吳建華，謝 銀

(江蘇省如皋市博愛醫(yī)院，江蘇 如皋 226500)

ELISA檢測乙肝病毒標志物是臨床常規(guī)開展的方法，HBeAg常使用雙抗體夾心一步法檢測，以S/C0≥1.0為陽性?？笻Be使用競爭一步法檢測，以抑制率＞50%即S/CO＜1(CO=1/2N)為陽性。理論上，由于HBeAg與抗HBe存在“血清轉(zhuǎn)換”，即 HBeAg消失而抗 HBe產(chǎn)生，故HBeAg、抗 HBe雙陽性應(yīng)很少出現(xiàn)，但事實上這種雙陽性并不鮮見。筆者通過對雙陽性樣本的復(fù)檢發(fā)現(xiàn)造成雙陽性的原因是多方面的，主要有灰區(qū)假陽性、HBeAg濃度過高、樣本問題、干擾物質(zhì)等，本文對此進行了探討。

1 材料與方法

1.1 樣本 本院2009年7月至2010年5月門診、住院作乙肝標志物 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 檢測時HBeAg、抗HBe雙陽性的患者樣本57例，其中HBeAg的吸光度A值位于灰區(qū)陽性(CO+15%)的樣本4例，抗HBe的吸光度A值位于灰區(qū)陽性(CO-15%)的樣本36例。灰區(qū)是指CO值上下一段陽性可疑的吸光度區(qū)間，通常為CO±15%。若有標本溶血、脂血、污染等則重新采集標本并及時檢驗。

1.2 儀器與試劑 檢測試劑為上海科華公司生產(chǎn)的ELISA一步法 “兩對半”檢測試劑盒，HBeAg為雙抗體夾心法，抗HBe為競爭一步法(HBeAg包被反應(yīng)孔)。HBeAg、抗HBe免疫層析法(ICA)復(fù)檢試劑為廈門先科英創(chuàng)公司生產(chǎn)。Bio Rad 680型酶標比色計，YT-Wash型洗板機。室內(nèi)質(zhì)控物由江蘇省臨床檢驗中心提供，濃度為HBeAg 2ncu/m l，抗HBe 4ncu/m l。類風濕因子使用Beckman-Coulter公司的Immage特種蛋白檢測儀及配套試劑，檢測原理為免疫散射比濁法。

1.3 方法 57例雙陽性樣本的HBeAg使用ICA及ELISA復(fù)檢。為避免HBeAg濃度過高導(dǎo)致HOOK效應(yīng)，HBeAg復(fù)檢改用ELISA兩步法檢測，即樣本加入孵育30min、洗板后，再加入酶標抗體孵育、洗板、顯色，結(jié)果判斷相同，以HBeAg的S/CO≥1為陽性。若ELISA與ICA檢測結(jié)果不一致時，首先檢查標本是否合格，再檢測樣本中的類風濕因子。為避免加樣時差導(dǎo)致的不公平競爭對抗HBe檢測結(jié)果的影響，ELISA測定抗HBe時，在樣本加入后隨即加入酶標抗體。

2 結(jié)果

57例抗HBe陽性樣本經(jīng)復(fù)檢后轉(zhuǎn)為陰性的樣本共為45例，其中43例經(jīng)ICA與ELISA復(fù)檢后均為陰性(包括初檢位于灰區(qū)陽性的36例樣本)，有2例用ICA檢測陰性而ELISA仍為陽性，疑為HBeAg濃度過高導(dǎo)致的抗HBe假陽性。4例HBeAg初檢陽性的樣本經(jīng)ICA復(fù)檢后均為陰性，但ELISA檢測3例陰性(初檢為灰區(qū)樣本，其中1例溶血標本)，1例仍為陽性，檢測該標本類風濕因子為256IU/L。復(fù)檢后雙陽性樣本為8例。將復(fù)檢結(jié)果模式重新組合后HBeAg+、抗HBe-為45例 (78.9%)，HBeAg-、 抗 HBe+的 4例 (7%)， 雙陽性 8例(14%)。3種模式占調(diào)查期間HBsAg陽性樣本的比例分別為45/2510(17.9‰)、4/2510(1.59‰)、8/2510(3.18‰)。 見表 1。

表1 57例HBeAg、抗HBe雙陽性模式樣本的復(fù)檢結(jié)果

3 討論

HBeAg是HBcAg合成時的可溶性蛋白，由前C基因編碼加工后分泌到細胞外，一般僅見于HBsAg陽性血清，急性HBV感染時HBeAg的出現(xiàn)略晚于HBsAg，在病變極期后消失，若HBeAg持續(xù)陽性病變趨向慢性。在慢性HBV感染時HBeAg是重要的免疫耐受因子，大部分情況下其存在表示患者處于高感染低應(yīng)答期。HBeAg消失而抗HBe產(chǎn)生稱為血清轉(zhuǎn)換(seroconversion)。每年約有10%的患者發(fā)生自發(fā)的血清轉(zhuǎn)換。由于基因變異后即表達抗HBe而非HBeAg，故HBeAg、抗HBe雙陽性應(yīng)很少見，本文僅占HBsAg陽性樣本的1.59‰，而絕大多數(shù)雙陽性是由于各種原因?qū)е碌目笻Be假陽性。

有作者[1]在對雙陽性結(jié)果分析后得到大部分雙陽性結(jié)果是由于操作不規(guī)范和一步法影響因素所致。本文結(jié)果提示導(dǎo)致HBeAg、抗HBe雙陽性模式的主要原因是ELISA檢測結(jié)果的灰區(qū)假陽性，且第一位的是抗HBe的假陽性，本文占63.2%(36/57)。所謂灰區(qū)就是CO值上下一段陽性可疑區(qū)域，灰區(qū)吸光度范圍為CO±(15～20%)或CO±2s(s為室內(nèi)質(zhì)控OCV的s)。由于ELISA檢測時的影響因素眾多且以CO值判斷陰陽性，因而如試劑敏感性、標本因素、加樣、孵育、洗板、比色等均可能導(dǎo)致檢測結(jié)果尤其是灰區(qū)結(jié)果的誤判[2-4]。通常實驗室ELISA檢測乙肝標志物室內(nèi)質(zhì)控的CV值均＞15%，對于灰區(qū)樣本初檢及復(fù)檢結(jié)果的不一致是完全可能的，因而《醫(yī)院檢驗科建設(shè)管理規(guī)范》要求對該陽性可疑區(qū)域的樣本需重復(fù)試驗或更換試劑后重測以確定其陰陽性[5]?？紤]到“血清轉(zhuǎn)換”時HBeAg、抗HBe雙陽性的模式比較少見，因而筆者認為由于“加樣時差”不公平競爭導(dǎo)致的抗HBe假陽性[6-7]可能性較小。同樣在本文中4例HBeAg初檢陽性的樣本經(jīng)復(fù)檢后為陰性，其中3例為灰區(qū)樣本(1例為初檢為溶血標本)，1例為類風濕陽性。類風濕因子為變異的免疫球蛋白，其Fc受體可導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性。

本文有2例HBeAg濃度過高導(dǎo)致抗HBe檢測結(jié)果的假陽性。原理是當HBeAg濃度過高時，樣本中過剩的HBeAg與酶標抗體結(jié)合使固相HBeAb-HBeAg-HBeAb-HRP生成減少顯色下降產(chǎn)生假陽性。

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