亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        一個(gè)低磷酸酶血癥家系的基因突變分析

        2010-05-25 01:43:44陳晨王麗波曹麗華邢雪莎王述森麻宏偉羅陽(yáng)
        關(guān)鍵詞:雜合磷酸酶家系

        陳晨,王麗波,曹麗華,邢雪莎,王述森,麻宏偉,羅陽(yáng)

        (中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)基因組學(xué)教研室,沈陽(yáng) 110001;2.附屬盛京醫(yī)院發(fā)育兒科,沈陽(yáng) 110004)

        低磷酸酶血癥(hypophosphatasia)是一種罕見(jiàn)的遺傳性疾病,以骨骼和牙齒礦化缺陷,血清和骨堿性磷酸酶活性持續(xù)低水平或缺如為主要特征。目前對(duì)本病尚無(wú)有效的治療方法。低磷酸酶血癥是由于肝/骨/腎堿性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL;MIM#171760) 突變所致,ALPL基因定位于1p36.1[1],編碼的蛋白是組織非特異性堿性磷酸酶(tissue-nonspecific alkaline phosphatase,TNAP)。該病的遺傳方式較為復(fù)雜,呈常染色體顯性或隱性遺傳。本研究采集了一個(gè)低磷酸酶血癥家系中1例低磷酸酶血癥的患兒及其患病母親的血樣,采用PCR結(jié)合基因測(cè)序的方法尋找患者及其母親的ALPL基因突變位點(diǎn),進(jìn)一步確認(rèn)臨床診斷,同時(shí)探討患者發(fā)病的機(jī)制。

        到漢武帝劉徹即位時(shí),西漢儲(chǔ)備的糧食層層積壓,導(dǎo)致倉(cāng)庫(kù)爆棚;國(guó)庫(kù)里銅錢積壓太多,導(dǎo)致穿錢的繩子朽壞,銅錢散落無(wú)法計(jì)算。有錢就任性的劉徹,終于敢對(duì)匈奴人說(shuō)“不”了。

        1 材料與方法

        1.1 研究對(duì)象

        本研究由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院發(fā)育兒科提供家系成員外周靜脈血及病例資料,系譜圖見(jiàn)圖1。共采集到該家系中Ⅳ-1和Ⅲ-2兩名成員的血樣,先證者Ⅳ-1為2009年就診于盛京醫(yī)院的患者,男,3.5歲,以“腿彎3年”為主訴就診,Ⅲ-2為先證者母親。

        1.2 方法

        1.2.1 臨床檢查:查體發(fā)現(xiàn)先證者Ⅳ-1身高96.5 cm(-1SD),“O”型腿,雙膝間距5 cm。實(shí)驗(yàn)室檢查中Ⅳ-1血堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP)95.5 U/L(參考值40~375 U/L),血鈣、磷、鎂、甲狀旁腺素水平均正常。X線檢查發(fā)現(xiàn)雙側(cè)股骨頸干角變小,股骨頸略短,雙側(cè)髖內(nèi)翻,見(jiàn)圖2。Ⅲ-2的血ALP為19.5 U/L(參考值40~150 U/L),其他檢查結(jié)果正常。

        2~5歲兒童的皮膚發(fā)育過(guò)程具有一定的特殊性,其皮膚含水比例高, 在不同環(huán)境中的水分喪失速度較快,同時(shí)皮膚層內(nèi)的脂質(zhì)含量偏低,容易受到自身免疫性因子或者外界病原體的感染而出現(xiàn)真皮層的病變[4]。2~5歲兒童的發(fā)病率在不同的年齡階段中處于較高水平[5-6],部分東部沿海省份的相關(guān)流行病學(xué)研究顯示,2~5歲兒童不同類型皮膚疾病的總體發(fā)病率占到了其年齡段的第一位[7]。而皮膚病對(duì)于2~5歲兒童具有下列幾個(gè)方面的主要影響[8-9]:①對(duì)于兒童自信心的培養(yǎng)具有較為顯著的影響,增加了患兒自卑或者遠(yuǎn)期抑郁及焦慮的風(fēng)險(xiǎn);②導(dǎo)致患兒對(duì)于學(xué)習(xí)興趣的下降,影響到了其學(xué)習(xí)成績(jī)及自身性格的形成。

        1.2.2 提取基因組DNA:取患者Ⅳ-1和Ⅲ-2枸櫞酸鈉抗凝處理的外周靜脈血各200μl,選用Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0(TaKaRa)試劑盒提取基因組DNA,置于-20℃保存。

        將患者Ⅳ-1的ALPL基因雙向測(cè)序結(jié)果分別進(jìn)行序列比對(duì)分析(Human BLAT Search,http://www.genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgBlat),發(fā)現(xiàn)患兒第12外顯子存在一個(gè)雜合突變c.1366G>A(p.G456R),即cDNA第1 366位G突變?yōu)锳,導(dǎo)致456位的甘氨酸變?yōu)榫彼幔?jiàn)圖3。對(duì)患者母親ALPL基因第12外顯子進(jìn)行測(cè)序分析,結(jié)果顯示患者母親Ⅲ-2存在相同的雜合突變。

        2 結(jié)果

        1.2.3 PCR擴(kuò)增候選致病基因ALPL的外顯子并進(jìn)行測(cè)序分析:在UCSC網(wǎng)站獲得ALPL基因的DNA序列,使用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)覆蓋該基因編碼區(qū)(包括外顯子和內(nèi)含子交界區(qū))的引物,引物序列見(jiàn)表1。首先對(duì)先證者Ⅳ-1進(jìn)行檢測(cè),PCR擴(kuò)增該基因的 12個(gè)外顯子,PCR反應(yīng)體系為 2×GC Buffer I (Mg2+Plus)25 μl,dNTP Mixture(各 2.5 mmol/L)8 μl,上下游引物終濃度為 0.5 μmol/L,TaKaRa LA Taq 2.5 U,基因組 DNA約 200 ng,加ddH2O至50μl,PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后,切膠純化后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析。測(cè)序結(jié)果利用UCSC數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)測(cè)得的DNA序列進(jìn)行核酸序列的同源性比對(duì)分析。在先證者基因水平檢測(cè)到突變后,同樣通過(guò)測(cè)序分析方法驗(yàn)證家系內(nèi)其他患者是否存在相同位點(diǎn)的基因突變。

        3 討論

        低磷酸酶血癥是一種以骨礦化缺陷和組織非特異性堿性磷酸酶(TNAP)活性減低為主要特征的遺傳性疾病,目前尚無(wú)根治方法,雖然有報(bào)道可以用自體間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行基因替代治療[2],但有效率和安全性尚待確定,因此基因診斷和遺傳咨詢顯得更為重要。低磷酸酶血癥致病基因ALPL定位于1p36.1,共包含12個(gè)外顯子,編碼524個(gè)氨基酸。參照人類基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)(Human Gene Mutation Database,HGMD)和國(guó)外學(xué)者建立的低磷酸酶血癥基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.sesep.uvsq.fr/03_hypo_mutations.php),到目前為止共報(bào)道了ALPL基因的218個(gè)突變,絕大部分為錯(cuò)義突變,大約占79.3%,且突變主要集中在第5~6外顯子和第9~12外顯子。本研究中檢測(cè)到的該家系的p.G456R的雜合突變,位于第12外顯子,Ozono等[3]曾經(jīng)報(bào)道過(guò)該突變并對(duì)其進(jìn)行體外重組實(shí)驗(yàn)研究,結(jié)果顯示p.G456R突變體導(dǎo)致堿性磷酸酶完全失去活性。

        在蔡家堡鄉(xiāng)、西山鄉(xiāng)、東山等鄉(xiāng)鎮(zhèn)建立馬鈴薯“青薯2號(hào)”“青薯9號(hào)”全膜覆蓋栽培技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化示范區(qū)80hm2,平均產(chǎn)量3.58×104kg,總產(chǎn)量達(dá)286.4×104kg;實(shí)現(xiàn)收入3.22萬(wàn)元·hm-2,總產(chǎn)值257.76萬(wàn)元(按0.9元/kg計(jì)算);與露地常規(guī)栽培相比,增產(chǎn)0.85×104kg,增產(chǎn)率31.14%,增收0.77萬(wàn)元·hm-2;新增產(chǎn)量68.0×104kg,新增產(chǎn)值61.2萬(wàn)元。

        ALPL基因編碼的TNAP蛋白共分為4個(gè)功能區(qū)域,分別是冠區(qū)、酶激活位點(diǎn)、同源二聚體界面和鈣結(jié)合位點(diǎn),該蛋白通過(guò)形成同源二聚體而發(fā)揮活性。第456位的氨基酸靠近TNAP的同源二聚體界面,并且在哺乳動(dòng)物中是十分保守的氨基酸,該位點(diǎn)由極性疏水性的甘氨酸變?yōu)閴A性的精氨酸,很可能影響TNAP的蛋白結(jié)構(gòu)和活性,因此初步認(rèn)為p.G456R是該家系中患者疾病表型的關(guān)鍵影響因素。根據(jù)患者Ⅳ-1和Ⅲ-2的年齡和生化檢查等臨床表現(xiàn),兩者在臨床表型上都屬于輕型,輕型低磷酸酶血癥可呈常染色體顯性或隱性遺傳。而在該家系中,根據(jù)系譜圖可知,疾病在該家系中呈常染色體顯性遺傳,這與患者測(cè)序分析只檢測(cè)到一個(gè)雜合基因突變的結(jié)果吻合。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,檢測(cè)到一個(gè)突變等位基因的輕型低磷酸酶血癥患者多是(76.6%)由于雜合突變的顯性負(fù)效應(yīng)致?。?~6],而本研究中的p.G456R接近TNAP蛋白同源二聚體界面,因此推斷本家系更可能是由于雜合突變的顯性負(fù)效應(yīng),即影響了正常二聚體的形成而致病,其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

        表1 擴(kuò)增ALPL基因外顯子的引物序列Tab.1 Primer sequence of ALPL gene exons

        本研究在中國(guó)人群中首次報(bào)道了一個(gè)低磷酸酶血癥家系A(chǔ)LPL基因編碼區(qū)的雜合錯(cuò)義突變c.1366G>A,進(jìn)一步豐富了基因突變數(shù)據(jù)庫(kù),有助于深入了解該基因的結(jié)構(gòu)與功能,同時(shí)也確認(rèn)了患者的臨床診斷,為該家庭的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供了可靠的依據(jù)。

        [1]Mornet E.Hypophosphatasia[J].Orphanet JRare Dis,2007,2:40-47.

        [2]Katsube Y,Kotobuki N,Tadokoro M,et al.Restoration of cellular function of mesenchymal stem cells from a hypophosphatasia patient[J].Gene Ther,2010,17(4):494-502.

        [3]Ozono K,Yamagata M,Michigami T,et al.Identification of novel missense mutations(Phe310Leu and Gly439Arg)in a neonatal case ofhypophosphatasia[J].JClin Endocrinol Metab,1996,81(12):4458-4461.

        [4]Delphine F,Isabelle B,Anne-Sophie L,et al.Mild forms of hypophosphatasia mostly result from dominant negative effect of severe allelesor fromcompound heterozygosity for severeand moderatealleles[J].BMCMed Genet,2009,6(10):51-59.

        [5]Muller HL,Yamazaki M,Michigami T,et al.Asp361Val mutant of alkaline phosphatase found in patients with dominantly inherited hypophosphatasiainhibitstheactivityof thewild-typeenzyme[J].JClin Endocrinol Metab,2000,85(2):743-747.

        [6]Lia-Baldini AS,Muller F,Taillandier A,et al.A molecular approach todominancein hypophosphatasia[J].Hum Genet,2001,109(1):99-108.

        猜你喜歡
        雜合磷酸酶家系
        甘藍(lán)型油菜隱性上位互作核不育系統(tǒng)不育系材料選育中常見(jiàn)的育性分離及基因型判斷
        種子(2021年3期)2021-04-12 01:42:22
        堿性磷酸酶鈣-鈷法染色的不同包埋方法比較
        從翻譯到文化雜合——“譯創(chuàng)”理論的虛涵數(shù)意
        馬尾松果糖-1,6-二磷酸酶基因克隆及表達(dá)模式分析
        馬氏珠母貝紅色閉殼肌F1代的家系選育及家系評(píng)定
        一個(gè)非綜合征型聾家系的分子病因?qū)W研究
        肝豆?fàn)詈俗冃?個(gè)家系的基因突變分析
        磷酸酶基因PTEN對(duì)骨肉瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制研究
        兩個(gè)雄激素不敏感綜合征家系中AR基因突變檢測(cè)
        雄激素可調(diào)節(jié)的腎臟近端腎小管上皮細(xì)胞靶向雜合啟動(dòng)子的優(yōu)化
        亚洲乱码国产一区三区| 产美女被爽到高潮免费a| 久久狠狠爱亚洲综合影院| 中文字幕乱码人妻一区二区三区| 妺妺窝人体色www聚色窝韩国| 一区二区三区人妻在线| 日韩精品中文一区二区三区在线| 欧美性猛交xxxx富婆| 91免费在线| av资源在线播放网站| 美女在线一区二区三区视频| 日韩中文字幕免费视频| 日韩欧美区| 又粗又硬又黄又爽的免费视频 | 日韩性爱视频| 亚洲av永久无码精品国产精品| 青青国产成人久久91| 亚洲免费一区二区av| 国产午夜免费啪视频观看| 又爽又黄又无遮挡网站| 少妇高潮喷水久久久影院| 日本一级淫片免费啪啪| 国产天堂av在线一二三四| 亚洲av日韩综合一区在线观看| 精品视频一区二区三三区四区| 亚洲综合网一区二区三区| 人妻久久一区二区三区| 狼人香蕉香蕉在线28 - 百度| 色综合久久中文综合久久激情| 国产黄色一级到三级视频| 日韩精品视频高清在线| 亚洲精品www久久久| 综合无码一区二区三区四区五区| 最新国产一区二区三区| 色天使久久综合网天天| 少妇内射高潮福利炮| 国产又黄又爽又无遮挡的视频| 日本高清在线播放一区二区| 男人和女人做爽爽视频| 亚洲男人天堂2019| 黄色三级一区二区三区|