羅 璠，郭艷峰

（1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川 成都 610041；2.深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東 深圳 518045）

由于抗生素在飼料中添加后引發(fā)的藥物殘留問題嚴(yán)重影響到了食品安全，因此世界各國(guó)對(duì)抗生素在飼料中的使用已有了越來越嚴(yán)格的限制，開發(fā)新型的抗菌劑及助長(zhǎng)劑成為近年來的研究熱點(diǎn)。微生態(tài)制劑因其具有無毒、無害、無污染、無殘留等優(yōu)良特性，成了抗生素的重要替代品之一，其中乳酸菌等微生態(tài)制劑的作用引人關(guān)注。添加動(dòng)物乳桿菌可以確保青貯發(fā)酵初期有充足的乳酸菌促進(jìn)乳酸發(fā)酵，從而抑制雜菌生長(zhǎng)。本試驗(yàn)利用一株分離自豬腸道的動(dòng)物乳桿菌來處理黑麥草，探討其對(duì)黑麥草青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 青貯原料 黑麥草：一年生黑麥草，采自紅原草場(chǎng)。

1.1.2 菌種 動(dòng)物乳桿菌（Lactobacillus animalis），四川省資源微生物及微生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。

1.1.3 培養(yǎng)基 發(fā)酵培養(yǎng)基（改良MRS培養(yǎng)基）：大豆蛋白胨10.0 g，牛肉膏10.0 g，酵母提取物5.0 g，葡萄糖20.0 g，乙酸鈉5.0g，K2HPO42.0 g，MgSO4·7H2O 0.58 g，檸檬酸二胺 2.0 g，Mn2SO4·H2O 0.25g，瓊脂 15.0 g，蒸餾水1.0L，pH自然。

乳酸桿菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基：酪蛋白水解物10.0g，酵母提取物5.0 g，檸檬酸胺2.0 g；乙酸鈉（CH3COONaO3H2O)25.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，瓊脂15 g，葡萄糖 20.0 g，吐溫 80 1.0mL，磷酸氫二鉀 6.0 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.03g，MnSO4·4H2O 0.15g。

霉菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）：馬鈴薯塊200～300 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，pH值在5.5～5.7。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物乳桿菌的培養(yǎng) 將動(dòng)物乳桿菌接種于MRS液體培養(yǎng)基中，30℃靜置培養(yǎng)48h，4000 r/min離心10min，收集菌體，用無菌生理鹽水配制成4×105CFU/mL的菌懸液。

1.2.2 黑麥草的調(diào)制 將預(yù)干的黑麥草分為兩組，一組作為空白對(duì)照組（CK），一組作為試驗(yàn)組，加入乳酸菌制劑。將兩組黑麥草切割至2～5 cm長(zhǎng)，按每克干黑麥草加入105CFU/mL乳酸菌的量噴灑菌懸液，混合均勻后稱500 g黑麥草裝入密封的塑料袋中；空白對(duì)照組噴灑等量的水，稱500g裝袋密封。每組樣品做3個(gè)重復(fù)。兩組樣品置常溫下（25±2）℃避光存放。

1.2.3 菌種計(jì)數(shù) 在存放過程中，分別于1、2、3、7、10、15、30 d從密封袋中取10g樣品進(jìn)行菌種計(jì)數(shù)。

1.2.4 pH 測(cè)定 在存放過程中，分別于 1、2、3、7、10、15、30d從密封袋中取10g樣品，加入15mL無菌水充分混勻，浸泡10min后過濾，用精密pH計(jì)測(cè)定pH值。

2 結(jié)果與分析

2.1 青貯過程中乳桿菌的變化 隨著青貯的進(jìn)行，乳桿菌的數(shù)量快速增加，如圖1所示。在第15 d達(dá)到高峰，隨后數(shù)量緩慢下降。與空白對(duì)照組相比，動(dòng)物乳桿菌菌數(shù)的增加量是對(duì)照組的3倍。

圖1 青貯過程中乳酸菌的變化

2.2 青貯過程中霉菌的變化 隨著青貯的進(jìn)行，霉菌的生長(zhǎng)明顯受到抑制，試驗(yàn)組的霉菌在第1 d就急劇減少，而空白對(duì)照組的霉菌增殖延續(xù)到第3 d。在算20 d時(shí)，試驗(yàn)組的霉菌數(shù)量少于10個(gè)。詳見圖2。

圖2 青貯過程中霉菌的變化

2.3 青貯過程中pH的變化 如圖3所示，青貯過程中pH有一定的變化，在空白組中pH有略微下降，而試驗(yàn)組的pH值下降明顯。

圖3 青貯過程中pH的變化

3 結(jié)論

由試驗(yàn)結(jié)果明顯看出，在青貯飼料中添加動(dòng)物乳桿菌能顯著抑制霉菌的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)青貯飼料的保藏期，這可能與乳酸菌能產(chǎn)生大量的乳酸等有機(jī)酸有關(guān)，也可能與動(dòng)物乳桿菌產(chǎn)生的其它抑制霉菌生長(zhǎng)的物質(zhì)有關(guān)，具體抑菌機(jī)制還需深入探討。

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