席金花

蘇木-7湯由蘇木、紅花、土木香、甘草、山萘、石膏、血竭七味藥組成的復(fù)方制劑具有活血、破血、祛滯的功效;用于婦女閉經(jīng)，干血癆等病癥。本方選擇紅花，進(jìn)行含量測定方法的研究，以有效控制制劑的質(zhì)量。紅花具有活血通經(jīng)、散瘀止痛功效。主含紅花苷類，紅花多糖和有機(jī)酸。其中查爾酮類成分羥基紅花黃色素A、黃色素A以及多種黃酮醇化合物如:槲皮素及其苷類，山萘酚及其苷類等是紅花中的主要活性成分;參照《中國藥典》2005年版一部“紅花”項(xiàng)下的含量測定方法，選擇羥基紅花黃色素A作為指標(biāo)成分，對(duì)本方中的紅花進(jìn)行了HPLC含量測定方法研究。經(jīng)分析方法驗(yàn)證，表明該方法重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，方中其他組分對(duì)羥基紅花黃色素A的測定無干擾，適合于蘇木-7湯的質(zhì)量控制［1］。

1 儀器試劑試藥與樣品

1.1 儀器 SHIMADZVLC-10Avp，LC-10ATvp型泵，SCL-10Avp型控制器，SPD-10AVP型檢測器，CLASS－VP色譜工作站，島津UA-1700型紫外 －可見分光光度計(jì)。Sartovius BP121S(d=0.1 mg)，BP211D(d=0.01 mg)電子分析天平。HU3120B超聲波清洗器(120W，40KHZ;天津市東科儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 試劑試藥 羥基紅花黃色素A對(duì)照品(批號(hào):111637-200503中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用)。甲醇、乙睛為色譜純，磷酸為分析純，水為高純水。

1.3 樣品 蘇木-7湯樣品，紅花原料藥材由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院提供。

2 方法驗(yàn)證

2.1 色譜條件的選擇 色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本試驗(yàn)研究采用Diamousil(鉆石)C18柱(250 mm×4.6 mm;5 μm)，流動(dòng)相為 A:甲醇-乙睛(19:2)B:0.7%磷酸溶液以三乙胺調(diào)節(jié)PH值 至(6.0±0.1);A:B(20:80)，檢測波長為403nm，柱溫35℃。理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算，應(yīng)不低于 3000［2］。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，加25%甲醇制成每1 ml含33 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液及陰性對(duì)照溶液的制備的制備 取本品約1.0 g，精密稱定，精密加入25%甲醇25 ml，稱定重量，超聲處理(功率120W，頻率40KHZ)40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。另取按處方量并以相同工藝制備的陰性對(duì)照(缺紅花)適量，依上法操作即得陰性對(duì)照液。

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn) 在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測得結(jié)果為:陰性對(duì)照色譜中在與羥基紅花黃色素A對(duì)照品以及供試品色譜中相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對(duì)羥基紅花黃色素A的測定無干擾。見色譜圖(A、B、C)。

2.5 線性關(guān)系考察 取羥基紅花黃色素A對(duì)照品約3.0 mg精密稱定，置50 ml量瓶中，加25%甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻(相當(dāng)于含羥基紅花黃色素A0.0652 mg/ml)精密吸取 1、3、5、7、9、10 ml溶液分別置 10 ml量瓶中，加 25% 甲醇至刻度，搖勻，各取20μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果羥基紅花黃色素A在0.1304～1.304 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、10 h、12 h進(jìn)樣測定，結(jié)果羥基紅花黃色素A峰面積積分值基本穩(wěn)定，RSD為0.81%，結(jié)果表明在12 h內(nèi)供試品溶液基本穩(wěn)定。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定羥基紅花黃色素A峰面積積分值，RSD為0.9%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)020930 1號(hào)樣)供試品6份，各約1.0 g，精密稱定，分別按含量測定項(xiàng)下方法操作，測得每份供試品含量，結(jié)果平均含量為0.9820 mg/g，RSD為0.85%，表明結(jié)果較好。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取供試品(批號(hào)020930 1號(hào)樣，含量0.9820 mg/g)9份，各約0.50 g，精密稱定，分別在其中3份中各精密加入濃度為0.0501 mg/ml的羥基紅花黃色素A對(duì)照品25%甲醇溶液5 ml，再分別精密加入25%甲醇溶液20 ml;另3份中各精密加入濃度為0.0501 mg/ml的羥基紅花黃色素A對(duì)照品25%甲醇溶液10 ml，再分別精密加入25%甲醇溶液15 ml;其余三份各精密加入濃度為0.0501 mg/ml的羥基紅花黃色素A對(duì)照品25%甲醇溶液15 ml，再分別精密加入25%甲醇溶液10 ml，分別按含量測定項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣20 μl，測定每份含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.10 供試品含量測定 分別精密吸取2.2對(duì)照品溶液和2.3供試品溶液各20 ul，在2.1色譜條件下進(jìn)行測定。供試品含量測定結(jié)果見表2。

表1 羥基紅花黃色素A加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 供試品中羥基紅花黃色素A含量測定結(jié)果

3 討論

檢測波長的選擇:取羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，于島津UA-1700型紫外可見分光光度儀上，自200～600 nm做光譜掃描，結(jié)果羥基紅花黃色素A在404.0 nm處有最大吸收。結(jié)合《中國藥典》2005年版一部“紅花”項(xiàng)下HPLC的檢測波長為403 nm，確定檢測波長為403 nm。

提取效率的考察:甲醇提取過程中為保證被測成分提取完全，試驗(yàn)中考察了不同超聲處理時(shí)間對(duì)提取效率的影響如:超聲處理 30 min、40 min、50 min、60 min。結(jié)果超聲處理40 min供試品中羥基紅花黃色素A含量不再增加，故確定甲醇超聲處理40 min。

［1］國家藥典委員會(huì)，中華人民共和國藥典(一部).化學(xué)工業(yè)出版社，2005:1.

［2］王寶琴.中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究.中國醫(yī)藥科技出版社，1994，3:484.