許 方,李曉蘭,祝 琳

(1.大連醫(yī)科大學附屬二院檢驗科,遼寧大連116027;2.大連醫(yī)科大學檢驗醫(yī)學院)

據(jù)WHO統(tǒng)計,自1989年丙型肝炎被發(fā)現(xiàn)以來,估計全球約1.7億-2.0億人感染丙型肝炎病毒(HCV),感染率為3%,每年新發(fā)丙型肝炎病例約3.5萬例,丙型肝炎在早期臨床表現(xiàn)上與乙型肝炎相比,癥狀較輕,但是其較乙型肝炎易早期出現(xiàn)肝硬化,導致肝癌,病死率較高[。1]由于丙肝病毒的高度變異性,疫苗的研究在短期內(nèi)難有突破性進展。丙型肝炎的預后不良,目前尚無理想的特效藥物和治療措施。因此早期診斷是防止丙型肝炎病毒傳播的有效手段。本研究對90例丙肝感染者和391例高危人群同時測定血清中HCV-cAg,以此觀察丙型肝炎核心抗原檢測對于丙型肝炎診斷的價值。

1 材料與方法

1.1 檢測對象 標本來自2008年4月-2009年2月大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院門診及病房患者。丙肝抗體陽性組90例,病房HCV-Ab陰性ALT大于200U/L者263例及肝炎門診就診HCV-Ab陰性ALT大于70 U/L者128例,共計391例。分離血清并置于-70℃冰箱保存,確保標本僅凍融一次。

1.2 檢測方法

1.2.1 HCV-cAg檢測采用湖南景達制藥有限公司提供的HCV-cAg酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 HCV-Ab檢測采用北京科衛(wèi)臨床診斷試劑有限公司提供的HCV-Ab診斷試劑盒,具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.3 HCV-RNA定量檢測采用深圳匹基生物工程有限公司提供的HCV核酸擴增(PCR)熒光定量檢測試劑盒,利用美國AB公司7500實時PCR分析系統(tǒng)進行定量分析。

2 結(jié)果

感染組HCV-cAg陽性率為37.78%,高危人群組HCV-cAg陽性率為0.51%(見表1)。高危人群組2例HCV-cAg陽性,對其做HCV-RNA檢測,1例為陰性,1例為陽性,結(jié)果為2.3×105拷貝/ml。

表1 感染組、高危人群組HCV-cAg檢測結(jié)果

3 討論

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的一種重要的世界性傳染病[2],流行病學資料顯示,在肝癌發(fā)病率中等的地區(qū),如日本、意大利、西班牙等國家肝癌多由丙型肝炎所致,也有資料表明發(fā)達國家的慢性肝病主要與HCV感染有關[3]。丙型肝炎病毒主要是通過輸血及血液制品獲得,1989年Coo等用分子克隆技術發(fā)現(xiàn)了丙型肝炎病毒(HCV)。HCV是多變異的病毒,在同型各株間,甚至同一患者不同時期分離的克隆之間亦有差異,基因序列的差異,將導致編碼產(chǎn)物抗原型的不同[4]。由于輸血后丙型肝炎引起的醫(yī)療糾紛不斷,而且受血次數(shù)越多,感染病毒的幾率越高,如患者機體免疫力差,而輸入的血液中丙型肝炎病毒復制活躍,就會造成丙型肝炎感染[5]。由此可見,盡早檢出和早期防治丙型肝炎感染刻不容緩。

目前,對于HCV感染的臨床診斷仍以ELISA法檢測HCV抗體為主,但抗體檢測存在著一些不足之處。其一,由于使用HCV基因重組抗原質(zhì)量及各抗原片段包被比例的不同,各廠家試劑間的靈敏度和特異性存在著一定差異。其二,HCV-Ab產(chǎn)生有一個明顯的窗口期,平均為70d,所以抗-HCV陰性并不能排除攜帶HCV并且具有傳染性的可能。其三,在抗-HCV ELISA法試劑盒中,由于酶標抗體是廣譜抗人IgG抗體,對吸附在固相上的IgG抗體無篩選作用,這就降低了檢測的特異性。臨床使用中常出現(xiàn)灰區(qū)樣品檢測結(jié)果,導致結(jié)果難以判斷,并造成血液浪費[7]。

此外,常用的HCV檢測方法還有PCR定性或定量檢測,PCR檢測HCV-RNA靈敏度高,人在感染HCV 1-2周,血清中即可檢測到HCV-RNA,HCVRNA可以反映病毒的復制與傳染性,為病毒血癥的標志,是診斷HCV的“金標準”。但HCV-RNA檢測影響因素也多,且所有器材必須高壓滅菌,需要專業(yè)的人員操作,需要精密的儀器設備、較高的實驗技巧等,在一些基層醫(yī)院難以開展,給技術的推廣造成了一定的局限性。

近些年關于HCV核心抗原(HCV-cAg)的檢測有越來越多的報道,HCV-cAg檢測可以將HCV檢測的窗口期縮短至15 d[8],通過大量實驗研究表明,HCV核心抗原診斷試劑較HCV抗體檢測對HCV感染的陽性檢測提前14-68 d,平均35.2d[3]。這就降低了HCV經(jīng)血傳播的風險,具有可行性和較廣泛的應用基礎。HCV核心抗原也是在HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染標志,幾乎與HCV RNA同時出現(xiàn)。據(jù)文獻報道,HCV核心抗原陽性樣品中HCV-RNA陽性率為 85%以上,兩者之間密切相關[9-12]。目前,HCV-cAg檢測大多以進口試劑為主,國產(chǎn)試劑也在近幾年問世,但在臨床推廣上仍做的遠遠不夠。HCV-cAg檢測作為一種新的檢測方法在一定程度上可以彌補抗體檢測方法的不足,前者具有高度敏感性及特異性,可以明顯縮短窗口期,有利于丙型肝炎的早期診斷,減少因輸血傳播丙型肝炎的發(fā)生率[13-14]。實驗只需3小時,操作簡便,成本較低。

本實驗所檢測的90例丙肝抗體陽性的標本中,其中有34例HCV-cAg陽性,陽性率為37.78%,低于覃桂芳等的報道42.50%[15],其原因在于兩者對于標本的選取有所不同。本研究所選的90例血清樣本,來自僅是丙肝抗體檢測為陽性而未經(jīng)臨床確診的患者,其中既有丙肝患者,也有既往感染者,也不排除由于藥物干擾以及其它自身免疫性疾病所產(chǎn)生的假陽性結(jié)果,故陽性率較低是可以解釋的。由此可見,HCV-cAg對丙型肝炎早期診斷有較大的價值,但兩者的聯(lián)合檢測更有意義。

本文所選的391例轉(zhuǎn)氨酶升高但丙肝抗體陰性的標本中,其中2例為HCV-cAg陽性,陽性率為0.51%,經(jīng)RT-RNA確證1例為陰性,1例為陽性。有文獻報道高危人群的陽性率為0.55%[16],但是陽性率無太大可比性,原因有二:其一,所選標本例數(shù)不同,可能存在抽樣誤差。本研究標本為391例,如能擴大樣本量,相信實驗結(jié)果將更具有科學性和客觀性。其二,高危人群組的確立標準不同,我們的標準是HCV-Ab陰性,ALT大于200 U/L的住院患者以及ALT大于70 U/L的肝炎門診就診患者,其中門診128例,住院263例,而住院患者多數(shù)已有明確診斷,為丙肝以外的其它疾病,導致ALT升高的原因也多種多樣,這與其他研究的高危人群并不相同。

391例HCV-Ab陰性標本中,檢出HCV-cAg陽性2例,經(jīng)HCV-RNA確證 1例為陽性。表明僅用HCV-Ab檢測的確存在漏診的風險,尤其是對手術前丙肝病毒篩查的病例,它涉及到術中感染責任和用血安全等問題,丙肝核心抗原檢測在一定程度上降低了這些風險。丙型肝炎患者在感染丙肝病毒后1-4周內(nèi)血清HCV-RNA轉(zhuǎn)陽,同時HCV-cAg出現(xiàn),隨后ALT增高和HCV抗體轉(zhuǎn)陽[17]。故丙肝抗體檢測在丙肝病毒感染的急性期檢出率低,部分病例可出現(xiàn)假陰性,我們認為,HCV-Ab、HCV-cAg的共同檢測既可以防止窗口期漏檢又可以排除一些其它疾病的干擾,在一定程度上降低丙型肝炎診斷假陽性率,可以提高丙型肝炎檢測的準確性,而且不需要特殊的儀器及試劑,有助于丙型肝炎的篩查以及臨床上的病情判斷。

在高危人群組中,有 1例HCV-cAg陽性,但HCV-RNA陰性的標本,說明了核心抗原與 HCVRNA的檢測并不是100%完全相關的,原因可能為該患者為丙肝早期,RNA＜103個拷貝或者由于污染、保存條件不完善等原因引起的RNA樣本有降解,另一個原因可能由于現(xiàn)有的核心抗原檢測試劑盒還不夠完善,導致假陽性的存在,由于該患者為門診患者,所以沒有進一步追訪的條件,未能確認。

綜上所述,HCV核心抗原檢測窗口期短,敏感性好,特異性高,操作簡便、快速,不需要特殊的儀器,費用低廉,能達到早期診斷的目的,因此,協(xié)同檢測HCV-Ab、HCV-cAg適合大規(guī)模篩查和大多數(shù)地區(qū)醫(yī)院的常規(guī)檢查。

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