趙光明,楊光敏,張朝鵬,楊增岐

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,陜西楊陵 712100;2.陜西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,陜西西安 710016;3.西安市未央?yún)^(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,陜西西安 710016)

朱鹮(Nipponia nip pon)屬鸛形目,鹮科,朱鹮屬,是我國(guó)一級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物,世界一級(jí)瀕危物種。近年來(lái),通過(guò)人工繁殖,朱鹮種群數(shù)量不斷擴(kuò)大。目前,我國(guó)已解決了朱鹮人工飼養(yǎng)繁殖等方面的難題,但關(guān)于疾病方面的研究較少[1]。2009年4月27日,陜西省珍稀動(dòng)物搶救飼養(yǎng)研究中心存欄的朱鹮發(fā)生不明原因死亡,截至4月30日,陸續(xù)死亡5只,發(fā)病死亡朱鹮均無(wú)典型臨床癥狀。為查明死因,該中心將環(huán)號(hào)分別為335號(hào)和586號(hào)的2只病死朱鹮送陜西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心進(jìn)行診斷。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷,確診為沙門(mén)菌感染[2]。通過(guò)本試驗(yàn),為朱鹮人工飼養(yǎng)繁殖過(guò)程中疾病的研究與診斷提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 陜西省珍稀動(dòng)物搶救飼養(yǎng)研究中心病死朱鹮2只,環(huán)號(hào)分別為335號(hào)和586號(hào)。

1.1.2 主要試劑 高致病性禽流感RT-PCR試劑盒(中國(guó)流行病學(xué)中心提供,批號(hào)20090317);新城疫RT-PCR試劑盒,北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)公司產(chǎn)品,批號(hào)ND 20090313;麥康凱平板,普通營(yíng)養(yǎng)平板,營(yíng)養(yǎng)肉湯,細(xì)菌生化鑒定用糖發(fā)酵管,革蘭染液[3]。

1.1.3 主要儀器 Biometra PCR擴(kuò)增儀,Wealtc凝膠成像系統(tǒng),生化培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 病理剖檢及樣品采集 對(duì)送檢的2只病死朱鹮進(jìn)行病理剖檢,同時(shí)無(wú)菌采集肺臟、肝臟、腎臟以及胸腔滲出液。

1.2.2 病原學(xué)鑒定 取病死朱鹮肺臟、肝臟和腎臟分別觸片,進(jìn)行美藍(lán)染色,鏡檢;采集腺胃潰瘍處蟲(chóng)體壓片,鏡檢。

取病死朱鹮肺臟、腎臟以及胸腔滲出液按照試劑盒提供的方法和步驟,分別進(jìn)行高致病性禽流感和新城疫病原的RT-PCR檢測(cè)。

取無(wú)菌采集的病死朱鹮肺臟、肝臟和腎臟,分別接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中進(jìn)行增菌培養(yǎng),經(jīng)24 h后,取肉湯培養(yǎng)物分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,37℃培養(yǎng)24 h,觀(guān)察菌落特征,選取典型菌落接種到營(yíng)養(yǎng)肉湯進(jìn)行純培養(yǎng),取培養(yǎng)24 h的純培養(yǎng)物接種于糖發(fā)酵管中,37℃培養(yǎng)24 h～48 h,觀(guān)察發(fā)酵情況[4]。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 無(wú)菌條件下取分離純化的細(xì)菌接種于整個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板,將氟苯尼考等6種常用藥品的藥敏片均勻貼放到平板上。將平板倒置于37℃溫箱培養(yǎng)24 h,觀(guān)察藥物的抑菌情況,判定各種藥物的敏感程度。

2 結(jié)果

2.1 病理剖檢變化

經(jīng)剖檢,病死朱鹮肝臟呈土黃色,腫大,邊緣不清,有出血斑,體腔有血凝塊;腎臟腫脹發(fā)黑;腺胃有大小不一潰瘍?cè)?潰瘍?cè)羁梢?jiàn)暗黑色線(xiàn)狀蟲(chóng)體;十二指腸和泄殖腔有不同程度出血;肺臟顏色正常,無(wú)出血和充血;喉頭氣管基本正常,無(wú)出血和黏性分泌物。

2.2 病原學(xué)鑒定結(jié)果

2.2.1 細(xì)菌分離鑒定

2.2.1.1 鏡檢 內(nèi)臟觸片,經(jīng)美藍(lán)染色鏡檢可見(jiàn)多量無(wú)芽孢短小桿菌。

2.2.1.2 細(xì)菌培養(yǎng) 病料接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯37℃培養(yǎng)24 h后,肉湯呈均勻混濁,于管底生成黏稠沉淀物,培養(yǎng)液頂層形成菌環(huán);營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)24 h后,可見(jiàn)淡灰白色、濕潤(rùn)、圓形,直徑約1 mm～3 mm菌落,麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成淡黃色小菌落。

2.2.1.3 生化試驗(yàn) 經(jīng)糖發(fā)酵等生化培養(yǎng)試驗(yàn),分離菌能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖等,不發(fā)酵乳糖、蔗糖等,其生化特性與沙門(mén)菌相同(表1)。

表1 生化試驗(yàn)結(jié)果Table1 Results of biochem icalassay

2.2.1.4 藥敏試驗(yàn) 分離菌對(duì)慶大霉素、氟苯尼考高度敏感,對(duì)卡那霉素、新霉素中度敏感。

2.2.2 高致病性禽流感和新城疫病原的檢測(cè) 采集的肺臟、腎臟、胸腔滲出液等病料經(jīng)RT-PCR檢測(cè),高致病性禽流感和新城疫均為陰性(圖1和圖2)。

圖1 高致病性禽流感病毒RT-PCR電泳圖Fig.1 RT-PCR Gel electrophoresisof HPA IV

圖2 新城疫病毒RT-PCR電泳圖 Fig.2 RT-PCR Gel electrophoresis of NDV

2.2.3 寄生蟲(chóng)鑒定 腺胃潰瘍處壓片鏡檢可見(jiàn)15 mm左右線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)體,初步鑒定為禽胃線(xiàn)蟲(chóng)。

2.3 處理措施

經(jīng)過(guò)對(duì)死亡病鳥(niǎo)進(jìn)行無(wú)害化深埋處理,對(duì)病鳥(niǎo)隔離飼養(yǎng),選擇敏感藥物對(duì)癥治療,同群鳥(niǎo)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境、用具物品進(jìn)行全面嚴(yán)格消毒,在飼料中添加敏感藥物進(jìn)行全群預(yù)防性給藥等措施,經(jīng)1周左右治療后,取得良好效果,無(wú)新病例發(fā)生。

3 討論

朱鹮屬我國(guó)一級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物,在野外生存條件下抵抗力較強(qiáng),不容易感染疾病,但是在人工飼養(yǎng)條件下,當(dāng)在飼養(yǎng)管理不當(dāng)、環(huán)境變化等時(shí),機(jī)體抵抗力下降[5],容易發(fā)病。我中心曾于2006年診斷一起朱鹮新城疫與大腸埃希菌混合感染的病例[6]。

在剖檢過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)死鳥(niǎo)肌胃內(nèi)有多量線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)體,經(jīng)顯微鏡檢,初步診斷為禽胃線(xiàn)蟲(chóng)。禽胃腺蟲(chóng)嚴(yán)重感染時(shí),可導(dǎo)致患病鳥(niǎo)消瘦、貧血、抵抗力下降,有其他疾病混合感染時(shí),可加重感染程度[7]。

沙門(mén)菌病是一種重要的人獸共患病,具有廣泛的動(dòng)物宿主。當(dāng)環(huán)境衛(wèi)生不良、過(guò)度擁擠、氣候惡劣、發(fā)生其它病毒或者寄生蟲(chóng)感染時(shí),可導(dǎo)致易感動(dòng)物發(fā)病死亡。目前正處于朱鹮發(fā)情求偶季節(jié),群體之間的爭(zhēng)斗、飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)染梢鸹蚣又刂禧q的發(fā)病和死亡。

現(xiàn)已報(bào)道的朱鹮疾病有大腸埃希菌病、新城疫、結(jié)核病、瘤胃線(xiàn)蟲(chóng)等[8-9],加上本次確診因沙門(mén)菌感染引起死亡,說(shuō)明人工飼養(yǎng)環(huán)境下朱鹮疾病種類(lèi)越來(lái)越復(fù)雜,在大力開(kāi)展朱鹮人工繁殖過(guò)程中,疾病因素引起的死亡應(yīng)引起足夠的重視,建議在人工飼養(yǎng)繁殖以及保護(hù)工作中采取積極預(yù)防措施,確保朱鹮種群的健康。

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