劉立成 劉光前 趙福忠 劉大森

許多研究表明，給反芻動(dòng)物飼喂富含亞油酸和亞麻酸的植物油能夠提高畜產(chǎn)品中有利于人健康的CLA 或 n-3 脂肪酸(Dhiman，2000；Chilliard，2001)。畜產(chǎn)品中CLA只有小部分直接來(lái)源于瘤胃合成，大部分由乳腺去飽和酶催化t11-C18：1生成（Griinari等，2000）。Turpeinen等（2003）報(bào)道，t11-C18： 1 在人體組織內(nèi)也可以通過(guò)去飽和脫氫酶形成CLA，發(fā)揮有益功能。因此，提高瘤胃中t11-C18：1含量已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。侯俊財(cái)（2008）在體外培養(yǎng)液中添加大劑量的豆油研究共軛亞油酸及氫化產(chǎn)物的累積規(guī)律，結(jié)果表明，添加大豆油能顯著提高培養(yǎng)液中CLA和t11-C18：1含量。王喜樂(lè)（2007）在羊日糧中添加葵花油顯著提高瘤胃CLA和t11-C18：1含量。這些報(bào)道都說(shuō)明添加植物油能增加CLA和t11-C18：1含量在瘤胃的累積。但對(duì)油酸和亞油酸比例接近的植物油瘤胃脂肪酸的氫化及氫化中間產(chǎn)物t11-C18：1累積規(guī)律的比較還未見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)在體外培養(yǎng)條件下添加豆油、玉米油和葵花油，研究不同來(lái)源的植物油對(duì)瘤胃脂肪酸的氫化及t11-C18：1累積規(guī)律的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧組成

選擇3只體況良好、健康無(wú)疾病的安裝有永久性瘤胃瘺管的東北細(xì)毛羊，供采集瘤胃液用。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕-青干草型，日糧精粗比為4：6，精料中玉米80%和豆粕20%，粗料為羊草，每天早晚6點(diǎn)各飼喂1次，全天給水。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

培養(yǎng)底物為0.5 g微晶纖維素，植物油的添加量均為5 mg，植物油的種類分別為玉米油、豆油和葵花油，每個(gè)處理設(shè)置時(shí)間點(diǎn)分別為 2、4、8、16 和 24 h，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)設(shè)4個(gè)重復(fù)。

1.3 體外培養(yǎng)

體外培養(yǎng)操作及緩沖液的配制參照張愛(ài)忠（2008）方法。

1.4 瘤胃液的采集和培養(yǎng)

試驗(yàn)羊晨飼（6：00）后2 h，由3只羊瘤胃內(nèi)上下前后不同位點(diǎn)采集足量瘤胃液，灌入經(jīng)預(yù)熱達(dá)39℃并通有CO2的保溫瓶中，灌滿后立即蓋嚴(yán)瓶口，迅速返回實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)4層紗布過(guò)濾后持續(xù)充入CO2氣體5 min，在38～39℃水浴中保存，快速向每個(gè)瓶中分裝20 ml瘤胃液和5 mg植物油，搖勻混合，打開(kāi)振蕩開(kāi)關(guān)，開(kāi)始培養(yǎng)。

1.5 樣品的采集及測(cè)試方法

在培養(yǎng)后每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取出4個(gè)培養(yǎng)瓶，經(jīng)兩層紗布過(guò)濾后冷凍保存?zhèn)錅y(cè)多不飽和脂肪酸（PUFA）。

1.6 培養(yǎng)液中PUFA的測(cè)試

總脂的提取參照Folch等（1957），脂肪酸的甲酯化參照Sukhija等（1988）的推薦方法。測(cè)試儀器為島津GC-2010氣相色譜儀，色譜柱為SP-2560（100 m×0.25 mm×0.2 m）毛細(xì)管色譜柱，載氣高純氮?dú)?，檢測(cè)器FID 240℃，進(jìn)樣口溫度為240℃，分流比50：1。柱溫箱二階段程序升溫：初始溫度170℃，維持30 min，以1.5℃/min速率升至200℃保持20 min，再以5℃/min升到到230℃，維持5 min。壓力266.9 kPa，柱流量1.04 ml/min，線速度20 cm/s。脂肪酸的定性分析方法采用與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時(shí)間值定性。定量分析采用C17：0內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中某種脂肪酸的含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

基本數(shù)據(jù)采用Excel處理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析利用SAS8.2軟件包的平衡試驗(yàn)設(shè)計(jì)ANOVA進(jìn)行方差分析，采用Duncan's法進(jìn)行均值的多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同植物油脂肪酸含量的比較（見(jiàn)表1）

表1 不同植物油18碳脂肪酸含量（g/100 kg TFA）

表1列出了3種植物油中18碳脂肪酸含量，植物油中油酸主要組成是c9-C18：1，且豆油中c9-C18：1含量最高為28 g/100 kg TFA；亞油酸主要組成是c9,c12-C18：2，葵花油中c9,c12-C18：2含量最高達(dá)到61 g/100 kg TFA，而3種油中油酸和亞油酸的比例較為接近，但玉米油中含有4 g/100 kg TFA的亞麻酸。

2.2 不同植物油對(duì)體外培養(yǎng)液中脂肪酸氫化及t11-C18：1累積規(guī)律的影響（見(jiàn)表2）

添加植物油體外培養(yǎng)液中C18：0含量隨著培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)延長(zhǎng)逐漸升高；在2 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組與葵花油組間差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于玉米油組（P＜0.05）；在培養(yǎng)4 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組和玉米油組間差異不顯著（P＞0.05），但都顯著高于葵花油組（P＜0.05）；在8 h時(shí)間點(diǎn)各處理組間差異不顯著（P＞0.05）；在16 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組顯著高于其它兩組（P＜0.05），其它兩組間差異不顯著（P＞0.05）；在培養(yǎng)24 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組顯著高于玉米油組（P＜0.05），玉米油組顯著高于葵花油組（P＜0.05）。

添加植物油體外培養(yǎng)液中t11-C18：1含量隨著培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)延長(zhǎng)先升高后降低，但在8 h時(shí)間點(diǎn)降到最低而后逐漸升高；在2 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組與葵花油組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于玉米油組（P＜0.05）；在培養(yǎng)4 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組和玉米油組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于葵花油組（P＜0.05）；在 8 h時(shí)間點(diǎn)，玉米油組顯著高于豆油組和葵花油組（P＜0.05），豆油組和葵花油組間差異不顯著（P＞0.05）；在16和24 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組顯著高于葵花油組（P＜0.05），葵花油組顯著高于玉米油組（P＜0.05）。添加植物油體外培養(yǎng)液中c9-C18：1含量隨著培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)延長(zhǎng)逐漸先升高后降低；在16 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組顯著高于其它兩組（P＜0.05），其它兩組間差異不顯著（P＞0.05）；其它時(shí)間點(diǎn)，各組間差異不顯著（P＞0.05）。

表2 不同植物油體外培養(yǎng)液中脂肪酸含量的比較（mg/l）

添加豆油和葵花油體外培養(yǎng)液中c9,c12-C18：2含量隨著培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)延長(zhǎng)逐漸降低，玉米油組先升高后降低；在2和16 h時(shí)間點(diǎn)，各組間差異不顯著（P＞0.05）；在培養(yǎng)4 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組和玉米油組差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于葵花油組（P＜0.05）；在 8 h時(shí)間點(diǎn)，豆油組顯著高于其它兩組（P＜0.05），其它兩組間差異不顯著（P＞0.05）；在培養(yǎng)24 h時(shí)間點(diǎn)，玉米油組顯著高于豆油組和葵花油組（P＜0.05），豆油組和葵花油組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 體外培養(yǎng)條件下不同植物油對(duì)C18：0含量的影響

植物油所含有的長(zhǎng)鏈脂肪酸一般為硬脂酸、油酸、亞油酸和亞麻酸，油酸經(jīng)過(guò)一步氫化變成硬脂酸，亞油酸經(jīng)過(guò)異構(gòu)化變成CLA后在氫化變成t11-C18：1，之后在微生物加氫變成硬脂酸。侯俊財(cái)（2008）在體外培養(yǎng)條件下添加大劑量的大豆油，研究發(fā)現(xiàn)添加大豆油培養(yǎng)液中C18：0顯著高于對(duì)照組，且C18：0含量隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加。本研究在體外培養(yǎng)液中添加豆油、玉米油和葵花油，結(jié)果顯示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)培養(yǎng)液中C18：0含量逐漸增加，這是植物油中油酸、亞油酸和亞麻酸逐步被氫化，C18：0在培養(yǎng)液中逐步累積的結(jié)果。在培養(yǎng)24 h比較來(lái)看，豆油組培養(yǎng)液中C18：0含量最高，其次是玉米油，葵花油最低，其原因可能是由于各種植物油所含脂肪酸不飽和度的差異引起的，葵花油組C18：0含量最低是因?yàn)榭ㄓ椭?8碳脂肪酸中的亞油酸所占比例含量相對(duì)較高（為61 g/100 kg TFA左右，豆油和玉米油都是55 g/100 kg TFA 左右），這一結(jié)果與 Beam（2000）等體外研究日糧中高亞油酸將降低脂肪酸的生物氫化，增加不飽和脂肪酸的含量結(jié)果一致。

3.2 體外培養(yǎng)條件下不同植物油對(duì)C18：1含量的影響

培養(yǎng)液中C18：1主要來(lái)自兩方面，其一是植物油中含有的油酸未被瘤胃微生物氫化，其二是亞油酸或亞麻酸瘤胃經(jīng)微生物氫化轉(zhuǎn)變而來(lái)的。植物油中的油酸主要是c9-C18：1，而亞油酸主要是c9,c12-C18：2，c9,c12-C18：2經(jīng)瘤胃微生物氫化可以轉(zhuǎn)變成 t11-C18： 1。Kepler等（1996）和 Noble等（1974）發(fā)現(xiàn)，當(dāng)瘤胃內(nèi)游離C18：2脂肪酸含量高時(shí)，瘤胃內(nèi)的t11-C18：1得到了大量的累積。Kalscheur（1997）等研究表明，增加日糧中的脂肪酸含量，可以提高十二指腸中C18：1含量。本研究在體外培養(yǎng)液中添加不同植物油，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)培養(yǎng)液中t11-C18：1含量逐漸增加，而c9-C18：1含量逐漸降低，其原因是c9-C18：1不是瘤胃脂肪酸代謝的中間產(chǎn)物（Griinari，1999），而 t11-C18： 1 進(jìn)一步氫化是 C18： 2 氫化過(guò)程中的限速步驟（魏宏陽(yáng)，2003）。同時(shí)t11-C18：1是乳腺生成CLA的前體物（Mosley等，2006），如果提高了培養(yǎng)液中的t11-C18：1含量，那么就意味著間接提高了反芻動(dòng)物乳腺合成CLA含量，進(jìn)而提高了畜產(chǎn)品中CLA含量。通過(guò)添加植物油24 h時(shí)間點(diǎn)比較來(lái)看，豆油提高培養(yǎng)液t11-C18：1含量效果最好，葵花油次之，玉米油最低。

3.3 體外培養(yǎng)條件下不同植物油對(duì)c9,c12-C18：2含量的影響

植物油中所含的亞油酸結(jié)構(gòu)主要是c9,c12-C18：2。Qiu等（2004）研究證實(shí)，奶牛飼喂富含亞油酸和亞麻酸的植物油可以提高CLA的十二指腸流量。本研究在體外培養(yǎng)液中并沒(méi)有檢測(cè)到CLA，其原因可能是植物油的添加量較少合成的CLA含量較低或合成的CLA直接被氫化的緣故。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)玉米油組培養(yǎng)液中c9,c12-C18：2含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，升高的原因可能是植物油中除含有亞油酸外還含有亞麻酸（4%）的緣故；豆油和葵花油培養(yǎng)液c9,c12-C18：2含量隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，說(shuō)明培養(yǎng)過(guò)程中微生物將c9,c12-C18：2異構(gòu)化或者氫化，這一結(jié)果與Troegeler等（2003）或Wang等（2002）報(bào)道的結(jié)果一致。培養(yǎng)24 h時(shí)間點(diǎn)比較，玉米油組c9,c12-C18：2含量最高，其原因可能是玉米油中亞麻酸（4%）含量高于其它兩種油，而不飽和脂肪酸的氫化順序是先氫化不飽和度高的脂肪酸，使得培養(yǎng)液中c9,c12-C18：2大量累積。

4 小結(jié)

體外培養(yǎng)條件下，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)培養(yǎng)液中C18：0含量逐漸升高，t11-C18：1含量先升高之后降低，但到8 h時(shí)間點(diǎn)降到最低而后一直升高，培養(yǎng)24 h豆油組培養(yǎng)液中C18：0和t11-C18：1都顯著高于其它兩組（P＜0.05）；添加不同植物油對(duì)培養(yǎng)液中c9-C18：1含量無(wú)顯著性影響；豆油組和葵花油組培養(yǎng)液c9,c12-C18：2含量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低，玉米油組在培養(yǎng)4 h時(shí)間點(diǎn)含量升高而后降低，且培養(yǎng)24 h后培養(yǎng)液中c9,c12-C18：2含量顯著高于其它兩組（P＜0.05）。

20篇，刊略，需者可函索）