。

表3 復(fù)方楊黃灌注液治療奶牛子宮內(nèi)膜炎結(jié)果%

3 討論

體外抑菌試驗結(jié)果顯示，復(fù)方楊黃灌注液對奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌有一定的抑制作用，與雙黃連注射液相仿。但臨床試驗結(jié)果表明，本制劑對奶牛子宮內(nèi)膜炎的治愈率達(dá)88.06%。療效優(yōu)于雙黃連注射液。

［1］陳家璞.乳牛疾病學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1992：270-278.

［2］瞿自明，熊三友.清宮液治療奶牛子宮內(nèi)膜炎性不孕癥地研究報告［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，1989（6）：1-6.

［3］徐耀基，蘇喬.廣州地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌檢驗［J］.中國畜禽傳染病，1998（3）：11-12.

［4］牛永新.奶牛子宮內(nèi)膜炎的防治[J].中國獸醫(yī)科技，1997，27（3）：38.

［5］袁永隆，張永欣，侯奕昭，等.奶牛乳房炎乳汁細(xì)菌的分離和鑒定［J］.中國獸醫(yī)科技，1991，21（2）：7-10.

2011-04-23

倪鴻韜（1967-），男，博士研究生。

王瑜（1974-），男，助理研究員。

1007-9726（2011）03-0076-02

S823.7