梁 衛(wèi) 張麗玲 龔 林 金 琳 蔡 鷹 黃重發(fā) 唐永明
解放軍第454醫(yī)院(南京 210002)
清熱化瘀滋陰方對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡及臨床指標(biāo)的影響*
梁 衛(wèi) 張麗玲 龔 林 金 琳 蔡 鷹 黃重發(fā) 唐永明
目的觀察中藥清熱化瘀滋陰方對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡及臨床指標(biāo)的影響。方法 選取SLE患者80例,隨機(jī)分為治療組(清熱化瘀滋陰方聯(lián)合激素)與對(duì)照組(單用激素)各40例,服藥3個(gè)月比較兩組患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡情況及臨床指標(biāo)變化。結(jié)果兩組治療后外周血淋巴細(xì)胞凋亡率均較治療前明顯下降,治療組明顯低于對(duì)照組;治療組血常規(guī)、血沉、免疫球蛋白(IgG)、補(bǔ)體C3、抗核抗體(ANA)、抗ds-DNA抗體均較治療前明顯改善,且白細(xì)胞、血小板、C3、IgG、ANA指標(biāo)的恢復(fù)優(yōu)于對(duì)照組。結(jié)論清熱化瘀滋陰方治療活動(dòng)期SLE有明顯優(yōu)勢(shì),臨床指標(biāo)明顯改善,其可能通過降低外周血淋巴細(xì)胞凋亡率,改善免疫紊亂而發(fā)揮作用。
系統(tǒng)性紅斑狼瘡 清熱化瘀滋陰方
解放軍第454醫(yī)院(南京 210002)
*南京軍區(qū)“十一五”攻關(guān)課題面上項(xiàng)目(No.06MA73)
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種多因素參與的多臟器多系統(tǒng)損害并伴有多種免疫學(xué)異常的自身免疫性疾病。目前多采用激素、免疫抑制劑治療該病,但不良反應(yīng)較多。我們近年針對(duì)SLE活動(dòng)期以血熱瘀毒、腎虛陰虧證為多見,采用清熱化瘀滋陰方配合激素治療SLE患者40例,臨床各項(xiàng)指標(biāo)好轉(zhuǎn)。研究發(fā)現(xiàn)SLE發(fā)病與淋巴細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[1],筆者運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)SLE患者服藥前后外周血淋巴細(xì)胞凋亡率的變化,探討清熱化瘀滋陰方治療SLE的作用機(jī)制?,F(xiàn)報(bào)告如下。
1.1 臨床資料 選擇2006年12月~2008年12月解放軍第454醫(yī)院、江蘇省中醫(yī)院門診及住院SLE患者80例,隨機(jī)分為治療組與對(duì)照組各40例。治療組男性6例,女性34例;年齡18~60歲,平均30.5歲;病程2個(gè)月至5年,平均2.0年。對(duì)照組40例,男性5例,女性35例;年齡18~58歲,平均29.9歲;病程3個(gè)月至6年,平均2.3年。兩組資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。
1.2 病例選擇 西醫(yī)診斷按照1992年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)制定的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[2];中醫(yī)辨證參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[3]屬“熱毒、血瘀、陰虛”證。排除妊娠期、哺乳期婦女,合并有心、肝、腎、肺、腦、造血系統(tǒng)有嚴(yán)重?fù)p傷或嚴(yán)重感染者,以及其他自身免疫性疾病者。
1.3 治療方法 對(duì)照組予強(qiáng)的松30mg/d,頓服。治療組在此基礎(chǔ)上另予清熱化瘀滋陰方:水牛角片12g(先煎),生地黃 12g,麥冬 12g,丹皮 10g,赤芍 10g,金銀花18g,連翹12g,白花蛇舌草20g,青風(fēng)藤15g,秦艽10g,紫草10g,炒白術(shù)10g。每日1劑,加水300mL浸泡30min,水牛角片先煎30min,再加入其它藥同煎,武火煮沸后改文火煎20min,濃縮約100mL,每日2次溫服。兩組均以3個(gè)月為1個(gè)療程,治療1個(gè)療程。
1.4 檢測(cè)指標(biāo) (1)SLE患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。試劑與儀器:淋巴細(xì)胞分離液、Annexin VFITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒均購于深圳晶美生物工程有限公司;流式細(xì)胞儀為美國(guó)B&G公司生產(chǎn)。SLE患者外周血淋巴細(xì)胞的分離:分別抽取患者服藥前及服藥3個(gè)月后清晨空腹肘靜脈血2mL,置100g/L EDTA抗凝的無RNA酶試管中,用0.9%氯化鈉溶液對(duì)倍稀釋,緩慢加入2mL淋巴細(xì)胞分離液之上,2000r/min離心20min,取淋巴細(xì)胞層,加0.9%氯化鈉溶液稀釋洗滌,1500r/min離心15min,棄上清,再加0.9%氯化鈉溶液1mL稀釋混勻,移入1.5mL Eppendorf管,1500r/min離心10min,棄上清。流式細(xì)胞儀檢測(cè)SLE患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡率:制備外周血淋巴細(xì)胞,去離子水按1∶4稀釋結(jié)合緩沖液,用預(yù)冷PBS洗細(xì)胞2次,用250μL結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞,濃度為1×106/mL,取100μL細(xì)胞懸液于5mL流式管中,加5μL Annexin VFITC和10μL 20μg/mL碘化丙錠溶液,混勻后于室溫避光孵育15min,加400μL PBS,流式細(xì)胞儀分析結(jié)果。(2)臨床檢測(cè)指標(biāo):血常規(guī)采用五分類血細(xì)胞分析儀 (美國(guó)Beckman-coulter公司生產(chǎn));血沉采用E&H-64型儀器及ESR試劑盒檢測(cè) (Steellex Instrument公司生產(chǎn));IgG、補(bǔ)體C3、ANA、抗ds-DNA抗體采用美國(guó)Beckman-Coulter公司生產(chǎn)的儀器及IgG、補(bǔ)體C3、ANA、抗ds-DNA抗體試劑盒檢測(cè)。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以(±s)表示,采用 t檢驗(yàn)。
2.1 兩組治療前后外周血淋巴細(xì)胞凋亡率比較 見表1。結(jié)果表明,活動(dòng)期SLE患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡率明顯升高,治療組治療后淋巴細(xì)胞凋亡率較治療前明顯下降(P<0.01),與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.01)。
2.2 兩組治療前后臨床指標(biāo)比較 見表2,表3。結(jié)果表明,治療組治療后較治療前ESR、IgG、ANA、抗ds-DNA抗體明顯下降(P<0.05或 0.01),補(bǔ)體C3及WBC、RBC、PLT明顯升高,與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)。對(duì)照組治療后ANA明顯下降(P < 0.01),補(bǔ)體 C3、WBC、RBC、PLT 顯著升高(P <0.05或0.01)。兩組治療后比較,治療組改善明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05或0.01)。
表1 兩組治療前后外周血淋巴細(xì)胞凋亡率比較(%,±s)
表1 兩組治療前后外周血淋巴細(xì)胞凋亡率比較(%,±s)
與本組治療前比較,*P<0.05,**P<0.01;與對(duì)照組治療后比較,△P <0.05,△△P <0.01。下同
n組別治療組對(duì)照組40 40治療前11.97±3.08 13.11±2.58治療后2.26±0.62**△△6.35±1.46**
表2 兩組治療后血常規(guī)變化情況比較 (±s)
表2 兩組治療后血常規(guī)變化情況比較 (±s)
組別治療組(n=40)對(duì)照組(n=40)治療前治療后治療前治療后WBC(×109/L)3.05±0.33 4.52±0.98**△△3.10±0.37 3.41±0.85*RBC(×1012/L)3.47±0.28 4.12±0.38**3.48±0.93 3.91±0.67*PLT(×109/L)85.26±27.31 145.16±30.12**△△86.18±28.05 119.51±32.76**
表3 兩組治療后免疫學(xué)指標(biāo)變化情況比較 (±s)
表3 兩組治療后免疫學(xué)指標(biāo)變化情況比較 (±s)
組別抗ds-DNA抗體治療組(n=40)對(duì)照組(n=40)治療前治療后治療前治療后ESR(mm/h)57.80±28.31 45.35±21.63*60.78±35.65 53.17±9.61補(bǔ)體C3(g/L)0.50±0.18 0.95±0.26**△△0.46±0.09 0.79±0.15**IgG(g/L)22.58±4.22 18.37±3.69**△20.86±3.36 19.24±5.28 ANA(%)1∶(163.24±13.67)1∶(73.72±13.16)**△△1∶(145.31±13.50)1∶(83.18±13.55)**80.15±25.32 63.08±19.56**75.82±23.52 70.95±20.15
SLE是一種全身性多器官自身免疫病,可侵犯身體多個(gè)器官,目前尚無特效療法。中醫(yī)學(xué)將其歸屬于“陰陽毒”、“日曬瘡”、“痹證”等范疇,多認(rèn)為由于先天稟賦不足、肝腎陰虧,加之七情內(nèi)傷、勞倦過度、飲食內(nèi)傷、六淫侵襲、日光曝曬,致使邪毒乘虛而入,熱毒灼熾,耗傷津液,血脈瘀阻,初起侵襲肌表血脈筋骨,進(jìn)而內(nèi)侵臟腑。本病初期的主要病機(jī)為熱熾、血瘀、陰虧。根據(jù)這一特點(diǎn),我們擬用清熱化瘀滋陰方清熱涼血、解毒散瘀以治其標(biāo),養(yǎng)陰扶正以顧護(hù)陰液而治其本。方中以水牛角、白花蛇舌草瀉火解毒、涼血止血為主,配金銀花、連翹清熱解毒并透邪熱,取“入營(yíng)猶可透熱轉(zhuǎn)氣”之意;生地黃以清熱涼血、養(yǎng)陰生津,與麥冬共同顧護(hù)陰液;赤芍、丹皮涼血散瘀;紫草涼血活血、解毒化斑;青風(fēng)藤活血通絡(luò)止痛;生白術(shù)健脾化濕,顧護(hù)中焦脾胃。諸藥合用,補(bǔ)虛瀉實(shí),正邪兼顧,瀉不傷正,涼血止血又活血散瘀。藥理研究證實(shí)水牛角片能縮短DIC大鼠凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間,升高血小板數(shù)[4];白花蛇舌草可抗炎、調(diào)節(jié)免疫活性,其富含的熊果酸和齊墩果酸有增強(qiáng)免疫作用[5];赤芍總苷能降低血瘀大鼠血液黏度、纖維蛋白原含量和紅細(xì)胞聚集指數(shù),減少紅細(xì)胞壓積,改善血液流變學(xué)指標(biāo)[6]。臨床觀察表明,清熱化瘀滋陰方有明顯升高WBC、RBC、PLT、補(bǔ)體C3及降低ESR、IgG、ANA、抗ds-DNA抗體的作用。
近年研究認(rèn)為SLE患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡加速,并與SLE的疾病活動(dòng)程度呈正相關(guān)[1]。正常生理情況下,細(xì)胞凋亡時(shí)凋亡小體可迅速被吞噬細(xì)胞或鄰近細(xì)胞吞噬。當(dāng)細(xì)胞凋亡率加快,凋亡小體不能被及時(shí)清除,其內(nèi)含的核小體釋放入血,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗DNA等多種自身抗體[7]。核小體作為自身抗原也可刺激機(jī)體產(chǎn)生核小體抗體,兩者結(jié)合形成免疫復(fù)合物,沉積于腎小球基底膜、血管內(nèi)膜等各組織器官,造成嚴(yán)重的免疫病理損傷[8]。另一方面,正常情況下發(fā)揮調(diào)理素功能的補(bǔ)體與巨噬細(xì)胞表面相應(yīng)補(bǔ)體受體結(jié)合,促使巨噬細(xì)胞吞噬、清除凋亡細(xì)胞。但SLE患者淋巴細(xì)胞的凋亡率升高,血清補(bǔ)體C3水平明顯下降,發(fā)揮調(diào)理素功能的補(bǔ)體減少,同時(shí)巨噬細(xì)胞表面相應(yīng)補(bǔ)體受體缺陷[9],導(dǎo)致巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的功能下降。因此SLE發(fā)病與淋巴細(xì)胞凋亡增多及凋亡細(xì)胞清除障礙密切相關(guān)。本研究觀察了清熱化瘀滋陰方對(duì)SLE患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡率的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),該方配合激素能明顯降低SLE患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡率,并顯著優(yōu)于單用激素,說明清熱化瘀滋陰方可能通過降低患者外周血淋巴細(xì)胞凋亡率,清除增多的凋亡細(xì)胞、凋亡小體及循環(huán)免疫復(fù)合物,調(diào)節(jié)免疫紊亂而發(fā)揮治療作用。至于該方對(duì)淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Fas/FasL、Bcl-2等基因表達(dá)的影響,有待進(jìn)一步研究。
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Effect of Qingrehuayuziyin Decoction on Lymphocyte Apoptosis and Other Clinical Indices of the Patients with Systemic Lupus Erythematosus
LIANG Wei,ZHANG Li-ling,Gong lin,et al
454 Military Hospital of China(Nanjing 210002)
Objective:To investigate the effect of Qingrehuayuziyin Decoction on lymphocyte apoptosis and other clinical indices of the patients with systemic lupus erythematosus(SLE).Methods:80 SLE patients were selected and divided randomly into two groups.40 patients in the treatment group were given the Qingrehuayuziyin Decoction combined with the hormone.40 patients in the control group were just given the hormone.After 3 months,the lymphocyte apoptosis and the clinical indices were compared between two groups.Results:The rates of lymphocyte apoptosis decreased significantly in two groups.Meanwhile,the rate in the treatment group was lower obviously than that of the control group.Compared with the control group,there were some indices improving significantly in the treatment group including:the blood routine examination,the blood sedimentation,the IgG,the complement C3,the anti-nuclear antibody (ANA)and the double stain DNA antibody.In the treatment group,the recoveries of the leukocyte,platelet,C3,IgG and ANA were also superior to those of the control group.Conclusion:Qingrehuayuziyin Decoction has obvious advantage in SLE of active stage.From this method,the clinical indices improve obviously.This is related to the suppressing lymphocyte apoptosis and the modifying the immune status.
Systemic lupus erythematosus;Qingrehuayuziyin Decoction
R593.24
B
1004-745X(2010)01-0041-03
2009-07-02)