馮 慧,林月英

(天津市大港區(qū)藥品檢驗所,天津 300270)

咽炎片用于治療慢性咽炎引起的咽干、咽癢、刺激性咳嗽,具有養(yǎng)陰潤肺,清熱解毒,清咽利喉,鎮(zhèn)咳止癢的功效?，F(xiàn)行標準為國家食品藥品監(jiān)督管理局標準(試行)YBZ24862005,其含量測定項下測定牡丹皮中芍藥苷含量。本品處方君藥為玄參,具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結的功效,用于熱入營血、溫毒發(fā)斑、熱病傷陰、舌絳煩渴、津傷便秘、骨蒸勞嗽等癥[1]。為更好地控制本品質量,采用高效液相色譜法,測定玄參中哈巴俄苷和肉桂酸含量,以加強對咽炎片的質量控制。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀 LC-2010AHT(工作站LC—Solution)。甲醇、乙腈、冰醋酸均為色譜純,純化水;對照品：哈巴俄苷(中國藥品生物制品檢定所,批號

0756-200110 ),肉桂酸(中國藥品生物制品檢定所,批號 0796-200006);樣品：咽炎片 (批號 20080022、20080026、20080028)。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 色譜柱 DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈為流動相 A,以 1%冰醋酸為流動相 B,按表1進行梯度洗脫[2];檢測波長為 278nm;流速為 1ml/min;柱溫 40℃。理論板數(shù)按哈巴俄苷峰計算不低于 5000。

表1 梯度洗脫表

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取對照品哈巴俄苷10.30 mg,肉桂酸 10.25mg,加甲醇制成每 1ml含哈巴俄苷20.6μg與肉桂酸 20.5μg的混合溶液。

2.2.2 供試品溶液 取“裝量差異”項下本品內(nèi)容物,研細,取 2g,精密稱定,置 50ml量瓶中,加入甲醇適量,超聲處理 30min,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 按處方比例,制備不含玄參的陰性樣品,按“2.2.2”項下的方法制備陰性樣品溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液 10 μl,注入液相色譜儀,見圖 1,結果表明陰性無干擾。

2.3 線性關系考查 取哈巴俄苷與肉桂酸對照品適量,精密稱定,加 30%甲醇使溶解,制成每 1ml中分別含哈巴俄苷 4.12、8.24、16.48、32.96、65.92 μg及肉桂酸 1.23、2.46、4.92、9.84、19.68 μg的混合對照品溶液,分別精密吸取 10μl,注入高效液相色譜儀,按“2.1”項下色譜條件分析,以對照品進樣的量(μg)和峰面積值進行回歸分析,得哈巴俄苷回歸方程：Y=2.544×103X+9.675×103,r=0.9999;肉桂酸回歸方程為 Y=8.863×103X+1.368×104,r=0.9999。結果表明,哈巴俄苷在 41.2 ～ 659.2μg、肉桂酸在12.3～196.8μg范圍內(nèi)線性良好。

2.4 精密度試驗 精密量取含哈巴俄苷 16.48μg及肉桂酸 4.92μg的混合對照品溶液 10μl,注入高效液相色譜儀,按“2.1”項下色譜條件分析,連續(xù)重復進樣6次,結果哈巴俄苷的峰面積值的 RSD為 0.19%,肉桂酸的峰面積值的 RSD為 0.38%,結果符合要求。

2.5 重復性試驗 取同一批號(20080022)樣品,共 6份,按照“2.2.2”項下方法制備,按“2.1”項下色譜條件分析,測定每份樣品中哈巴俄苷和肉桂酸的含量。結果樣品中哈巴俄苷的平均含量為 0.228mg/g,RSD為 1.4%;肉桂酸的平均含量為 0.0643mg/g,RSD為0.8%,結果符合要求。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一批號(20080022)樣品,取 1份,剪碎,取 1g,按照“2.2.2”項下供試品溶液制備操作,按“2.1”項下色譜條件分析 ,分別在 0、5、10、15、20、25、30、35和 40h進樣,測定樣品中哈巴俄苷和肉桂酸峰面積,測得哈巴俄苷峰面積值的 RSD為 1.0%,肉桂酸峰面積值的 RSD為 0.9%,結果表明供試品溶液在 40h內(nèi)測定穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 取同一批號(20080022)樣品,取 1 g,共 6份,精密稱定,置 50ml量瓶中,分別加入哈巴俄苷對照品溶液(0.206mg/ml)1ml,肉桂酸對照品溶液(0.0205mg/ml)3ml,加入甲醇適量,再按照“2.2.2”項下操作,制得供回收率用供試品溶液,按“2.1”項下色譜條件分析,計算回收率,結果哈巴俄苷平均回收率為 103.03%,RSD為 1.97%;肉桂酸平均回收率為98.99%,RSD為 1.77%。試驗結果符合要求。

圖 1 對照品(A)樣品(B)陰性樣品(C)HPLC色譜圖

2.8 樣品測定 取 (批號為 20080022、20080026、20080028)樣品,按照“2.2.2”項下供試品溶液制備方法操作,按“2.1”項下色譜條件分析,測定各批樣品中哈巴俄苷與肉桂酸含量,結果見表1。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 提取時間的選擇 用 30%甲醇作為溶劑處理樣品,考查超聲提取 20、30、40min,結果表明,超聲處理30min樣品中的哈巴俄苷和肉桂酸含量與 40min結果相當,故超聲處理時間定為 30min。

3.2 流動相的選擇 本文采用梯度洗脫的方法同時測定哈巴俄苷和肉桂酸兩種成分的含量,在 20min內(nèi)上述兩種成分即可達到基線分離。

3.3 檢測波長的確定 哈巴俄苷最大吸收波長為 278 nm,肉桂酸最大吸收波長為 285nm,試驗發(fā)現(xiàn),在 278 nm波長處,供試品色譜中,肉桂酸色譜峰與雜質峰達到基線分離,分離度大于 1.5,因此采用 278nm同時測定上述兩種成分的含量。

3.4 本實驗同時測定玄參中哈巴俄苷和肉桂酸兩種成分含量,為咽炎片的質量控制提供了新的方法。

1 中國藥典.一部.2005：76

2 蔡少青,謝麗華,王建華,等.中藥玄參中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色譜法的測定.藥物分析雜志,2000,20(3)：191