趙光明,楊光敏,張朝鵬,楊增岐

(1.西北農林科技大學動物醫(yī)學院,陜西楊陵 712100;2.陜西省動物疫病預防控制中心,陜西西安 710016;3.西安市未央區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所,陜西西安 710016)

朱鹮(Nipponia nip pon)屬鸛形目,鹮科,朱鹮屬,是我國一級保護野生動物,世界一級瀕危物種。近年來,通過人工繁殖,朱鹮種群數(shù)量不斷擴大。目前,我國已解決了朱鹮人工飼養(yǎng)繁殖等方面的難題,但關于疾病方面的研究較少[1]。2009年4月27日,陜西省珍稀動物搶救飼養(yǎng)研究中心存欄的朱鹮發(fā)生不明原因死亡,截至4月30日,陸續(xù)死亡5只,發(fā)病死亡朱鹮均無典型臨床癥狀。為查明死因,該中心將環(huán)號分別為335號和586號的2只病死朱鹮送陜西省動物疫病預防控制中心進行診斷。經實驗室診斷,確診為沙門菌感染[2]。通過本試驗,為朱鹮人工飼養(yǎng)繁殖過程中疾病的研究與診斷提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 陜西省珍稀動物搶救飼養(yǎng)研究中心病死朱鹮2只,環(huán)號分別為335號和586號。

1.1.2 主要試劑 高致病性禽流感RT-PCR試劑盒(中國流行病學中心提供,批號20090317);新城疫RT-PCR試劑盒,北京世紀元亨動物防疫技術公司產品,批號ND 20090313;麥康凱平板,普通營養(yǎng)平板,營養(yǎng)肉湯,細菌生化鑒定用糖發(fā)酵管,革蘭染液[3]。

1.1.3 主要儀器 Biometra PCR擴增儀,Wealtc凝膠成像系統(tǒng),生化培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 病理剖檢及樣品采集 對送檢的2只病死朱鹮進行病理剖檢,同時無菌采集肺臟、肝臟、腎臟以及胸腔滲出液。

1.2.2 病原學鑒定 取病死朱鹮肺臟、肝臟和腎臟分別觸片,進行美藍染色,鏡檢;采集腺胃潰瘍處蟲體壓片,鏡檢。

取病死朱鹮肺臟、腎臟以及胸腔滲出液按照試劑盒提供的方法和步驟,分別進行高致病性禽流感和新城疫病原的RT-PCR檢測。

取無菌采集的病死朱鹮肺臟、肝臟和腎臟,分別接種于營養(yǎng)肉湯中進行增菌培養(yǎng),經24 h后,取肉湯培養(yǎng)物分別接種于營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,37℃培養(yǎng)24 h,觀察菌落特征,選取典型菌落接種到營養(yǎng)肉湯進行純培養(yǎng),取培養(yǎng)24 h的純培養(yǎng)物接種于糖發(fā)酵管中,37℃培養(yǎng)24 h～48 h,觀察發(fā)酵情況[4]。

1.2.3 藥敏試驗 無菌條件下取分離純化的細菌接種于整個營養(yǎng)瓊脂平板,將氟苯尼考等6種常用藥品的藥敏片均勻貼放到平板上。將平板倒置于37℃溫箱培養(yǎng)24 h,觀察藥物的抑菌情況,判定各種藥物的敏感程度。

2 結果

2.1 病理剖檢變化

經剖檢,病死朱鹮肝臟呈土黃色,腫大,邊緣不清,有出血斑,體腔有血凝塊;腎臟腫脹發(fā)黑;腺胃有大小不一潰瘍灶,潰瘍灶可見暗黑色線狀蟲體;十二指腸和泄殖腔有不同程度出血;肺臟顏色正常,無出血和充血;喉頭氣管基本正常,無出血和黏性分泌物。

2.2 病原學鑒定結果

2.2.1 細菌分離鑒定

2.2.1.1 鏡檢 內臟觸片,經美藍染色鏡檢可見多量無芽孢短小桿菌。

2.2.1.2 細菌培養(yǎng) 病料接種于營養(yǎng)肉湯37℃培養(yǎng)24 h后,肉湯呈均勻混濁,于管底生成黏稠沉淀物,培養(yǎng)液頂層形成菌環(huán);營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)24 h后,可見淡灰白色、濕潤、圓形,直徑約1 mm～3 mm菌落,麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成淡黃色小菌落。

2.2.1.3 生化試驗 經糖發(fā)酵等生化培養(yǎng)試驗,分離菌能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖等,不發(fā)酵乳糖、蔗糖等,其生化特性與沙門菌相同(表1)。

表1 生化試驗結果Table1 Results of biochem icalassay

2.2.1.4 藥敏試驗 分離菌對慶大霉素、氟苯尼考高度敏感,對卡那霉素、新霉素中度敏感。

2.2.2 高致病性禽流感和新城疫病原的檢測 采集的肺臟、腎臟、胸腔滲出液等病料經RT-PCR檢測,高致病性禽流感和新城疫均為陰性(圖1和圖2)。

圖1 高致病性禽流感病毒RT-PCR電泳圖Fig.1 RT-PCR Gel electrophoresisof HPA IV

圖2 新城疫病毒RT-PCR電泳圖 Fig.2 RT-PCR Gel electrophoresis of NDV

2.2.3 寄生蟲鑒定 腺胃潰瘍處壓片鏡檢可見15 mm左右線蟲蟲體,初步鑒定為禽胃線蟲。

2.3 處理措施

經過對死亡病鳥進行無害化深埋處理,對病鳥隔離飼養(yǎng),選擇敏感藥物對癥治療,同群鳥加強飼養(yǎng)管理,對飼養(yǎng)環(huán)境、用具物品進行全面嚴格消毒,在飼料中添加敏感藥物進行全群預防性給藥等措施,經1周左右治療后,取得良好效果,無新病例發(fā)生。

3 討論

朱鹮屬我國一級保護野生動物,在野外生存條件下抵抗力較強,不容易感染疾病,但是在人工飼養(yǎng)條件下,當在飼養(yǎng)管理不當、環(huán)境變化等時,機體抵抗力下降[5],容易發(fā)病。我中心曾于2006年診斷一起朱鹮新城疫與大腸埃希菌混合感染的病例[6]。

在剖檢過程中,發(fā)現(xiàn)死鳥肌胃內有多量線蟲蟲體,經顯微鏡檢,初步診斷為禽胃線蟲。禽胃腺蟲嚴重感染時,可導致患病鳥消瘦、貧血、抵抗力下降,有其他疾病混合感染時,可加重感染程度[7]。

沙門菌病是一種重要的人獸共患病,具有廣泛的動物宿主。當環(huán)境衛(wèi)生不良、過度擁擠、氣候惡劣、發(fā)生其它病毒或者寄生蟲感染時,可導致易感動物發(fā)病死亡。目前正處于朱鹮發(fā)情求偶季節(jié),群體之間的爭斗、飼養(yǎng)管理不當?shù)染梢鸹蚣又刂禧q的發(fā)病和死亡。

現(xiàn)已報道的朱鹮疾病有大腸埃希菌病、新城疫、結核病、瘤胃線蟲等[8-9],加上本次確診因沙門菌感染引起死亡,說明人工飼養(yǎng)環(huán)境下朱鹮疾病種類越來越復雜,在大力開展朱鹮人工繁殖過程中,疾病因素引起的死亡應引起足夠的重視,建議在人工飼養(yǎng)繁殖以及保護工作中采取積極預防措施,確保朱鹮種群的健康。

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[5]馬軍權,賈康勝,趙鵬鵬,等.朱鹮的應激反應及其防治[J].畜牧獸醫(yī)雜志,2007,26(2):73.

[6]賈文孝,趙合平,趙光明,等.朱鹮新城疫與大腸桿菌混合感染[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,43(3):63.

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