許永志，謝志雄，朱小東

(解放軍第175醫(yī)院 廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 漳州 363000)

Coulter LH750全自動血細(xì)胞分析儀的性能評價(jià)

許永志，謝志雄，朱小東

(解放軍第175醫(yī)院 廈門大學(xué)附屬東南醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 漳州 363000)

Coulter LH750；全自動血液分析儀；性能評價(jià)

Coulter LH750是美國貝克曼庫爾特公司推出的全自動五分類血細(xì)胞分析儀，它可對血液的多種細(xì)胞組分(包括白細(xì)胞的五種組分)進(jìn)行定量分析[1]。其中紅細(xì)胞和血小板采用電阻抗檢測，血紅蛋白采用HiCN法檢測，白細(xì)胞則采用VCS結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)，經(jīng)專用的WBC/DIFF檢測通道(流動室)進(jìn)行測定。我們以ISCH[2]和NCCLS[3-5]制定的評價(jià)方案為標(biāo)準(zhǔn)，對該儀器的全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(complete blood count，CBC)和白細(xì)胞分類(differential count，DC)進(jìn)行性能評價(jià)[6]。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 美國Beckman-Coulter公司。

1.1.2 試劑 美國Beckman-Coulter公司原裝配套試劑，包括稀釋液、分類試劑包、溶血劑及清洗液。

1.1.3 質(zhì)控品 美國Beckman-Coulter公司原裝配套5C質(zhì)控品。

1.1.4 Olympus顯微鏡由日本奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會社生產(chǎn)。

1.1.5 其他手工測定血液細(xì)胞方法所用試劑，均為市售AR級試劑。

1.2 標(biāo)本采集 采自健康體檢者，部分為本院住院病人標(biāo)本，靜脈血(以EDTA-K3抗凝)。所有檢測均于采樣后2h內(nèi)完成。

1.3 方法

1.3.1 全血細(xì)胞計(jì)數(shù) CBC、DC、PLT、Hb自動分析按照儀器操作說明書進(jìn)行，在室內(nèi)質(zhì)控在控的情況下進(jìn)行測定。

1.3.2 主要性能評價(jià)試驗(yàn) 按照ICSH、NCCLS和CLIA’88提供的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，包括精密度、線性、攜帶污染率、準(zhǔn)確度、DC與人工分類結(jié)果比較的評估。

1.3.3 參考方法 白細(xì)胞手工分類由3位有經(jīng)驗(yàn)的工作人員采用雙盲法對同一標(biāo)本分類600個(gè)WBC，結(jié)果取平均值。

1.3.4 所有結(jié)果均經(jīng)Microsoft Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 精密度 測定結(jié)果表明：Coulter LH750全自動血液分析儀對血液各細(xì)胞組分的測定具有很高的精密度，測定所得的變異系數(shù)(CV%)均低于預(yù)期要求。詳見表1、表2。

表1 Coulter LH750批內(nèi)精密度測定結(jié)果

2.2 線性 取一份高值血細(xì)胞抗凝血樣本離心除去部分血漿，WBC、RBC、HGB、 和 PLT 值分別為 195.5×109/L、9.585×1012/L、297.5g/L和3299×109/L，以此樣本為100%。用稀釋液對血樣按 90%、80%、40%、20%、10%、2.50%、0%進(jìn)行稀釋，然后從低到高以LH750測定各稀釋樣本，并經(jīng)計(jì)算所得與各稀釋度預(yù)期值項(xiàng)比較。由于血小板的濃度過高，因此對于第二低值進(jìn)行再稀釋，然后測定各稀釋度的樣本，測定結(jié)果與各稀釋度的預(yù)示值作線性回歸分析。詳見表3。

2.3 攜帶污染率 取正常人全血，約4ml，混勻后分裝兩管；取三個(gè)干凈的試管，每管中加入大約2ml的稀釋液。將五個(gè)試管按前兩管為全血，后三管為稀釋液裝入同一試管架；將試管架放入樣本裝載區(qū)，儀器將自動進(jìn)行檢測。測定結(jié)束后儀器將自動計(jì)算出攜帶污染率，攜帶污染率(CV%)=[(D1-D3)/(B2-D3)]×100，D1表示第一管稀釋液結(jié)果，D3表示第三管稀釋液結(jié)果，B2表示第二管全血結(jié)果，結(jié)果見表4。

2.5 準(zhǔn)確度 通過2010年度第一次福建省臨檢中心室間質(zhì)評回報(bào)結(jié)果，所有項(xiàng)目數(shù)值均在允許范圍內(nèi)，且偏倚均小于我科質(zhì)量目標(biāo)預(yù)期值(＜1/2 CLIA’88)詳見表5。

2.6 與手工分類結(jié)果比較 取78份住院患者的抗凝血在LH750儀器上測定，每份樣本重復(fù)測2次取均值。同時(shí)每份血推3張符合質(zhì)控要求的血片，染色后由3位有經(jīng)驗(yàn)的技師在體尾交界處進(jìn)行白細(xì)胞分類，分為中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞五部分，每張血片油鏡分類計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞，共計(jì)800個(gè)白細(xì)胞取均值，再與LH750儀器的白細(xì)胞分類值進(jìn)行比較。以LH750儀器白細(xì)胞分類值為X軸、顯微鏡白細(xì)胞分類值為Y軸，其中45例非白血病標(biāo)本兩種方法的對比結(jié)果詳見表6。

表2 Coulter LH750批間精密度測定結(jié)果

表3 不同稀釋度預(yù)測值與實(shí)測值的相關(guān)性

表4 各參數(shù)攜帶污染率測定值及結(jié)果

表5 2010年度第一次福建省臨檢中心血細(xì)胞分析室間質(zhì)評結(jié)果

結(jié)果表明 LH750對N、L、E的分類結(jié)果較好，M次之，B的分類效果則尚可。

2.7 對幼稚細(xì)胞篩選的評估 對于33例有幼稚細(xì)胞的白血病標(biāo)本，儀器均有一個(gè)和/或多個(gè)報(bào)警提示及散點(diǎn)圖顯示異常。對這些33份標(biāo)本進(jìn)行手工鏡檢幼稚細(xì)胞，并與LH750進(jìn)行比較，相見表7。

表6 LH750與顯微鏡人工分類結(jié)果比較(n=45)

表7 LH750與手工鏡檢幼稚細(xì)胞比較

據(jù)此得出LH750對幼稚細(xì)胞篩選的有關(guān)預(yù)示值為：檢出靈敏度93.3%；檢出特異性88.9%；陽性預(yù)示值87.5%；陰性預(yù)示值94.1%。

3 討論

通過對LH750全自動血細(xì)胞分析儀的性能評價(jià)發(fā)現(xiàn)，該儀器對全血細(xì)胞計(jì)數(shù)線性良好，攜帶污染率非常低，CBC各參數(shù)精密度高，各參數(shù)指標(biāo)均符合本科室制定的質(zhì)量目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)。

比較DC與顯微鏡鏡檢結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)其中M和B的分類結(jié)果稍有偏差，分析其原因，可能與全血細(xì)胞中這類細(xì)胞的數(shù)量少，在制片的同時(shí)于血片上分布不均從而造成手工分類的偏差；也有可能進(jìn)行鏡檢分類操作者分析技術(shù)不夠完善等。同時(shí)，對幼稚細(xì)胞的篩選結(jié)果表明，LH750對異常細(xì)胞的檢出能力很強(qiáng)，有利于大量常規(guī)標(biāo)本的過篩，而對分類提示異常的標(biāo)本，仍需手工鏡檢分類。但由于本次統(tǒng)計(jì)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)標(biāo)本數(shù)量較少，儀器白細(xì)胞分類報(bào)警的真陽性率、假陽性率等指標(biāo)有待于今后增加白細(xì)胞分類的標(biāo)本數(shù)量再進(jìn)一步分析。

總之，通過對Coulter LH750血細(xì)胞分析儀的性能評價(jià)，結(jié)果顯示該儀器測定速度快、檢測參數(shù)多、精密度、準(zhǔn)確度高，與已知性能的血細(xì)胞分析儀相關(guān)性好，是一種性能優(yōu)良的全血細(xì)胞分析儀，能夠滿足臨床血液常規(guī)與大批量常規(guī)標(biāo)本的檢驗(yàn)需要。

[1]Coulter LH750 Operator Manuals.Beckman-Coulter Co,Ltd,USA.

[2]International Council for Standardization in Hematology.Guidelines for the evaluation of blood cell analyzer including those used for differential leukocyte and reticulocyte counting and cell i/larker application.Prepared by the ICSH expert panel on cytometry[J].Clin LabHemat,1994,16:157.

[3]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Leukocyte Differential Counting NCCLS Approved Standard H20-A2 [S].Villanova PA,1992.

[4]National Committee for Clinical Laboratory Standards．Procedures and devices for the coUecfion of diagnostic blood spedmens by skin puncture；Approved standard fourth edition[S].NCC1S document H4 A4(ISBN 1 56238-382-5),1999.

[5]余立江,等.NCCLS文件EP5T推薦的評價(jià)儀器精密度性能方法的應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1992(3):172-174.

[6]叢玉隆,王淑娟.今日臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,1997.

R446.11+1

B

1674-1129(2010)04-0399-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2010.04.036

南京軍區(qū)醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金課題（08MA076）