王如美,時志民 ,郝玉栓

(河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院,河北邯鄲056004)

膜細(xì)胞骨架連接蛋白(Ezrin)是ERM(ezrin-radixin-moesin)蛋白家族成員之一,對細(xì)胞的黏附、運(yùn)動等起重要作用。近年來有關(guān)Ezrin對腫瘤細(xì)胞黏附分子的調(diào)節(jié),及其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移中的作用的研究漸被重視[1]。分化抗原(cluster of differentiation,CD)CD44家族是單鏈細(xì)胞表面I類跨膜糖蛋白,屬于黏附分子。根據(jù)基因表達(dá)模式分為標(biāo)準(zhǔn)型CD44(CD44s)和變異型CD44(CD44v),CD44v6作為CD44v主要成員之一,在多種人體惡性腫瘤的發(fā)生和浸潤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[2]。研究表明Ezrin與CD44能形成復(fù)合體影響惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移[3]。本研究應(yīng)用免疫組化 SP法測定 Ezrin、CD44v6在乳腺癌組織中的表達(dá),探討Ezrin、CD44v6與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系及二者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2007年1月-2008年12月在河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室行病理活檢確診的56例乳腺癌患者為研究對象?；颊呔鶠榕?年齡28-75歲,中位年齡52歲,患者術(shù)前均未進(jìn)行任何治療。手術(shù)標(biāo)本均統(tǒng)一重新切片HE染色確定病理診斷,臨床病理資料齊全。56例乳腺癌患者中有17例伴腋淋巴結(jié)和鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;其中浸潤性導(dǎo)管癌、導(dǎo)管內(nèi)癌33例,浸潤性小葉癌23例。參照Elston等[4]方法,并進(jìn)行改良,對56例乳腺癌進(jìn)行分級:Ⅰ級 15例,Ⅱ級20例,Ⅲ級 21例。按照《AJCC腫瘤分期手冊》(第六版)TNM分期:Ⅰ期17例,Ⅱ期24例,Ⅲ+Ⅳ期15例。標(biāo)本常規(guī)取材,10%甲醛固定,石蠟包埋切片(切片厚4 μ m),常規(guī)HE染色。同時取30例患者的癌旁正常組織作為對照組。

1.2 方法 兔抗人Ezrin單克隆抗體(cell signaling產(chǎn)品,編號:3142);鼠抗人CD44v6單克隆抗體(編號:ZM-0052),即用型SP試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化染色采用SP法。微波抗原修復(fù),免疫組化染色過程按試劑盒說明進(jìn)行操作,蘇木素襯染。

1.3 結(jié)果判定 用已知陽性的胃癌組織作為陽性對照,PBS代替一抗作為陰性對照。光鏡下觀察,Ezrin、CD44v6陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì),呈棕黃色顆粒(見圖1、2)。計數(shù)1 000個腫瘤細(xì)胞,陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為(-),5%-25%為(+),26%-50%為(++),＞50%為(+++)。

圖1 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌Ezrin的表達(dá)情況(SP×400)

圖2 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌CD44v6的表達(dá)情況(SP×400)

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗及Fisher確切概率法,等級資料的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin和CD44v6在乳腺癌組織和正常組織中的表達(dá) Ezrin、CD44v6在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為 62.50%(35/56)和76.79%(43/56),均高于在正常乳腺組織中的陽性表達(dá)率16.67%(5/30)和23.33%(7/30),差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值分別為16.495和22.933,P＜0.05)。

2.2 Ezrin和CD44v6的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 Ezrin、CD44v6的表達(dá)與腫瘤的大小、組織學(xué)分級、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(見表1)。

表1 不同病理情況下Ezrin和CD44v6的表達(dá)情況

2.3 乳腺癌組織中Ezrin和CD44v6表達(dá)的關(guān)系Spearman等級相關(guān)性分析結(jié)果表明,Ezrin與CD44v6的表達(dá)呈正相關(guān)(r=2.839,P＜0.05,見表2)。

表2 乳腺癌組織中Ezrin和CD44v6表達(dá)的關(guān)系

3 討論

Ezrin為膜細(xì)胞骨架連接蛋白,在生理狀態(tài)下,Ezrin 是將膜蛋白(如 CD44、c-Met、E-Cadherin 、ICAM-1和ICAM-2等)與肌動蛋白細(xì)胞骨架連接起來的橋接蛋白,這種連接不僅是結(jié)構(gòu)上的,也是功能上的[5]。通過介導(dǎo)膜與細(xì)胞骨架的連接,Ezrin在細(xì)胞形態(tài)改變、運(yùn)動、黏附及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用。Ezrin的異常表達(dá)將導(dǎo)致細(xì)胞生物學(xué)行為的改變。Shen等[6]在對食管癌進(jìn)行研究時發(fā)現(xiàn),能夠發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的SHEEMT細(xì)胞系中Ezrin表達(dá)顯著高于不發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的SHEEIMM細(xì)胞系。在乳腺癌的研究中,把過表達(dá)野生型Ezrin的鼠乳腺腫瘤細(xì)胞AC2M2接種到小鼠乳腺脂肪墊中,這些小鼠均發(fā)生肺部轉(zhuǎn)移[7]。本研究結(jié)果顯示,Ezrin在乳腺癌組織中的表達(dá)(62.50%)顯著高于在正常乳腺組織中的表達(dá)(16.67%),提示Ezrin可能參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。本研究還顯示,Ezrin高表達(dá)與腫瘤的大小、組織學(xué)分級、臨床TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

CD44是分布極為廣泛的一組細(xì)胞表面跨膜糖蛋白,參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與間質(zhì)之間的特異性粘接,CD44v6為其變異體。目前認(rèn)為CD44v6主要參與瘤細(xì)胞與宿主基質(zhì)的黏附,在癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起促進(jìn)作用。CD44v6的過量表達(dá)與多種人體惡性腫瘤,如結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌等的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8-9]。本研究顯示CD44v6高表達(dá)與原發(fā)腫瘤的大小、組織學(xué)分級、臨床TNM分期等指標(biāo)有關(guān),與Ma等[9]的研究結(jié)果基本一致。Ezrin與CD44可以形成復(fù)合物,共同參與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移[10]。在細(xì)胞內(nèi)Ezrin作為CD44v6的錨定分子,使其與細(xì)胞骨架連接起來,進(jìn)而改變腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動能力,同時與細(xì)胞外基質(zhì)中配體結(jié)合,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的形態(tài)、游走性發(fā)生改變,為腫瘤細(xì)胞的遷移奠定基礎(chǔ)。本研究結(jié)果表明,乳腺癌組織中Ezrin與CD44v6的表達(dá)呈正相關(guān)。Ezrin與CD44v6的高表達(dá)能相互作用影響乳腺癌的浸潤、轉(zhuǎn)移,并通過CD44v6發(fā)揮作用。

本研究提示Ezrin、CD44高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān),因此我們認(rèn)為聯(lián)合檢測Ezrin、CD44的表達(dá)在判斷乳腺癌的轉(zhuǎn)移、生物學(xué)行為等方面有重要臨床價值。

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