劉新 陳志云

復發(fā)性流產(chǎn)是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)，其中50%以上患者不存在染色體、解剖、內(nèi)分泌、自身免疫異常和生殖道感染等常見病因，臨床上稱為原因不明復發(fā)性流產(chǎn)。在生育年齡的婦女中發(fā)生率為1% ～2%，且有逐年增加趨勢。過去25年間中國有生育力男性精液參數(shù)中精子密度和精子總數(shù)呈現(xiàn)下降［1］，精子質(zhì)量下降是否增加流產(chǎn)率目前研究并不多見。本文對56例不明原因復發(fā)性流產(chǎn)患者丈夫精液常規(guī)檢查情況進行回顧性分析，試圖為復發(fā)流產(chǎn)的病因提供部分理論依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇本院門診就診的56例孕早期習慣性流產(chǎn)患者，孕齡＜12周，均為流產(chǎn)3次或3次以上者?；颊吲懦嬖谌旧w、解剖、內(nèi)分泌、自身免疫異常和生殖道感染等常見病因。取56例患者丈夫精液為研究組，同時隨機取56例已育男性精液作為對照組。

1.2 實驗室指標評定標準 按照WH/《人類精液及精子－宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊》中的標準評定。正常值:精液量2～6 ml，pH 值7.2～8.0，液化時間 ＜ 60 min，精子密度≥20×106/ml或更多，精子活率＞60%，精子活力a級≥25%或a級+b級≥50%，正常精子形態(tài)≥30%。在上述指標中，只要有一項異常時則判定精液質(zhì)量異常。若各項指標均在參考值范圍內(nèi)，則判定精液質(zhì)量為正常。

2 研究方法

2.1 標本采集 禁欲4～7 d在取精室手淫法取精液于干燥經(jīng)消毒的潔凈廣口杯內(nèi)，置于37℃水浴箱內(nèi)使之完全液化后轉(zhuǎn)移至刻度離心管內(nèi)測量體積，37℃水浴中待檢。

2.2 操作方法 按WHO的操作方法，分析精液量液化時間、pH值、黏稠度以及精子形態(tài)等。精液完全液化后，先取一滴約10 μl精液滴在載玻片上，拉薄涂片，用改良巴氏染色法染色待檢。

2.3 精液動態(tài)分析 采用西班牙SCA－LIT彩色精子質(zhì)量檢測儀對精子進行動態(tài)分析。按照《WH/人類精液及精子－宮頸黏液相互作用實驗檢驗手冊》的相關(guān)要求分析精液。

2.4 檢測指標 精液pH、精液量、總數(shù)、密度、液化時間、a+b級精子率、正常精子率。精液動態(tài)分析指標:直線速度(VSL)、曲線速度(VCL)、平均路徑速度(VAP)、直線性(LIN)、前向性(STR)、擺動性(WOB)、精子平均側(cè)擺幅(ALH)、平均移動角度(MAD)、精子平均鞭打頻率(BCF)。

2.5 質(zhì)控方法 室內(nèi)質(zhì)控采用質(zhì)控珠(QC-BesdsTM，Bioscreen Inc)進行每天密度質(zhì)控，檢測人員每周進行隨機標本的質(zhì)控(密度和活動力質(zhì)控)。

2.6 統(tǒng)計學方法 按統(tǒng)計學要求處理各組參數(shù)，使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，定量資料均以(±s)表示，定量資料組間比較采用t檢驗，定性資料組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 兩組精液的量、pH值、精子總數(shù)、a+b級比率及液化時間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，在畸形率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。研究組精液畸形率明顯高于對照組。見表1。

3.2 與對照組比較，研究組精液VCL、VSL、MAD、ALH、VAP、WOB無明顯統(tǒng)計學差異，BCF、LIN、STR有顯著性差異(P＜0.05)。見表2。

表1 兩組精液檢測結(jié)果比較

表2 兩組精液運動參數(shù)比較

4 討論

復發(fā)性流產(chǎn)的病因十分復雜，涉及遺傳、內(nèi)分泌、解剖、感染和環(huán)境因素等多因素。目前研究大多數(shù)集中女性因素，既然由于胚胎染色體的一半是由男性提供，復發(fā)性流產(chǎn)也有可能是男性因素引起的。本研究對復發(fā)性流產(chǎn)丈夫精液與正常男性精液常規(guī)分析結(jié)果顯示:兩組精液的量、pH值、精子總數(shù)、a+b級比率、液化時間及正常精子形態(tài)百分率無明顯差異。與以往研究相似［2］?；尉又笖?shù)兩組有明顯差異，畸形指數(shù)也稱多種異常指數(shù)(TZI)用缺陷總數(shù)除以畸形精子數(shù)目，數(shù)值介于1.00和3.00之間。是不育男性精液檢查的一個重要參數(shù)，有研究顯示TZI與精液常規(guī)中其他參數(shù)間無相關(guān)性［3］?；尉雍茈y結(jié)合到卵透明帶上，當精液中正常形態(tài)精子百分率＜14%時，精子體外受精率顯著減少［4］。兩組正常精子百分率無明顯差異，畸形精子指數(shù)高是否作為一個影響自然妊娠的因素還有待于繼續(xù)研究。

Templado等［5］的研究表明，即使精子密度正常，畸形精子癥和弱精子癥男性的精子染色體異常顯著增高。吳大鵬等［6］觀察了58例復發(fā)性流產(chǎn)患者的丈夫和50例正常生育男性對照組，得出精子DNA完整性損傷可能是復發(fā)性流產(chǎn)的原因的結(jié)論。Carrell等［7］發(fā)現(xiàn)原因不明性復發(fā)性流產(chǎn)的精子較普通人群精子的非整倍性高，并且非整倍性的比率與精子凋亡的比率成正相關(guān)。Kahraman等［8］采用熒光原位雜交技術(shù)對接受卵胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)治療的畸形精子癥的研究結(jié)果顯示，39%存在精子非整倍體，顯著地高于對照;同時在對121例前期輔助生殖技術(shù)失敗的回顧中，發(fā)現(xiàn)50%分裂期胚胎中發(fā)現(xiàn)有染色體異常，其中34%為復合性染色體缺陷。這些結(jié)果提示:導致自然流產(chǎn)及胎兒發(fā)育異常的染色體異常有可能來源于精子的染色體異常，從而導致妊娠失敗?；尉又笖?shù)高與精子染色體異常是否有相關(guān)性還有待于繼續(xù)研究。

精子的動態(tài)參數(shù)是評估精液質(zhì)量的重要指標，將其與精液常規(guī)分析相結(jié)合，可為男性生育能力評價提供有效的依據(jù)［9］。參數(shù) VCL、VSL、VAP 反映了精子的運動速度，LIN、WOB、MAD、ALH、STR參數(shù)反映了精子運動的直線性和前向性。與對照組比較，研究組精液BCF(精子平均鞭打頻率)、LIN(直線性)、STR(前向性)、VSL(直線速度)、ALH(精子平均側(cè)擺幅)、WOB(擺動性)、VAP(平均路徑速度)均有明顯統(tǒng)計學差異，反映研究組精子的運動速度及前向性差。正常的受孕需要精子特征性的微細運動以穿透卵丘和透明帶，快速、直線、前向運動的精子是提高受孕概率的保證。精子的動態(tài)參數(shù)客觀地反映了精子微細運動特點，并與受精率顯著相關(guān)。一般一次射精后僅1%～6%精子可以進入宮腔，能到達輸卵管的精子更少，進入陰道的精子靠自身運動經(jīng)子宮頸到達輸卵管與卵細胞結(jié)合，旅途長達17 cm，是精子自身長度的3000倍，因此成功受孕精子功能尤為重要。兩組精子動態(tài)分析差異是否與畸形精子指數(shù)高相關(guān)還需進一步證實。

［1］梁小薇，盧文紅，陳振文，等.過去25年中國有生育力男性精液參數(shù)變化的回顧性研究.中華男科學雜志，2008，14(9):775-778.

［2］岳煥勛，李福平，蔣敏，等.復發(fā)性流產(chǎn)及胎兒發(fā)育異常與男性畸形精子的相關(guān)性探討.實用婦產(chǎn)科雜志，2008，24(10):624-626.

［3］姜彥嘉，王奇玲，馬春杰，等.畸形精子指數(shù)和精子畸形指數(shù)與男性不育癥患者精子密度、活動率及精子形態(tài)的關(guān)系.廣東醫(yī)學，2006，27(2):231-233.

［4］MortimerD，MenkveldR.Sperm morphology assessment-historical perspectives and current opinions.Androl，2001，22(2):192-205.

［5］TempladoC，HoangT，GreeneC.Aneuploid spermatozoa in infertile men:teratozoospermia.Mol Reprod Dev，2002，61(2):200-204.

［6］吳大鵬，吳齊飛，李旭東.反復自然流產(chǎn)與精子DNA完整性的相關(guān)研究.現(xiàn)代泌尿外科雜志，2008，13(2):132-134.

［7］CarrellDT，W ilcoxAL，Lowy L.Elevated sperm aneuploidy and apoptosis in patientswith unexplained recurrent pregnancy loss.Obstet-Gyneco，2003，101:1229-1235.

［8］KahramanS，F(xiàn)indikliN，BiricikA.Preliminary FISH studies on spermatozoa and embryos in patientswith variable degrees of teratozoosper-mia and a history of poor prognosis.Reprod Biomed Online，2006，12(6):752-761.

［9］余玲玲，陳小劍，江明華，等.精子動態(tài)參數(shù)在精液質(zhì)量分析中的應用.醫(yī)學研究雜志，2008，37(6):108-110.