程細祥

(上海仁愛醫(yī)院檢驗科，上海 200235)

解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum，Uu)和沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，Ct)是泌尿生殖道感染的重要致病因子，是婦科不孕癥的常見病因，而其感染率有逐年上升的趨勢[1]。生育期婦女通過性接觸感染Ct和Uu，可引起陰道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、急慢性輸卵管炎和盆腔炎等生殖道感染，常以無明顯癥狀為特征，但最終可導致不孕癥及異位妊娠[2]。由于無癥狀患者觀察的困難性，以及檢測方法的局限性，目前Uu、Ct對于女性不孕的致病性和致病機理仍有待深入研究。為了深入探討Uu和Ct感染與女性不孕癥的關(guān)系，本研究通過熒光定量PCR方法，檢測女性不孕癥患者宮頸分泌物中Uu-DNA與Ct-DNA的表達情況，以探討Uu與Ct在女性不孕患者中的感染情況和致病機制。

1 資料與方法

1.1 研究對象 觀察組選自2008年5月至2009年7月在我院婦科門診就診的121例女性不孕患者，年齡22～41歲,平均31.7歲。選擇102例正常生育婦女作為對照組，均來自本院正常體檢人群，年齡21～38歲平均29.6歲。兩組年齡差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 標本采集方法 所有分泌物標本采樣應(yīng)在非月經(jīng)期進行；采樣前3d內(nèi)不使用陰道內(nèi)藥物，不沖洗陰道；24h內(nèi)不應(yīng)有性行為。用棉球沾無菌生理鹽水洗去宮頸外分泌物(去除白帶)，再用無菌棉拭子插入宮頸內(nèi)，停5s后旋動棉拭子采取宮頸分泌物，將帶有標本的棉拭子置1.5ml無菌離心管 (加1ml無菌生理鹽水)中漂洗，將蓋子壓緊用膠布密封管口以防標本外泄。處理標本時要做到無菌操作，立即送檢。

1.3 檢測方法 采用熒光定量PCR方法，每份標本均進行Uu-DNA和Ct-DNA核酸擴增熒光檢測。Ct和Uu PCR引物及Ct和Uu核酸擴增熒光檢測試劑盒，以及DNA純化試劑盒，均由中山大學達安基因股份有限公司合成和生產(chǎn)。實驗步驟嚴格按照廠家實際說明書執(zhí)行，實驗儀器為羅氏的licycle 480全自動實時熒光定量PCR儀。

1.4 檢測結(jié)果的處理分析 全部數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理，率的檢驗使用卡方分析，P＜0.05提示差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 解脲脲原體DNA檢測結(jié)果：觀察組宮頸分泌物中檢測出解脲脲原體DNA陽性率為44.6%(54/121)，定量值 1.9×103～2.7×106copies；對照組陽性率17.6%(18/102)，定量值 7.3×103～4.3×106copies，兩組比較差異有非常顯著性(P＜0.01，見表1)。

2.2 沙眼衣原體DNA檢測結(jié)果 觀察組宮頸分泌物中檢測出沙眼衣原體DNA陽性率為27.3%(33/121)，定量值 3.9×103～1.7×107copies；對照組陽性率6.9%(7/102)，定量值 1.5×104～6.1×106copies，兩組比較差異有非常顯著性(P＜0.01，見表1)。

2.3 觀察組宮頸分泌物中，解脲脲原體DNA和沙眼衣原體DNA均陽性者19例，對照組宮頸分泌物中，解脲脲原體DNA和沙眼衣原體DNA均陽性者1例，兩組比較差異有非常顯著性(P＜0.01，見表1)。

表1 女性不孕患者宮頸分泌物中Uu-DNA和Ct-DNA的表達情況例數(shù)(%)

3 討論

支原體是能在細胞外獨立生存的最小微生物，種類繁多，其中Uu是引起人類泌尿生殖系統(tǒng)感染的病原體之一，與性傳播有關(guān)；Ct為專性上皮細胞內(nèi)寄生的原核細胞型微生物，易侵犯泌尿及生殖道上皮，可引起女性尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎，并最終導致不孕癥及異位妊娠。

國內(nèi)外研究表明，Ct導致女性不孕的致病機制比較明確，一方面，Ct能產(chǎn)生內(nèi)毒素，導致生殖腔道的炎癥、黏連和阻塞，使黏膜細胞壞死，輸卵管纖毛運動停滯，引起不孕[3]。另外，Ct感染可使宮頸黏液的葡萄糖含量降低，影響進入宮頸管中的精子的活力而致不孕[4]。

Uu導致女性不孕的致病機理目前仍不清楚，有研究認為，炎癥所致的輸卵管性不孕與生殖道(通常指宮頸)Uu感染有關(guān)[5]。然而也有人認為，不孕癥患者宮頸、陰道Uu陽性率與輸卵管損傷不相關(guān)[6]。因此，Uu的致病性及其致病機制有待深入研究。本研究通過熒光定量PCR方法，觀察女性不孕癥患者宮頸黏液Uu-DNA和Ct-DNA的表達情況。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在我院就診的女性不孕患者中，Uu-DNA和Ct-DNA的表達與對照組相比均有顯著增加，提示Uu與Ct的感染與女性不孕密切相關(guān)，研究也發(fā)現(xiàn)，在正常對照組中，Uu也有相當高的感染率 (17.6%)，提示Uu可能是一種條件致病菌，與Uu相比，Ct在觀察組和對照組中的感染率都較低，提示Ct與女性不孕癥的相關(guān)性更高，應(yīng)該是女性不孕癥的重要致病因素，Uu與Ct的混合感染率也提示這兩種介于細菌和病毒之間的微生物可能在致病方面有一定的協(xié)同作用。

在臨床實踐中，使用Uu-DNA檢測陽性和Uu培養(yǎng)陽性作為抗生素用藥指標的做法非常普遍，在Uu檢測出現(xiàn)反復陽性時又往往誤判為耐藥，從而更換或聯(lián)合使用另外的抗生素，最終導致抗生素的濫用，而抗生素大量使用造成的菌群失調(diào)會進一步加重炎癥反應(yīng)，造成惡性循環(huán)，給病人帶來更多的痛苦和負擔。本研究結(jié)果提示，在女性不孕的致病機理中，Ct-DNA檢測可能更適合作為造成女性不孕癥的病因診斷，而Uu-DNA檢測則更適合作為炎癥病因判斷和混合感染導致女性不孕的輔助性病因診斷指標。

[1]黃美瓊,李北坤,陸翠群.女性不孕患者解脲支原體感染檢測及耐藥性分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2009,6(10):773-774.

[2]Pimenta JM,Catchpole M,Rogers PA.Opportanistic screening for genital chlamydial infection.Ⅱ:prevalence among healthcare attendersoutcome and evaluation of positive cases[J].Sex Transm Infect,2003,79(1):22-27.

[3]郝翠芳,曹積功,楊秋花,等.不孕婦女宮頸沙眼衣原體感染的臨床觀察[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2002,18(3):183-184.

[4]趙曉嵐,楚雍烈,葉國玲,等.反復流產(chǎn)和不孕癥與支原體和免疫因素的關(guān)系[J].第四軍醫(yī)大學學報,2003,24(20):1884-1886.

[5]周紅霞.204對不孕夫婦支原體感染臨床分析[J].中國婦幼保健,2006,21(15):2110-2111.

[6]彭慧蘭,曹來英,魏敏.孕婦與不孕癥婦女解脲支原體、沙眼衣原體感染的研究[J].第四軍醫(yī)大學學報,2005,26(1):64-66.