劉麗華,楊 柳,孟慶軍,王金磊

(天津中新藥業(yè)第六中藥廠,天津 300401)

清咽滴丸由人工牛黃、訶子、青黛、甘草、冰片、薄 荷腦等中藥組成,經(jīng)臨床應(yīng)用,療效顯著,具有疏風(fēng)清熱,解毒利咽之功效,用于風(fēng)熱喉痹、咽痛、咽干、口渴,或微惡風(fēng)、發(fā)熱、咽部紅腫、急性咽炎見上述證候者。本品君藥訶子是使君子科落葉喬本植物 TerminaliachebulaRetz的成熟果實(shí)[1],含有訶子酸、訶黎勒酸、1,3,6-三沒食子?；咸烟?還含有多種酚酸性成分,其中以沒食子酸為典型[2],現(xiàn)代藥理研究表明,訶子中所含沒食子酸具有抗 HBsAg作用。為有效的定量控制藥品質(zhì)量,采用高效液相色譜法[3-5]對清咽滴丸中沒食子酸的含量進(jìn)行測定研究,結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200高效液相色譜儀,AEG-220G電子天平(日本島津公司);超聲波清洗器(250W)。

1.2 試藥 沒食子酸對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供,批號 110831-200302,供含量測定用);甲醇為色譜純;水為高純水;其他所用試劑均為分析純;清咽滴丸(天津市第六中藥廠提供,批號為 627032、628018、628023、080301、080302、080303)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Luna-C18(250mm×4.6 mm,5μm);流動相：甲醇 -0.1%磷酸水溶液(15∶85);檢測波長 ：270nm;流速：1ml/min;柱溫：室溫 ;進(jìn)樣量：20μl。在該色譜條件下,樣品中沒食子酸可達(dá)基線分離,其他成分對測定無干擾,理論板數(shù)按沒食子酸計(jì)算大于 3000。結(jié)果見圖 1。

圖 1 陰性對照(A)對照品(B)供試品(C)HPLC色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取沒食子酸對照品適量,加 50%甲醇配制成濃度為 0.020mg/ml的溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取樣品粉末約 200mg置10ml量瓶中,加入 50%甲醇溶液適量,超聲溶解,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。

2.2.3 訶子陰性對照溶液 取按處方量和工藝制備的缺訶子陰性對照品粉末適量,精密稱定,照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備,即得。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取沒食子酸對照品 10.1 mg置 10ml量瓶中,加 50%甲醇超聲溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密吸取 3ml置 25ml量瓶中,加 50%甲醇超聲溶解并稀釋至刻度,搖勻。精密吸取上述對照品溶液 1、2、3、5、7和 10ml分別置于 10ml量瓶中,加50%甲醇溶液稀釋至刻度 ,配得 1、2、3、4、5、6號溶液 。分別精密吸取 1、2、3、4、5、6號溶液各 20 μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積。并以峰面積(Y)對沒食子酸的進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程：Y=2809.7X-7.7047,r=1。沒食子酸對照品進(jìn)樣量在 0.2424～2.4240μg范圍內(nèi),與峰面積具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)性顯著。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份對照品溶液 20 μl,在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣 6次,記錄色譜圖,測定其峰面積積分值。結(jié)果其 RSD為 0.25%,表明精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取同一樣品約 200mg,共 6份,精密稱定,照上述“2.2.2”項(xiàng)下方法制得供試品溶液6份,分別精密吸取 20μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積,并計(jì)算含量。結(jié)果平均含量為0.1033%,RSD為 1.72%,表明具有良好的重復(fù)性。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一份供試品溶液,精密吸取 20 μl,分別于 0、2、4、8、12和 24h,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積。結(jié)果其 RSD為 0.52%,表明供試品溶液在 24h內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品粉末約 100 mg,共 6份,精密稱定,分別加入一定量的沒食子酸對照品,照“2.2.2”項(xiàng)下方法制得供試品溶液后進(jìn)樣測定峰面積,并計(jì)算回收率,得平均回收率為 96.96%,RSD為 1.29%,結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測定 精密稱取不同批號的樣品粉末 200 mg,按“2.2.2”供試品溶液的制備方法制備,在上述色譜條件下進(jìn)行測定。精密吸取對照品溶液(每 1ml中含沒食子酸 0.020mg)與供試品溶液各 20μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積,計(jì)算沒食子酸含量,結(jié)果見表2。

表2 清咽滴丸中沒食子酸的含量(n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 根據(jù)對清咽滴丸光譜圖的分析,在 270nm處沒食子酸有最大吸收,而且其他成分在此吸收波長處對其沒有干擾,因此選定其檢測波長為270nm。

3.2 流動相的選擇 實(shí)驗(yàn)中對多種流動相進(jìn)行優(yōu)化,最終選用甲醇 -0.1%磷酸水溶液(15∶85),在此流動相條件下,樣品中沒食子酸可達(dá)基線分離。

3.3 溶劑的選擇 由于清咽滴丸是包衣滴丸,其包衣成分既親水性又親酯性,因此選用 50%甲醇作為溶劑,對清咽滴丸有很好的溶解性。

3.4 訶子中含游離的和絡(luò)合的沒食子酸,測定絡(luò)合的沒食子酸需加酸水解,使絡(luò)合的沒食子酸游離,然后測定總沒食子酸含量,研究時(shí)發(fā)現(xiàn),清咽滴丸的包衣在10%鹽酸水解過程中對沒食子酸測定有影響,故滴丸中沒食子酸的測定不進(jìn)行水解,只檢測游離的沒食子酸含量。

3.5 該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,可用于清咽滴丸中沒食子酸的含量測定,能夠進(jìn)一步有效的定量控制藥品質(zhì)量。

1 中國藥典.一部.2000：146

2 任曉偉,俞騰飛.蒙藥訶子研究進(jìn)展.中國民族醫(yī)藥雜志,1999,5(2)：48

3 陶淑娟,邵太麗,畢開順.高效液相色譜法測定蒙藥那如 -3丸中沒食子酸的含量.時(shí)珍國醫(yī)國藥,2005,16(1)：2

4 張鈺泉,毛泉明,張寧.高效液相色譜法測定清咽含片中沒食子酸的含量.基層中藥雜志,2002,16(3)：9

5 其樂木格,照日格圖.高效液相色譜法測定蒙藥沙日 -湯中沒食子酸的含量.中國民族民間醫(yī)藥,2008,12：16