范曉艷,呂冬霞,劉 爽,金岳雷

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

毛尖蘑子實體叢生,每叢分枝3～ 7枚,菌蓋直徑3～ 7cm,初傘形成后平展。菌肉細(xì)膩,肉厚。初現(xiàn)蕾呈白色,成熟時呈黃褐色。菌柄基部粗大,頂端細(xì)尖 ,形似錐把 ,實心,質(zhì)脆,長 4～ 7cm,粗1.0～ 1.2cm。早生者多為單株生長,旺盛期多為叢生[1]。毛尖蘑屬珍貴野生菌,此菌不同于其它菌類生于朽木,而是生長在暴露于陽光下的采金尾沙上,因此稱之為毛尖金蘑。個體非常小,香味濃郁,口感鮮美,味道極佳。毛尖蘑是我們黑龍江省特有的食、藥用真菌,其子實體營養(yǎng)豐富,是食品、醫(yī)藥、保健品行業(yè)開發(fā)利用的寶貴資源。真菌作為天然藥物的重要來源之一,生物活性十分廣泛,其中許多具有抗腫瘤作用,是篩選和開發(fā)各種腫瘤治療藥物的良好資源。本實驗采用常規(guī)方法對毛尖蘑中的粗多糖進(jìn)行提取,比較在不同浸泡溫度下的提取率,探討毛尖蘑粗多糖提取的最佳工藝,為毛尖蘑粗多糖的提取提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

電子天平(上海恒科技有限公司),粉碎機(jī) (溫嶺市創(chuàng)力藥材器械廠 ),電熱恒溫水浴槽(余兆市遠(yuǎn)東數(shù)控儀器廠),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE-52A(上海亞榮生化儀器廠),循環(huán)水式多用真空泵 SHB-Ⅲ (鄭州長城科技工貿(mào)有限公司 )。

毛尖蘑子實體(大興安嶺呼瑪縣韓家園林業(yè)局松濤鹿苑公司),所用試劑濃硫酸,苯酚,葡萄糖,95% 乙醇等均為國產(chǎn)分析純。

1.2 毛尖蘑粗多糖的提取

根據(jù)文獻(xiàn)報道,采用熱水浸提方法改良[2]。

1.2.1 提取物經(jīng)過漂洗的熱水浸提法

毛尖蘑烘干后粉碎,稱取20g三份;料水比 1:10;提取溫度分別為 80℃、90℃、100℃;提取時間 2h;提取 3次;分別合并濾液;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積 1/4;分別加入4倍體積95%乙醇靜置24h;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至液體厚重;離心3000r/min;乙醇洗 3次,丙酮洗1次;60℃恒溫烘干至恒重;得到粗多糖。

1.2.2 提取物未經(jīng)過漂洗的熱水浸提法

毛尖蘑烘干后粉碎,稱取 20 g二份;料水比1:10;提取溫度分別為 80℃、90℃;提取時間 2 h;提取3次;分別合并濾液;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積1/4;分別加入 4倍體積 95%乙醇靜置24h;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至液體厚重;60℃恒溫烘干至恒重;得到粗多糖。

1.2.3 毛尖蘑總糖含量的測定

采用苯酚-硫酸法測定總糖含量。以葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣品中總糖的含量。

樣品中總糖的含量(%)=(溶液中總糖的濃度×提取液總體積)/毛尖蘑原料的質(zhì)量×100

2 結(jié)果

2.1 糖的鑒定結(jié)果

硫酸-苯酚法[3]制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖20mg于 500mL容量瓶中,加水至刻度,分別吸取 0.4、0.6、0.8、 1.0、 1.2、 1.4、 1.6及 1.8mL,各以蒸餾水補(bǔ)至 2.0mL,然后加入6%苯酚1.0mL及濃硫酸5.0mL,搖勻冷卻,室溫放置20min后于490nm測光密度,以2.0mL水按同樣顯色操作作為空白,橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù),縱坐標(biāo)為光密度值,得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

測得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程:A= 0.0086X+ 0.0501,r= 0.9940。 A為吸光度值,X為多糖含量(mg/mL)。

用苯酚-硫酸法測定了毛尖蘑子實體中提取的固形物中多糖的含量為97.5%。

2.2 熱水浸提法提取粗多糖得率

見表1。

表1 經(jīng)過漂洗和未漂洗的熱水浸提法在不同浸泡溫度下提取粗多糖得率

由表1可看出在浸泡溫度為80℃時,粗多糖提取率明顯高于溫度為90℃、100℃時的提取率;在浸泡溫度為 80℃、90℃時,經(jīng)過漂洗的提取法的提取率明顯高于未經(jīng)過漂洗的提取法的提取率。

3 討論

目前真菌多糖提取的方法通常采用熱水浸提和酶法浸提。其中熱水浸提工藝簡單,抽提的主要是胞外多糖,雖然得率稍低,但提取成本低 ,多糖純度高;而酶法浸提常采用纖維素酶、果膠酶和蛋白酶以除去胞壁和膜上的果膠、纖維素及蛋白質(zhì)等成分,有利于胞壁內(nèi)多糖的溶出,且多糖提取率高,但由于加酶提取不僅生產(chǎn)成本高,同時也給產(chǎn)物的分離帶來了困難。本實驗將熱水浸提法應(yīng)用于毛尖蘑粗多糖的提取,在對不同浸泡溫度下毛尖蘑粗多糖提取率的比較的同時,又比較了提取物經(jīng)過漂洗和未經(jīng)過漂洗的提取率。實驗表明在浸泡溫度為80℃時,粗多糖提取率明顯高于溫度為90℃、100℃時的提取率;在浸泡溫度為 80℃、90℃時,經(jīng)過漂洗的提取法的提取率明顯高于未經(jīng)過漂洗的提取法的提取率。即溫度在80℃、提取物經(jīng)過漂洗的條件下,提取率明顯高于其它條件。本方法為毛尖蘑子實體粗多糖的提取工藝優(yōu)化提供了實驗基礎(chǔ)。但在浸提溫度是否能夠更低、料水比的合適比例、提取時間長短等問題上,在本實驗中還未得到解決 ,這有待于進(jìn)一步研究。

[1] 鄭雅鶯,潘學(xué)仁.野生毛尖蘑人工馴化研究初報 [J].中國林副特產(chǎn),1995,32(1):3-4

[2] 陳湘,林炳昌.黃蘑子實體總糖的提取 [J].食用菌學(xué)報,2007,14(1):47-48

[3] 高麗君,王漢忠,崔健華,等.苯酚-硫酸法測定白首烏中多糖含量 [J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2004,35(2):295-297