黃壽妙，陳福軍，許少微

（浙江省平陽縣中醫(yī)院，浙江 溫州 325400）

黃褐斑是臨床常見的皮膚病，好發(fā)于中青年女性，嚴(yán)重影響美容。我院針對(duì)黃褐斑研制的消斑膏，經(jīng)臨床應(yīng)用，療效滿意，現(xiàn)將其制備和質(zhì)量控制方法及臨床療效觀察情況報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-4A型高效液相色譜儀（日本島津）；SPD-2AS型紫外檢測(cè)器（日本島津）；C-R3A型數(shù)據(jù)處理機(jī)。丹參酮!A對(duì)照品由溫州醫(yī)學(xué)院天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；甲醇為色譜純，水為雙重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備

處方：丹參 200 g，桑葚子 150 g，山萸肉 200 g，熟地 120 g，僵蠶100 g，生炒白術(shù) 150 g，龜板膠 200 g，白糖 250 g，女貞子 200 g，桃仁100 g。

制備[1-3]：取處方量除龜板膠、白糖外的上述藥材，加水浸泡2 h，提取3次，每次均加5倍量水煎煮1 h，合并煎液，靜置過夜，濾過，再加熱，使濾液濃縮約為原容積的2/5時(shí)，再加入龜板膠、白糖烊化，濾過，濾液繼續(xù)濃縮至規(guī)定的相對(duì)密度，放冷，即得。

2.2 質(zhì)量控制

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax BP-ODS柱（250 mm×4.6 mm，5"m）；流動(dòng)相：甲醇 -水（79 ∶21）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；流速：1 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10"L。

2.2.2 溶液制備

精密稱取丹參酮!A對(duì)照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為10.8"g/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品約1.0 g，精密稱定，加甲醇少量使其完全溶解，并定量轉(zhuǎn)移至50 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，稱定質(zhì)量（精密至0.01 g），超聲處理15 min，稱定質(zhì)量，補(bǔ)加損失的質(zhì)量，置冰浴中冷卻2 h以上，取出后濾膜(0.45"m)濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，放至室溫，作為供試品溶液。按處方比例稱取除丹參的其他藥物適量，依照消斑膏的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：量取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10"L，分別注入高效液相色譜儀。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有一相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間無干擾（圖1）。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取 2.5，5，10，15，20，25"L 的對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀，每一質(zhì)量濃度進(jìn)樣2次，計(jì)算丹參酮!A的峰面積平均值，以峰面積平均值為縱坐標(biāo)、丹參酮!A進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=56.98X+1.578 9×104，r=0.999 8。結(jié)果表明，丹參酮!A質(zhì)量濃度在0.027～0.27"g/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：依上述色譜條件，每隔1 h向色譜儀注入同一供試品溶液10"L，連續(xù)5次，測(cè)定丹參酮!A的峰面積 ，結(jié)果的RSD=1.1%（n=5），表明供試品溶液在5 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液10"L各5份，分別注入色譜儀，結(jié)果的 RSD=0.5%（n=5），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品6份，每份0.5 g，分別置錐形瓶中，再添加一定量的丹參酮!A對(duì)照品，每份用甲醇定容至50 mL，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密稱取不同批次的消斑膏制劑1.0 g，按供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20"L，注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果3批樣品中丹參酮!A的含量分別為 0.664 7，0.653 8，0.668 8 mg/g。

2.3 臨床應(yīng)用

2.3.1 一般資料

選擇我院皮膚科門診黃褐斑患者150例，年齡22～45歲，平均32歲，病程6個(gè)月至12年，平均4.2年。隨機(jī)分為治療組85例和對(duì)照組65例，兩組患者在年齡、一般情況和癥狀體征方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。

2.3.2 治療方法

治療組口服消斑膏，每日2次，每次20～30 g，早晚空腹溫服。對(duì)照組口服維生素C 0.2 g，六味地黃丸8粒，均為每日3次。兩組以1個(gè)月為一療程，連服2個(gè)月。

2.3.3 療效標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》[2]，治愈為顏面皮膚恢復(fù)正常顏色，顯效為皮損消退80%，好轉(zhuǎn)為皮損消退30%，無效為皮損無明顯變化或消退不足30%。以前三者之和計(jì)算總有效率。

2.3.4 治療結(jié)果

治療組85例中治愈30例，顯效35例，好轉(zhuǎn)8例，無效12例，總有效率為85.88%；對(duì)照組65例中治愈19例，顯效12例，好轉(zhuǎn)10例，無效24例，總有效率為63.08%。兩組療效比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

3 討論

中醫(yī)稱黃褐斑為蝴蝶斑，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病發(fā)生的原因很多，發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，但臨床觀察提示該病與肝、脾、腎等臟腑功能失調(diào)有關(guān)，瘀血內(nèi)阻也是主要病因之一。消斑膏方中桃仁、當(dāng)歸、丹參活血祛瘀，熟地、山萸肉、桑葚子、龜板膠、女貞子等補(bǔ)益肝腎、滋陰養(yǎng)血，白術(shù)健脾土利運(yùn)化，僵蠶善行頭面而直達(dá)病所。方中諸藥制成煎膏劑以滋補(bǔ)為主，藥性滋潤(rùn)，共奏調(diào)理沖任、補(bǔ)益肝腎、滋陰養(yǎng)血、消斑養(yǎng)顏之功效，臨床應(yīng)用療效確切，值得推廣應(yīng)用。采用高效液相色譜法對(duì)丹參的主要成分丹參酮!A進(jìn)行含量測(cè)定，方法準(zhǔn)確方便，重現(xiàn)性好，且簡(jiǎn)單易行。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄 33.

[2]中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚科學(xué)會(huì)色素病學(xué)組.黃褐斑的臨床診斷和療效判定標(biāo)準(zhǔn)[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，1999，13：209.

[3]呂圭源，王一濤.中藥新產(chǎn)品開發(fā)學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：561-565.