車力凡 孫鈺 邵素芳

子宮內(nèi)膜癌為女性生殖道常見惡性腫瘤之一，近年來，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，在歐美一些國(guó)家子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率已躍居?jì)D科惡性腫瘤之首位，國(guó)內(nèi)亦趨接近甚至超過子宮頸癌。雖然近年來采取了以手術(shù)為主的多學(xué)科綜合治療，但是由于局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，子宮內(nèi)膜癌的死亡率仍無明顯下降。本研究采用免疫組化S-P法檢測(cè)50例子宮內(nèi)膜癌組織和12例不典型增生子宮內(nèi)膜及10例正常子宮內(nèi)膜組織中細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶(Cyclin dependent kinase-4，CDK4)和10號(hào)染色體丟失的與張力蛋白同源的磷酸酶基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN)蛋白的表達(dá)情況，并與臨床病理因素相聯(lián)系，以探討兩者的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。為臨床上尋找判斷子宮內(nèi)膜癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的新的生物學(xué)標(biāo)志物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 取濰坊市益都中心醫(yī)院2000年5月～2005年6月手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜癌患者標(biāo)本50例，不典型增生子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本12例及正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本10例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理檢查證實(shí)。其中子宮內(nèi)膜癌患者平均年齡54.5歲，按FIGO(1989)臨床分期Ⅰ期36例，Ⅱ期8例，Ⅲ期6例。病理分級(jí)按FIGO(1988年)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)G1 24例，G2 21例，G3 5例，所有患者術(shù)前均未作任何治療。不典型增生子宮內(nèi)膜患者年齡平均38.7歲。按ISGP(1987年)標(biāo)準(zhǔn)，輕度不典型增生3例，中度不典型增生3例，重度不典型增生6例。正常子宮內(nèi)膜患者中平均年齡43.4歲，均為子宮肌瘤手術(shù)切除的子宮標(biāo)本。

1.2 試劑 即用型兔抗人CDK4多克隆抗體，即用型兔抗人P T E N多克隆抗體，即用型免疫組化超敏UitraSensitiveTMS-P試劑盒，以上試劑均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化染色及結(jié)果判定 染色步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，人乳腺癌組織作陽性對(duì)照。CDK4、PTEN蛋白陽性染色標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色、棕褐色顆粒，染色強(qiáng)度高于背景非特異性染色為準(zhǔn)，高倍鏡下(40×10)取10個(gè)不同視野，并計(jì)算視野內(nèi)陽性細(xì)胞百分率，陽性細(xì)胞＞25%為陽性，≤25%為陰性。見圖1、圖2。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，所得計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn)比較組間的差異。顯著檢驗(yàn)水準(zhǔn)α取0.05。

2 結(jié)果

2.1 第一階段結(jié)果

2.1.1 CDK4蛋白在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞中的表達(dá)CDK4在正常子宮內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為30.0%，在不典型增生子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率為66.7%，在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率為72.0%，見圖1不典型增生子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率與正常子宮內(nèi)膜兩者相比，差異具有顯著性(P＜0.05)。子宮內(nèi)膜癌與不典型增生子宮內(nèi)膜組織陽性表達(dá)率相比，差異無顯著性(P＞0.05)。見表1。

2.1.2 CDK4蛋白在不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌組織細(xì)胞核中的表達(dá) CDK4蛋白表達(dá)隨FIGO臨床分期上升有增高趨勢(shì)，子宮內(nèi)膜癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期陽性表達(dá)率分別為58.3%、87.5%、100.0%。Ⅱ期及Ⅲ期陽性表達(dá)率為92.8%，與Ⅰ期比較，有顯著性差異(P＜0.05)。見表1。

2.1.3 CDK4蛋白在不同組織學(xué)分級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織細(xì)胞核中的表達(dá) CDK4蛋白在G1、G2、G3級(jí)的陽性表達(dá)率分別為62.5%、80.8%、80.0%，G2及G3組CDK4蛋白陽性表達(dá)率為80.7%，與G1比較，有顯著性差異(P＜0.05)。見表1。

2.1.4 CDK4蛋白在不同肌層浸潤(rùn)深度子宮內(nèi)膜癌組織細(xì)胞核中的表達(dá) CDK4蛋白在無肌層浸潤(rùn)或浸潤(rùn)深度＜1/2組陽性表達(dá)率為56.0%，浸潤(rùn)肌層＞1/2或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率為88.0%，兩組相比，其陽性表達(dá)率有顯著性差異(P＜0.05)。見表1，表2。

2.1.5 CDK4蛋白在復(fù)發(fā)子宮內(nèi)膜癌組織細(xì)胞核中的表達(dá) 隨訪41例病人，26例無復(fù)發(fā)，其中CDK4陽性表達(dá)率為57.7%(15/26)，15例復(fù)發(fā)患者中陽性表達(dá)率為93.3%(14/15)，兩者比較差異有顯著性(P＜0.05)。

2.2 第二階段結(jié)果

2.2.1 PTEN蛋白在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞中的表達(dá)PTEN在正常子宮內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為100.0%見圖2。在12例不典型增生子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率為91.0%，在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率為56.0%，子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率與正常子宮內(nèi)膜和不典型增生子宮內(nèi)膜相比，差異具有顯著性(P＜0.05)。正常子宮內(nèi)膜和不典型增生子宮內(nèi)膜組織陽性表達(dá)率相比，差異無顯著性(P＞0.05)。見表2。

2.2.2 PTEN蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系PTEN蛋白在子宮內(nèi)膜癌Ⅰ期中的陽性率高于Ⅱ-Ⅲ期，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.28，P=0.594)；組織學(xué)分級(jí)中G1、G2、G3級(jí)的PTEN蛋白陽性表達(dá)率分別為54.2%、61.9%、40.0%。三者間比較，差異均無顯著性(P＞0.05)；無浸潤(rùn)或肌層浸潤(rùn)＜1/2與肌層浸潤(rùn)＞1/2 組相比，差異有顯著性(x2=8.2，P＜0.05)。見表2。

2.2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中CDK4、PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性CDK4、PTEN蛋白在本組50例子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)差異無顯著性(P＞0.05)。即兩者在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)無相關(guān)性。

表1 三種不同組織細(xì)胞中CDK4蛋白表達(dá)的比較

表2 子宮內(nèi)膜癌中CDK4與PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性

表3 三種不同組織細(xì)胞中PTEN蛋白表達(dá)的比較

圖1 CDK4在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)

圖2 PTEN蛋白在正常子宮內(nèi)膜中的陽性表達(dá)

3 討論

細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶-4(Cyclin dependen的CDK4 cD t kinase-4，CDK4)基因位于12q 13染色體上，人NA長(zhǎng)534bp，編碼34個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)[1]。作為周期蛋白激酶，它被Cyclin D激活形成復(fù)合物，而直接促進(jìn)G1/S轉(zhuǎn)換[2]。其作用機(jī)制主要是由Cyclin D與CDK4形成復(fù)合物，磷酸化其底物如Rb等，釋放轉(zhuǎn)錄因子E2E使DNA合成得以進(jìn)行，細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期。目前，在多種腫瘤細(xì)胞如黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、家族型腸息肉病、大腸癌等中均發(fā)現(xiàn)CDK4的基因擴(kuò)增和蛋白表達(dá)失調(diào)[3-6]，認(rèn)為CDK4異常表達(dá)可促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，并具有早期診斷和判斷預(yù)后的價(jià)值[7-8]。本研究表明CDK4在子宮內(nèi)膜癌中Ⅱ-Ⅲ期細(xì)胞核中過度表達(dá)率明顯高于Ⅰ期，提示CDK4與子宮內(nèi)膜癌的病程進(jìn)展有關(guān)；而且CDK4在組織學(xué)分級(jí)G2-G3中的過度表達(dá)率明顯高于G1者，推測(cè)其對(duì)腫瘤分化、發(fā)展有促進(jìn)作用；與部分文獻(xiàn)報(bào)道一致。Dong等[9]對(duì)CDK4在喉癌組織標(biāo)本中免疫組化研究中發(fā)現(xiàn)，CDK4的表達(dá)異常與總生存率顯著相關(guān)，具有很好的預(yù)后價(jià)值。即CDK4在浸潤(rùn)肌層＞1/2或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率高于無肌層浸潤(rùn)或浸潤(rùn)深度＜1/2組陽性表達(dá)率。CDK4作為細(xì)胞周期正向調(diào)節(jié)因子，當(dāng)其過度表達(dá)時(shí)，可加速細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞異常增生、浸潤(rùn)和腫瘤復(fù)發(fā)而導(dǎo)致預(yù)后不良。

PTEN基因是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)具有磷酸酶活性的抑癌基因，其所編碼的PTEN蛋白是一種具有雙特異去磷酸化作用的磷酸酶。PTEN蛋白在多種腫瘤中缺失或減低表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，也是某些腫瘤的獨(dú)立預(yù)后因素。PTEN通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡等抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展。最近研究發(fā)現(xiàn)，PTEN能多途徑的抑制腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。動(dòng)物模型研究也表明，腺病毒介導(dǎo)的PTEN表達(dá)不但能抑制腫瘤癌細(xì)胞的成瘤性及轉(zhuǎn)移，以其處理原位移植瘤，也能抑制腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。PTEN基因在子宮內(nèi)膜癌中的突變率為34%～50%，是目前發(fā)現(xiàn)的子宮內(nèi)膜癌中突變率最高的基因，而且子宮內(nèi)膜癌也是迄今發(fā)現(xiàn)的PTEN基因突變率最高的腫瘤。

通過研究發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)下降或缺失及CDK4在子宮內(nèi)膜癌組織中的過度表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織中CDK4及PTEN的表達(dá)可作為判斷子宮內(nèi)膜癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移情況的有用標(biāo)志物，為臨床上尋找判斷子宮內(nèi)膜癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的新的生物學(xué)標(biāo)志物提供理論依據(jù)。

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