許曉文，袁 林

（1.廣東省佛山市藥品檢驗所，廣東 佛山 528000； 2.中澳合資東方澳龍制藥有限公司，廣東 佛山 528234）

2000版《中國藥典》（2004年增補本）采用高效液相色譜（HPLC）法測定鹽酸左氧氟沙星制劑的含量[1]，但該法使鹽酸左氧氟沙星及其主要雜質(zhì)的保留時間過長，工作效率影響極大，消耗增加流動相。筆者研究認(rèn)為，適當(dāng)提高流動相中甲醇所占的比例，系統(tǒng)適用性可滿足藥典要求，樣品的分析時間可縮短60%以上，含量測定結(jié)果與中國藥典方法無明顯差異，能更好地適用于常規(guī)檢驗工作和廠方大批量生產(chǎn)時的質(zhì)量控制。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 510型高效液相色譜儀（SEPU3000工作站，WatersTM486 Tunable Absorbance Detector）；Waters Temperature Control Module；Mettler AE 240型電子天平。左氧氟沙星對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為130455-2006049，含量為97.3%）；鹽酸左氧氟沙星制劑（市場抽樣）；己烷磺酸鈉（分析純，山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）；磷酸二氫鉀（分析純，廣州光華化學(xué)廠有限公司）；磷酸（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；甲醇（色譜純，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）；水為超純水；0.45 μm微孔濾膜。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：大連依利特Kromasil ODS2 柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：己烷磺酸鈉溶液[取己烷磺酸鈉0.98 g，加磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀6.8 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，加0.05 mol/L磷酸約 500 mL，調(diào)節(jié) pH 至 2.4）1 000 mL，使溶解，搖勻]-甲醇（2 ∶2）；檢測波長：293 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：40℃。取左氧氟沙星對照品的水溶液（1→1 000）10 mL，置試管中，用日光燈（3 500 lx）照射3 h，取該溶液10 μL注入液相色譜議，記錄色譜圖，結(jié)果相對于主峰保留時間約為1.2倍處檢測到雜質(zhì)峰；另取左氧氟沙星對照品溶液連續(xù)進樣4次，其 RSD為0.8%；理論塔板數(shù)按左氧氟沙星峰計算高于1 500。

2.2 溶液制備

取左氧氟沙星對照品約10 mg，精密稱定，置20 mL量瓶中，加0.03 mol/L鹽酸溶液約15 mL，置超聲波浴中使溶解，再加0.03 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為對照品溶液。取相當(dāng)于左氧氟沙星50 mg的樣品，精密稱定，置50 mL量瓶中，加0.03 mol/L鹽酸溶液約35 mL，置超聲波浴中使溶解，再加0.03 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.3 本方法與藥典方法比較

2.3.1 色譜圖

圖1和圖2分別是采用本方法和藥典方法測定左氧氟沙星對照品的色譜圖。可見，左氧氟沙星在兩圖中均呈現(xiàn)良好峰形，且與雜質(zhì)分離效果良好，但保留時間有很大差異，前者為8.63 min（圖1 A），后者為21.06 min（圖2），較后者縮短了約60%的時間。說明在甲醇比例提高后，對雜質(zhì)的分離能力無顯著影響，但保留時間有很大地縮短。圖1 B是采用本方法確定左氧氟沙星樣品的色譜圖，可見左氧氟沙星峰形尖銳，與雜質(zhì)分離良好。說明該方法適合于左氧氟沙星樣品的測定。

圖1 高效液相色譜圖（本方法）

2.3.2 含量測定結(jié)果

分別采用藥典方法和本方法測定了幾批鹽酸左氧氟沙星制劑中左氧氟沙星的含量，結(jié)果藥典方法為99.5% ，97.2% ，98.3%，95.6%；本方法為99.8%，97.0%，97.9%，95.8%。應(yīng)用 F檢驗，結(jié)果 F=1.03，對于 α =0.05，查表得 F1-0.05/2（3，3）=9.28，F(xiàn) ＜ F1-0.05/2（3，3），說明兩種方法的精密度無顯著差異。應(yīng)用 t檢驗，結(jié)果 t=0.025，查表得 t1-0.05/2（6）=2.447，t值遠(yuǎn)小于 t1-0.05/2（6），說明兩種方法的平均值之間也無顯著差異。

圖2 高效液相色譜圖（藥典法）

3 討論

比較理想的流動相應(yīng)當(dāng)具有穩(wěn)定性好、廉價易得、對環(huán)境無污染、在檢測波長區(qū)域無吸收、分離效果好、樣品組分保留時間短、分析速度快等特點[2]。中國藥典所規(guī)定的流動相體系不失為一種較理想的流動相體系，但左氧氟沙星的保留時間較長，這一大缺陷。左氧氟沙星的保留時間隨流動相中甲醇比例的增大而縮短。將己烷磺酸鈉溶液-甲醇流動相的比例由3∶1調(diào)整為2∶2，使甲醇的含量由原來的33%提高到50%，可在保證系統(tǒng)適用性符合中國藥典規(guī)定的前提下，使左氧氟沙星的保留時間縮短了約60%。

與中國藥典方法比較，本方法一方面繼承了原方法的優(yōu)點，另一方面改進了原方法的一些缺陷，在保證分離效果的前提下，縮短了組分的保留時間，提高了分析速度，含量測定結(jié)果與中國藥典無顯著差異。因此，本方法能更好地適用于常規(guī)檢驗工作和廠方大批量生產(chǎn)時的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）2000版2004年增補版[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：57.

[2]郭 磊，張凌艷.頭孢拉定含量測定方法的研究[J].黑龍江醫(yī)藥，2003，16（5）：424-425.