李 霞 ，劉 放 ，吳宏富

(1.浙江省慶元縣中醫(yī)院，浙江 慶元 323800; 2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，浙江 杭州 310013)

華蟾素(cinobufocalin)系蟾蜍科動物中華大蟾蜍 Bufobufo gargarizans Cantar或黑眶蟾蜍 Bufo melanostictus Schneider等的全皮經(jīng)科學(xué)方法提取加工制成的水溶性物質(zhì)，是我國自行研制的二類新藥，其主要成分為吲哚生物堿、還原糖、氨基酸、蟾蜍毒素及蟾蜍色胺等。近年來已證實其具有清熱解毒、活血化瘀、抗腫瘤、抗病毒、強心、麻醉、止痛、促進骨髓增生、增強機體免疫功能等多種藥理作用，其制劑在臨床上廣泛用于原發(fā)性肝癌、中晚期肺癌、乙型病毒性肝炎、慢性喉炎、牛皮癬、頑固性逆呃等疾病的治療，效果顯著，現(xiàn)已成功開發(fā)出注射液、口服液及片劑，并被列為國家級中藥保護品種[1-2]。華蟾素片現(xiàn)行藥品標準質(zhì)量控制方法為用紫外分光光度(UV)法測定5-羥色胺的含量，以含吲哚類總生物堿計不得少于0.50%(g/L)[3]。文獻報道華蟾素及其制劑的含量測定方法，目前主要有UV法[4-6]和高效液相色譜(HPLC)法[7-9]。筆者對自制的華蟾素分散片溶出度進行了研究，并采用UV法測定華蟾素分散片的溶出度，報道如下。

1 儀器與試藥

RCZ-8A型智能溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠);TU-1800型紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);Sartorus 2024MP型電子天平(德國);SB2200型出超聲波儀(上海超聲波儀器廠)。5-羥色胺鹽酸鹽對照品(供含量測定用，批號為111456-200401，中國藥品生物制品檢定所);華蟾素分散片(規(guī)格為 0.3 g，批號分別為 20081210，200851212，20081214，浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所);對-二甲氨基苯甲醛(AR，上海三愛思試劑有限公司)，鹽酸(AR，浙江巨州化學(xué)試劑有限公司)，水為去離子水(自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯色劑配制

取對-二甲氨基苯甲醛15 g，置100 mL棕色量瓶中，加鹽酸溶液(2→3)溶解并稀釋至刻度，搖勻即得15%對-二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液(顯色劑)。

2.2 5－羥色胺紫外吸收光譜

取5-羥色胺對照品4 mg，精密稱定，共2份，分置2只100 mL棕色量瓶中，分別加水和0.1 mol/L鹽酸溶液，溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別以相應(yīng)的試劑空白為參比，1 cm比色杯，在300～700 nm波長處進行全掃描，紫外吸收光譜圖見圖1。

圖1 5-羥色胺在不同溶劑中的紫外吸收光譜

2.3 溶出方法及條件選擇

溶出方法:由于本品規(guī)格較小(0.3 g/片)，主藥含量較低，故采用2005年版《中國藥典(二部)》附錄ⅩC溶出度試驗第三法(槳法)，溶出介質(zhì)體積為100 mL。

溶出介質(zhì):取本品4片，分別以水和0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為 50 r/min，依法操作，經(jīng) 2，5，10，20，30，45 min 時取溶液10 mL，并立即補加10 mL溶劑于溶出杯中，溶出液用0.8 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加顯色劑至10 mL，搖勻，放置30 min，作為供試品溶液;另取5-羥色胺對照品4 mg(平行2份)，分置100 mL棕色量瓶中，分別用水和0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置10 mL棕色量瓶中，分別加水和0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至刻度，搖勻，放置30 min，作為對照品溶液。取上述兩種溶液，分別以水和0.1 mol/L鹽酸溶液為參比，1 cm比色杯，在555 nm波長處分別測定吸光度，計算出每片的溶出量，結(jié)果顯示華蟾素分散片在0.1 mol/L鹽酸溶液中的溶出度較水中大。45 min時在水中的溶出度為60.23%，在0.1 mol/L鹽酸溶液中的溶出度為81.54%。按藥典一般規(guī)定45 min時溶出度應(yīng)大于70%[15]，故選擇0.1 mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì)。

轉(zhuǎn)速選擇:取本品4片，以0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速分別為50 r/min和100 r/min，依法操作。結(jié)果樣品溶出度隨轉(zhuǎn)速的增加而增加，轉(zhuǎn)速為50 r/min和100 r/min時45 min的溶出度分別為81.54%和86.92%，均大于80%，故按常規(guī)選擇轉(zhuǎn)速為100 r/min。

2.4 溶出度測定方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取5-羥色胺對照品約4 mg，精密稱定，置100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取 0.1，0.25，0.5，1.0，2.0，2.5，3.0 mL，分別置 7 只 10 mL 棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至刻度，在555 nm波長處分別測定吸光度，以吸光度(X)對質(zhì)量濃度(Y)進行線性回歸，回歸方程為 Y=0.045 9 X-0.001 5，r=0.999 7(n=7)。結(jié)果表明，5-羥色胺質(zhì)量濃度在0.409～12.276 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

回收率試驗:分別稱取5-羥色胺對照品約0.50，1.30，1.84 mg(約相當于溶出量的30%，60%，100%)和處方量的混合輔料適量(每個質(zhì)量濃度平行操作3份)，精密稱定，分置9只100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液80 mL，超聲處理15 min，放冷，加0.1 mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至刻度，放置30 min，作為供試品溶液;另取5-羥色胺對照品4 mg，置100 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置10 mL棕色量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液至5 mL，加顯色劑至10 mL，搖勻，放置30 min，作為對照品溶液。取上述兩種溶液，在555 nm波長處分別測定吸光度，并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=9)

穩(wěn)定性試驗:取本品(批號為20081210)4片，以0.1 mol/L鹽酸100 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，經(jīng)30 min時取溶液10 mL，濾過，取續(xù)濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加顯色劑至刻度，搖勻，放置 10，20，30，40，50，60 min 時，分別測定吸光度。結(jié)果不同放置時間的溶出液吸光度依次為0.175，0.184，0.194，0.194，0.190，0.185，表明溶出液加顯色劑后，放置30～40 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 均一性試驗

取本品(批號為20081210)4片，以0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為 100 r/min，依法操作，經(jīng) 2，5，10，20，30，45 min 時取溶液10 mL，并立即補加10 mL溶劑于溶出杯中，溶出液用0.8 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加顯色劑至刻度，搖勻，放置30 min，作為供試品溶液;按2.4項下回收率試驗操作，依法測定。結(jié)果見表2和圖2。

2.6 溶出曲線

取本品3批，按2.5項下方法操作，結(jié)果見表3和圖3。

表2 樣品溶出度均一性試驗結(jié)果(n=6)

表3 樣品的平均溶出度(%，±s，n=6)

表3 樣品的平均溶出度(%，±s，n=6)

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圖2 樣品溶出均一性試驗

圖3 樣品溶出曲線圖

3 討論

因本品以5-羥色胺為對照品來計算含量，藥典規(guī)定紫外吸收分光光度法中，一般供試品溶液的吸光度值以在0.3～0.7范圍內(nèi)誤差較小[10]?？紤]到本品的實際情況，采用小杯法，以0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶出介質(zhì)，樣品用量為4片。

試驗結(jié)果表明，溶出液加顯色劑后，在30～40 min內(nèi)吸光度穩(wěn)定，40 min后吸光度隨著時間的延長逐漸下降。因此，進行溶出度試驗時，在溶出液加顯色劑后，應(yīng)嚴格控制測定時間，應(yīng)在30～40 min內(nèi)測定吸光度，以保證試驗結(jié)果準確可靠。

試驗結(jié)果表明，以0.1 mol/L鹽酸溶液100 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為100 r/min，45 min時樣品溶出度均大于70%，樣品的批內(nèi)溶出均一性與批間溶出重現(xiàn)性均較好，說明選用的溶出度測定條件和建立的溶出度測定方法可行，能有效控制樣品質(zhì)量。

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