何艷清 李賜恩 張俊紅

HPLC-ELSD法測(cè)定復(fù)方芪丹膠囊中黃芪甲苷的含量

何艷清 李賜恩 張俊紅

目的建立復(fù)方芪丹膠囊中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法。方法以乙腈∶水(30∶70)為流動(dòng)相，Agilent Hypersil ODSC18柱 (4.0 mm 125 mm，5μm)為固定相，流速為1.0 ml/min;漂移管溫度:45℃，氮?dú)饬魉?1.5L/min。結(jié)果黃芪甲苷在1.832～18.32μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為96.45%，RSD為1.16%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高，可用于復(fù)方芪丹膠囊中黃芪甲苷的含量測(cè)定。

黃芪甲苷;高效液相色譜法;含量測(cè)定

復(fù)方芪丹膠囊主要由黃芪、丹參等多味藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰，活血祛瘀的作用。制劑中成分較復(fù)雜，黃芪為方中君藥，本文采用高效液相色譜法對(duì)該制劑中黃芪的有效成分黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，探討該方的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀(美國(guó));Alltech 3300蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(美國(guó)Grace);Mettler-Toledo XS205 dU電子分析天平(瑞士);Agilent Hypersil ODSC18(4.0 125 mm，5μm)色譜柱。乙腈為色譜純?cè)噭?Merck)，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。黃芪甲苷對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):110781-200613，復(fù)方芪丹膠囊及其空白制劑為本單位自制，批號(hào):100701，100702，100703。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Hypersil ODSC18柱(4.0 mm×125 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-水(30∶70);流速:1.0 ml/min;柱溫:35℃;漂移管溫度:45℃;氮?dú)饬魉?1.5 L/min。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24 h的黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含黃芪甲苷分別為 0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 膠囊內(nèi)容物研細(xì)，取約5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0 ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀? ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm.柱高為12 cm)，以水50 m l洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至 5 m l量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得［1，2］。

2.4 線性范圍的考察 分別精密吸取不同濃度黃芪甲苷對(duì)照品溶液(每1 ml中含黃芪甲苷分別為0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg)10 μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，以黃芪甲苷含量(X)的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線lnY=1.57437nX+4.8125，r=0.99992。表明黃芪甲苷在1.832～18.32μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液(0.9160 mg/ml)10 μL分別進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積積分值RSD為0.47%(n=6)，表明方法的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液(批號(hào):100701)10 μL 分別于0，1，2，4，6，8 h 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果 RSD 為1.19%(n=6)，表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品(批號(hào):100701)6份，分別精密稱定，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定，計(jì)算含量，RSD為1.26%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品，分別精密加入一定量的黃芪甲苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定，測(cè)得平均回收率為96.45%，RSD為1.16%(n=6)。結(jié)果見表1。

2.9 空白干擾試驗(yàn) 取空白制劑按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。從圖中可見，黃芪甲苷色譜峰峰形對(duì)稱，供試品色譜圖中黃芪甲苷峰能與其他成分很好地分離，陰性對(duì)照溶液在黃芪甲苷峰處基本無干擾。結(jié)果見圖1。

表1 黃芪甲苷回收率測(cè)定結(jié)果

圖1 黃芪甲苷色譜圖

2.10 供試品含量測(cè)定 分別對(duì)3批供試品按上述含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。結(jié)果其黃芪甲苷含量分別為 1.24，1.20，1.19 mg/g。

3 小結(jié)

3.1 本研究以黃芪甲苷含量為指標(biāo)，對(duì)供試品溶液的制備方法進(jìn)行了對(duì)比研究。比較直接提取和浸泡過夜提取，結(jié)果浸泡過夜可使提取率提高2～3倍;采用水飽和的正丁醇萃取和氨試液洗滌的方法可以減少雜質(zhì)干擾［3，4］，但過D101型大孔吸附樹脂柱后雜質(zhì)明顯減少，提高了黃芪甲苷的檢出準(zhǔn)確率。

3.2 本制劑成分較為復(fù)雜，黃芪為方中君藥。有文獻(xiàn)報(bào)道［5］黃芪中的主要化學(xué)成分為黃芪甲苷。因此，本文采用高效液相色譜法對(duì)制劑中黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明方法簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于復(fù)方芪丹膠囊的質(zhì)量控制。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:283．

［2］李文韜，史國(guó)兵，何靜，等.HPLC-ELSD法測(cè)定參芪五味咀嚼片黃芪甲苷的含量.山西醫(yī)藥雜志，2010，39(10):902-903．

［3］宋平順，衛(wèi)玉玲，趙建邦，等.HPLC-ELSD測(cè)定黃參膠囊中黃芪甲苷的含量.中成藥，2008，30(4):49．

［4］武捷，火紅曄.RP-HPLC法測(cè)定消栓口服液中黃芪甲苷的含量.黑龍江醫(yī)藥，2007，20(5):431．

［5］余灝，楊勝華.黃芪皂甙分析方法研究近況.華西藥學(xué)雜志，1993，8(3):163．

Determ ination of the content of astragalosideⅣin Fufangqidan Capsules by HPLC-ELSD

ObjectiveTo determine the content of AstragalosideⅣ in Fufangqidan capsules by HPLC-ELSD.MethodsAgilent Hypersil ODSC18column was used with acetonitrile-water(30:70)solution as themobile phase，the flow rate was1.0 ml/min;drift tube temperaturewas45℃，nitrogen flow rate was1.5L/min.ResultsThe calibration curves were linear within1.832～18.32μg for AstragalosideⅣ.The average recovery was 96.45%with RSD 1.16%respectively.ConclusionThe experimental result shows that the method was simple，sensitive and reliable，and could be used as the quality determination of Astragaloside Ⅳ．

AstragalosideⅣ;HPLC;Quality determination

510405廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院