曹 健，王 芳，陳 琳，張恩娟

(第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院藥學(xué)部，重慶 400037)

眩痛定膠囊是我院研制的非標(biāo)制劑，由天麻、元胡、白芷等中藥組成，具有鎮(zhèn)痙息風(fēng)、通絡(luò)止痛的功效，多年臨床應(yīng)用于眩暈、頭痛等各種原因引起的周圍神經(jīng)痛、關(guān)節(jié)肌肉痛等，有較好療效。延胡索乙素為元胡的主要有效成分之一，故選擇延胡索乙素作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，延胡索乙素的含量測(cè)定可采用高效液相色譜法[1]、薄層掃描法[2]等，由于眩痛定膠囊組成成分復(fù)雜，干擾因素較多，預(yù)試高效液相色譜法效果較好，故選用該法測(cè)定眩痛定膠囊中延胡索乙素含量。

1 儀器與試藥

Waters 600型高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)；紫外檢測(cè)器；ME235s型電子天平（德國(guó) Sartorius）；電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)；CSF-1A型超聲波發(fā)生器(上海超聲波儀器廠)；CS202A型電熱保溫干燥箱(重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)；80-2型離心沉淀器(上海手術(shù)器械廠)。延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)為110726-200409，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；眩痛定膠囊（0.45 g/粒，本院自制，批號(hào)分別為 070813，080602，080729）；陰性對(duì)照膠囊(缺元胡，本院自制）。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS柱(150 mm×4.6 mm，5!m)；流動(dòng)相：含0.2%三乙胺的水 -甲醇(52∶48)；流速：1.2 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20!L。

2.2 溶液制備

精密稱取延胡索乙素對(duì)照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇振搖使溶解，定容至刻度，即得對(duì)照品溶液。精密稱取膠囊內(nèi)容物5 g，加20 mL甲醇，85℃超聲提取1 h，取甲醇層離心，上清液置25 mL量瓶中，少量甲醇洗滌藥渣，超聲10 min，依法離心，取上清液，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45!m)濾過(guò)，即得供試品溶液。精密稱取按處方工藝制備的缺元胡的陰性對(duì)照膠囊內(nèi)容物5 g，按照供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液2.0 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。將對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣20!L。高效液相色譜圖如圖1?？梢?jiàn)，保留時(shí)間26.02 min處色譜峰為延胡索乙素的峰，陰性對(duì)照品溶液幾乎無(wú)干擾。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密量取對(duì)照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20!L注入高效液相色譜儀測(cè)定。以峰面積 A對(duì)質(zhì)量濃度 C進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=16 576.5C-16 466.5（r=0.999 9）。結(jié)果表明，延胡索乙素質(zhì)量濃度在8.0～40.0!g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液1.0 mL，置25 mL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進(jìn)樣20!L，測(cè)定5次，記錄色譜圖，測(cè)定延胡索乙素對(duì)照品峰面積。結(jié)果5次測(cè)得的平均峰面積為 116 543，RSD=1.17%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批供試品5份，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣20!L，測(cè)定延胡索乙素峰面積。結(jié)果5次測(cè)得的平均峰面積為178 789，RSD=1.75%（n=5），表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液20!L，于0，5，24 h進(jìn)樣，記錄每次進(jìn)樣的峰面積。結(jié)果延胡索乙素平均峰面積分別為177 512，177 341，178 624，RSD=0.29% ，表明供試品溶液在 24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn)：分別精密稱取眩痛定膠囊內(nèi)容物5 g，精密加入對(duì)照品稀釋液0.5，1.0，1.5 mL各3份，按供試品溶液制備方法提取并稀釋，進(jìn)樣20!L，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液和樣品溶液各20!L進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算延胡索乙素的含量。結(jié)果批號(hào)為070813，080602，080729的樣品中，延胡索乙素平均含量分別為 0.020 51，0.026 79，0.021 52 mg/粒，RSD 分別為 0.76%，0.68%，1.04%（n=5）。

3 討論

將延胡索乙素的甲醇溶液置紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描，結(jié)果延胡索乙素在283 nm處有最大吸收峰，經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm時(shí)雜質(zhì)干擾較少，故本試驗(yàn)采用283 nm作為眩痛定膠囊中延胡索乙素含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

制劑中延胡索乙素可以通過(guò)甲醇回流和甲醇超聲的方法來(lái)提取。曾對(duì)所考察的幾個(gè)批號(hào)的膠囊做了兩種提取方法的對(duì)比試驗(yàn)，取相同量的膠囊內(nèi)容物分別同時(shí)進(jìn)行甲醇回流和甲醇超聲（250 mA），時(shí)間均為1 h，此后的操作方法相同。結(jié)果采用甲醇回流提取的延胡索乙素含量?jī)H為甲醇超聲提取的70%～90%，有文獻(xiàn)報(bào)道延胡索乙素受溫度影響可能分解[3]，故采用甲醇超聲的方法提取眩痛定膠囊中的延胡索乙素。試驗(yàn)證明，按藥典方法，即甲醇超聲提取后揮干甲醇，加氨水溶液溶解殘?jiān)?，加乙醚萃取有機(jī)層，揮干乙醚后加甲醇溶解，干擾物質(zhì)排除很多，但延胡索乙素回收率也大大降低，故將超聲提取的甲醇高速離心后過(guò)0.45!m濾膜直接進(jìn)樣。

《中國(guó)藥典》規(guī)定，元胡中的延胡索乙素含量按干燥品計(jì)應(yīng)大于0.05%[4]，根據(jù)處方用量和工藝提取情況，將眩痛定膠囊中延胡索乙素的最低檢出限度定為0.02 mg/粒。

[1]朱才慶，吳 迪，李 艷，等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方元胡止痛膠囊中延胡索乙素的含量[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，7（19）：1 727-1 729.

[2]俞 瀅，徐紅輝.強(qiáng)痛寧中延胡索乙素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，1998，3：51-53.

[3]董 瑩，魏獻(xiàn)春.薄層掃描法測(cè)定胃得康片中延胡索乙素的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2004，10：84-85.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005：171.