李亞杰 高衛(wèi)英

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy HIE)是兒科臨床上常見的一種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。既往人們對其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了廣泛研究，近年來基MMP-9、NO與HIE的關(guān)系逐漸為人們所重視。本研究旨在對40例HIE的新生兒和20例對照新生兒的血清MMP-9、NO水平進(jìn)行動態(tài)觀察，以探討其在HIE病程中的作用及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象 HIE組:2007年1月至2008年6月期間在我院兒科住院、圍生期有窒息并經(jīng)臨床或頭顱CT證實(shí)有HIE的患兒40例，其中輕度15例，中度13例，重度12例。符合2005年中華醫(yī)學(xué)會兒科分會新生兒學(xué)組制定的依據(jù)和臨床分度標(biāo)準(zhǔn)［1］，其中男23例，女17例。對照組:同期產(chǎn)科足月新生兒20例，均無窒息史、嚴(yán)重感染史及神經(jīng)系統(tǒng)疾病，該組患兒胎齡及獲取血清時(shí)的日齡與HIE組比較，差異無顯著性。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 MMP-9、NO定量ELISA試劑盒:購于南京建成試劑公司進(jìn)口分裝美國PDL公司產(chǎn)品。BIORAD680型酶標(biāo)儀(美國伯樂實(shí)驗(yàn)技術(shù)公司)、80-2型離心沉淀機(jī)(上海香術(shù)器械廠)、冷凍冰箱、恒溫水浴箱等，硝酸。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 患兒入院后24 h內(nèi)(急性期)、3 d(高峰期)、7 d(恢復(fù)期)各采取股靜脈血4 ml，分離血清后置-20℃保存待測。MMP-9的測定采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法;NO的測定采用硝酸還原法。

2 結(jié)果

2.1 HIE組與對照組血清MMP-9、NO水平比較 HIE血清MMP-9、NO水平較對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以發(fā)病后3 d水平升高尤著，此后呈逐漸下降趨勢。與對照組相比，均 P ＜0.05，見表1。

表1 HIE組與對照組血清MMP-9水平(pg/ml)、NO水平比較(±s，ng/L)

表1 HIE組與對照組血清MMP-9水平(pg/ml)、NO水平比較(±s，ng/L)

注:實(shí)驗(yàn)組間結(jié)果為3 d與1及7 d有差別(P＜0.05)7 d與1 d間無差別(P＞0.05)

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表2 病變程度不同的HIE患者發(fā)病后3d血清MMP-9、NO水平(±s)

表2 病變程度不同的HIE患者發(fā)病后3d血清MMP-9、NO水平(±s)

注:重度組與輕、中度組比 ＜0.05;中、輕組間 ＞0.05，相關(guān)系數(shù)s=0.532＜0.05

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2.2 HIE病情輕重程度與患者血清MMP-9的關(guān)系 病變程度不同的各組發(fā)病后3 d患者血清MMP-9、NO水平，結(jié)果顯示3組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩兩比較結(jié)果顯示重度HIE組高于中、輕度HIE組(P＜0.05)，見表2。對患兒的病情輕重程度與發(fā)病后3 d血清MMP-9、NO水平進(jìn)行Spesrman等級相關(guān)分析，結(jié)果顯示二者呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)(s=0.532，P=0.007)。

3 討論

NO是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理信使［2］，NO作為腦血管舒縮主要調(diào)節(jié)因子，在腦缺血一再灌注損傷中具有重要作用。NO過量生成或在病理性刺激時(shí)能產(chǎn)生神經(jīng)毒性。新生兒窒息是HIE的基礎(chǔ)，缺氧影響腦組織血管的正常灌注和微循環(huán)，而致缺氧缺血性腦損傷［3］。NO增加則通過毒性作用，自由基的損傷而加重腦缺血-再灌注損傷，導(dǎo)致神經(jīng)死亡。MMPs是鋅、鈣依賴性蛋白水解酶家族，其功能是降解和重塑EMC，維持EMC的動態(tài)平衡。近年來，有人發(fā)現(xiàn)腦缺血及再灌注后出現(xiàn)MMPs增加，尤其是MMP-9和MMP-2活性增加與腦血管通透性、BBB通透性、BBB崩潰、炎細(xì)胞侵入和腦水腫明顯相關(guān)［4］。本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，HIE患者血清MMP-9、NO水平于發(fā)病后1 d、3 d、7 d均升高，其發(fā)病后3 d水平升高尤著，可能與MMP-9導(dǎo)致BBB通透性增強(qiáng)、BBB崩潰及NO合成酶升高有關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)MMP-9、NO水平與HIE嚴(yán)重程度有關(guān)，即缺氧時(shí)間越長，腦損傷越重，MMP-9、NO水平越高。故MMP-9、NO水平亦可作為預(yù)測HIE預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。MMP-9、NO為新生兒缺氧缺血性腦病的治療提供了新靶標(biāo)，其在臨床的意義與應(yīng)用價(jià)值有著廣闊的研究前景。

［1］中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會新生兒組.新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn).中華兒科雜志2005，43(8):584.

［2］Bolanos JP，Almeida A.Roles of nitric oxide in brain hypoxiaischemia.Biochim Acta，1999，1411(2-3):415-436.

［3］殷憲敏，史寶海，楊曉雯，等.硫酸鎂、腦復(fù)素、高壓氧治療HIE療效觀察.實(shí)用兒科臨床雜志，2002，17(6):678-680.

［4］KMGW，GASCHE Y，GRZESCHIK S，et al.Neurodegendration instriatum induce by the mitochondrial toxin 3-nitropropionic acid:role of matrix metalloproteinase-9 in early biood-brain barrier disruption.Neuroscience，2003，23:8733-8742.