王運(yùn)中，陶云珍，吾金彪，丁云芳

(蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 蘇州 215003)

流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae，HI)是兒童呼吸道感染的重要致病菌之一，還可引起腦膜炎、敗血癥、心包炎、蜂窩組織炎等侵襲性感染。隨著抗生素在臨床上的廣泛使用，HI對β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥以及多重耐藥株的出現(xiàn)，給臨床治療帶來了一定的困難。為了解本地區(qū)HI的流行趨勢及其耐藥情況，對2007年1月～2009年12月入住我院的急性呼吸道感染患兒的HI分布及其耐藥性進(jìn)行研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1菌株來源 2007.1～2009.12入住呼吸科急性呼吸道感染患兒，采用無菌負(fù)壓吸痰器采集標(biāo)本，經(jīng)培養(yǎng)分離而得。

1.1 .2 HI選擇性培養(yǎng)基 以哥倫比亞瓊脂(OXOID公司產(chǎn)品)為基礎(chǔ)制備巧克力平板，澆注平板前(約50℃)加入萬古霉素(50mg/l)。

1.1 .3 HI藥敏培養(yǎng)基及抗生素紙片 采用HI專用藥敏培養(yǎng)基HTM(基礎(chǔ)瓊脂及添加劑SR158E)，抗生素紙片均為OXOID公司產(chǎn)品，分別為：復(fù)方新諾明(SMZ/TMP)、阿奇霉素(AZM)、氨芐西林(AMP)、氨芐西林/舒巴坦(SAM)、環(huán)丙沙星(CIP)、氯霉素(CL)、美洛培南(MEM)、四環(huán)素(TE)、頭孢呋辛(CXM)、頭孢克洛(CEC)、頭孢曲松(CRO)、頭孢他啶(CAZ)。 質(zhì)控菌株為HIATCC49247。

1.1 .4 Nitrocefin紙片為美國BBL公司產(chǎn)品。

1.1 .5 Vitek-NHI試卡：購自上海祥和公司。

1.2 方法

1.2 .1菌株分離及鑒定 將標(biāo)本接種于血平板和巧克力平板， 置35℃、5%CO2環(huán)境下培養(yǎng)18～24h，如血平板上不生長，在巧克力平板上生長，透明或半透明、濕潤、中等大小的菌落，染色鏡檢為革蘭陰性短小桿菌，則考慮為嗜血桿菌，進(jìn)一步做因子需求試驗(yàn)，可疑者用Vitek-NHI試卡鑒定證實(shí)。

1.2 .2β-內(nèi)酰胺酶測定 用頭孢硝噻酚(Nitrocefin)顯色反應(yīng)法測定β-內(nèi)酰胺酶。

1.2 .3藥敏試驗(yàn) 采用K-B法，結(jié)果按CLSI2009標(biāo)準(zhǔn)判讀。

2 結(jié)果

2.1 HI感染的陽性率 共收集到呼吸科急性呼吸道感染患者痰標(biāo)本5670份，共檢出HI191株，總陽性率3.4%，其中2007～2009年陽性率分別為3.3%(55/1693)、2.6%(50/1957)、4.3%(86/2020)。

2.2 HI感染的年齡分布 共檢出HI感染191例(男 122例， 女69例)， 其中＜3歲152例，3～5歲30例，＞5歲9例，＜3歲年齡組占總陽性例數(shù)79.6%。

2.3 HI感染的季節(jié)分布見表1。

表1 HI感染的季節(jié)分布

2.4 β-內(nèi)酰胺酶檢出分布 191株HI檢出β-內(nèi)酰胺酶陽性65株，總陽性率34.0%，其中07～09年產(chǎn) 酶 率 分 別 為 34.6%(19/55)、34.0%(17/50)、33.7%(29/86)。

2.5 HI對常用抗生素的耐藥情況見表2。

表2 HI對常用抗生素的耐藥率(%)

2.6 HI對常用抗生素的多重耐藥情況 檢出多重耐藥株34株，多重耐藥率為17.8%。具體耐藥模式見表3。

表3 34株多重耐藥HI對常用抗生素的多重耐藥模式

3 討論

HI是小兒急性呼吸道感染的主要病原菌之一，由于其常寄居于人的上呼吸道，可通過呼吸道在人與人之間傳播，因此也是我國兒童社區(qū)獲得性肺炎的重要病原菌之一。在本研究中，連續(xù)3年HI的總分離率為3.4%，07～09年分別為3.3%、2.6%、4.3%，高于鐘天鷹等[1]報道2.5%的檢出率，低于楊亞靜等[2]報道11.9%的分離率，但與王傳清等[3]報道呼吸道感染HI4.5%的陽性率較接近。HI引起的兒童呼吸道感染主要發(fā)生于3歲以下年齡組，占總陽性數(shù)的79.6%，這可能由于3歲以下嬰幼兒的免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未健全，缺乏對HI的抵抗力，使得HI易于在呼吸道定植有關(guān)。從季節(jié)分布看，HI引起的呼吸道感染主要發(fā)生于冬春季，占總陽性數(shù)的63.9%，以春季最高，其次是冬季、夏季，秋季最低。這主要與寒冷季節(jié)兒童局部呼吸道粘膜防御下降以及室內(nèi)通風(fēng)不良等因素有關(guān)。

隨著抗生素在臨床上的廣泛使用，全球HI的耐藥性也不斷增加。氨芐西林作為治療HI感染的一線用藥，其耐藥形勢不容樂觀，自從1972年首次在歐洲報道耐藥以來，世界各國相繼有其耐藥的報道，在我國不同地區(qū)報道有所差別，在3.2～50.0%之間[4]。本研究顯示，2007～2009年，氨芐西林耐藥率在33.7～41.8%，明顯高于本地區(qū)2001～2003年15.6%的研究結(jié)果[4]，亦高于 廣州地區(qū)30.0%與歐洲16.8%的結(jié)果[5，6]。從其耐藥機(jī)制看，HI對氨芐西林耐藥主要是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，且主要以質(zhì)粒介導(dǎo)的TEM型為主[7]，本研究未發(fā)現(xiàn)β-內(nèi)酰胺酶陰性氨芐西林耐藥株。三年中HI的總產(chǎn)酶率為34.0%，高于本地區(qū)2001～2003年16.3%的結(jié)果[4]。

藥敏結(jié)果顯示，HI對SMZ/TMP耐藥最為嚴(yán)重，其次是氨芐西林、四環(huán)素、頭孢克洛、氯霉素，而對其他抗生素的耐藥率均小于5%，但我們發(fā)現(xiàn)阿奇霉素耐藥率有逐年增高趨勢，其耐藥性值得關(guān)注。在本研究中共檢出HI多重耐藥株34株，多重耐藥率為17.8%，且主要為氨芐西林合并其他抗生素耐藥，這可能與質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因同時又?jǐn)y帶其他抗生素的耐藥基因有關(guān)。從其耐藥模式看，主要以AMP+SMZ/TMP+CL+TE耐藥為主，其次是AMP+SMZ/TMP+CEC和AMP+SMZ/TMP+CEC+TE耐藥，而其他幾種耐藥模式較少，其具體耐藥機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

[1]鐘天鷹,遲富麗,王惠云,等.807株流感嗜血桿菌的血清分型及耐藥性的研究[J].中國生化藥物雜志,2008,29(3):199-200.

[2]楊亞靜,黃 誠,王 莉,等.兒童下呼吸道感染1523例細(xì)菌病原分析[J].四川醫(yī)學(xué),2007,28(1):105-106.

[3]王傳清,王藝,王曉紅,等.2000至2006年復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院呼吸道感染患兒4種常見細(xì)菌分離率及耐藥趨勢[J].中國循證兒科雜志,2007,2(3):197-204.

[4]陶云珍,諸麗娟,閔蘭芳,等.兒童感染流感嗜血桿菌的耐藥性分析[J].中國抗感染化療雜志,2004,4(6):337-339.

[5]Fluit AC,Florijn A,Verhoef J,et al.Susceptibility of European beta-lactamase-positive and-negative Haemophilus influenzae isolates from the periods 1997/1998 and 2002/2003[J].Antimicrob chemother,2005,56(1):133-138.

[6]黃旭強(qiáng),肖作源,鄧 力,等.2003-2004年廣州地區(qū)兒童肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌抗生素敏感性調(diào)查[J].中華兒科雜志,2006,44(6):441-444.

[7]Karlowsky JA,Verma G,Zhanel GG,et al.Presence of ROB-1 beta-lactamase correlates with Cefalor resistance among recent isolates of Haemophilus influenzae[J].Antimicrob chemother,2000,45:871-875.