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        Survivin基因在鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系

        2010-03-21 07:28:18董英輝金永麗王靖華陳龍邦馬恒輝
        河北醫(yī)藥 2010年13期
        關(guān)鍵詞:鼻型淋巴瘤免疫組化

        董英輝 金永麗 王靖華 陳龍邦 馬恒輝

        鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤是一類少見的淋巴瘤亞型,具有特殊的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)、免疫表型及生物學(xué)特性,對化療藥物極易產(chǎn)生耐藥性,生存時(shí)間短,預(yù)后不良,是近年來國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)之一。Survivin是迄今為止發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子。Survivin的組織分布具有明顯的特征性,除胸腺和生殖腺外,Survivin在正常分化成熟的組織細(xì)胞中不表達(dá),而當(dāng)細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化或細(xì)胞惡變時(shí)又重新獲得表達(dá),在卵巢癌、肺癌、胃癌、惡性淋巴瘤等絕大多數(shù)腫瘤中 Survivin都有高表達(dá)。本文旨在研究凋亡抑制蛋白 Survivin在鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá),并進(jìn)一步分析其表達(dá)與細(xì)胞增殖的關(guān)系。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 50例鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤標(biāo)本為 2000至2007年南京軍區(qū)南京總醫(yī)院病理科存檔蠟塊,其中男 32例,女18例;年齡 7~78歲,平均年齡 38歲;發(fā)生部位主要為鼻腔、鼻咽部、上腭等面中線部結(jié)構(gòu);所有病例診斷前均未做治療。標(biāo)本均用 10%中性甲醛固定,石蠟包埋組織。參照 WHO(2000年)關(guān)于淋巴組織腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn),并做 LCA、CD 3ε、CD 56、Perforin、GranB免疫組化染色明確診斷和分類。另取 12例正常淋巴結(jié)組織作為對照。

        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人 Survivin多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司(濃縮型,稀釋度 1∶200),鼠抗人 Ki-67單克隆抗體(濃縮型,稀釋度 1∶200)、免疫組化 Envision試劑、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

        1.3 免疫組化方法 采用免疫組化 Envision System,步驟如下:組織蠟塊 4μm厚切片,脫蠟至水,高溫高壓抗原修復(fù),一抗4℃孵育過夜,EnvisionTM試劑室溫下孵育 30min,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,脫水,透明,中性樹膠封片后光鏡下觀察。采用已知的免疫組化染色陽性標(biāo)本作為陽性對照,以PBS代替一抗作為陰性對照。

        1.4 結(jié)果判定

        1.4.1 Survivin染色的判斷標(biāo)準(zhǔn):Survivin陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞質(zhì),少數(shù)定位于胞核,為淡黃色至棕黃色顆粒狀。根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和著色深度計(jì)分,每例隨機(jī)觀察 5個(gè)高倍鏡(×400)視野,按下列標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分:陽性表達(dá)細(xì)胞 <5%為 0分,5%~24%為1分,25% ~49%為 2分,50% ~74%為 3分,>75%為 4分。陽性細(xì)胞表達(dá)的著色深度:基本不著色為 0分,淡黃色為 1分,黃色為 2分,棕黃色為 3分。兩者得分相乘,少于 1分的病例判定為表達(dá)陰性,其余的病例判定為表達(dá)陽性。

        1.4.2 ki-67增殖指數(shù):ki-67陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞核,為黃色至棕黃色顆粒狀。隨機(jī)選擇至少5個(gè)高倍鏡(×400)視野進(jìn)行計(jì)數(shù),每個(gè)視野計(jì)數(shù) 500個(gè)腫瘤細(xì)胞,計(jì)算ki-67陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比,即為ki-67增殖指數(shù)。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用 SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件,采用 Fisher精確概率法和兩獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 Survivin基因在鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤和正常淋巴結(jié)組織中的表達(dá) 鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤中 Survivin陽性表達(dá)率為60%(30/50),正常淋巴結(jié)組織中 Survivin陽性表達(dá)率為16.7%(2/12),均呈弱陽性(圖 1),且主要表達(dá)于少數(shù)生發(fā)中心細(xì)胞,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.82,P<0.05)。

        2.2 Survivin基因表達(dá)與Ki-67增殖指數(shù)的關(guān)系 Survivin陽性表達(dá)的鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤 Ki-67增殖指數(shù)為(38±16)%,而 Survivin陰性表達(dá)的鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤 Ki-67增殖指數(shù)為(23±22)%,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.80,P<0.05)。Survivin陽性表達(dá)組的增殖指數(shù)顯著高于陰性組,提示 Survivin陽性表達(dá)的鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng)。見圖 2。

        圖 1 Survivin在鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤中陽性表達(dá)(Envision×200)

        圖 2 ki-67在鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)(Envision×100)

        3 討論

        Survivin在細(xì)胞增殖、凋亡和血管形成等多方面均起著重要作用。Survivin的組織分布有明顯的細(xì)胞選擇性,它表達(dá)于胚胎和發(fā)育的胎兒組織,不見于終末分化的正常成人組織(胸腺和生殖腺除外),但在體內(nèi)外分化組織、人類大多數(shù)腫瘤組織內(nèi)有 Survivin的表達(dá)[1,2],提示 Survivin在腫瘤的發(fā)生中可能具有重要作用。顧霞等[3]研究發(fā)現(xiàn)在不同類型的淋巴瘤中Survivin的表達(dá)水平存在明顯的差異,Survivin的高表達(dá)與高度惡性相關(guān),并認(rèn)為其可能作為淋巴瘤診斷、分型的一個(gè)分子標(biāo)記。本組鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤中 Survivin陽性表達(dá)率占 60.00%,而在 12例正常淋巴結(jié)組織中 Survivin僅 2例弱陽性表達(dá),且主要局限于少數(shù)代表 B細(xì)胞增殖的生發(fā)中心細(xì)胞,證實(shí)鼻 NK/T細(xì)胞淋巴瘤中Survivin基因表達(dá)上調(diào),提示Survivin基因在鼻NK/T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。Survivin生發(fā)中心的弱陽性表達(dá),提示其可能對與細(xì)胞生存和增殖有一定的調(diào)節(jié)作用,或其表達(dá)受到內(nèi)部微環(huán)境中的某些因素的調(diào)節(jié)。梁群英等[4,5]分別檢測了 24例和 25例鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤中 Survivin的表達(dá),陽性率分別為 45.8%(11/24)和 68%(17/25),均顯著高于對照組,都認(rèn)為 Survivin可能參與了鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展。

        作為凋亡抑制蛋白,Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)凋亡抑制作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子[6]。Survivin可通過多種調(diào)控機(jī)制,發(fā)揮其強(qiáng)大的抗凋亡作用。同時(shí),它也是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子,在抑制細(xì)胞凋亡和在細(xì)胞周期的 G2/M期中保證正常細(xì)胞分裂均起重要作用,并且具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用[7]。臨床研究表明,ki-67抗原的表達(dá)可反映腫瘤細(xì)胞的增殖特性,與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后高度相關(guān)[8]。在本研究中,鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤 Survivin陽性表達(dá)的 ki-67增殖指數(shù)顯著高于 Survivin陰性表達(dá)的 ki-67增殖指數(shù),Survivin的表達(dá)與 ki-67增殖指數(shù)呈正相關(guān),提示 Survivin可能促進(jìn)鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤的細(xì)胞增殖。朱紅霞等[9]發(fā)現(xiàn)高表達(dá) survivin的 HEK 293細(xì)胞生長速度加快,高密度生長耐受能力也較對照高,表明 Survivin使HEK 293細(xì)胞生長中的接觸抑制作用下降,集落形成能力增強(qiáng)。

        本研究顯示,Survivin在鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤中高表達(dá),提示Survivin在鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展中起到一定的作用。Survivin表達(dá)與腫瘤細(xì)胞增殖呈明顯正相關(guān),表明其發(fā)揮抗凋亡作用的同時(shí)亦有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖作用。這為進(jìn)一步闡明 Survivin在鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生發(fā)展中的作用具有啟發(fā)意義。

        1 Sarela AI,Macadam RC,F(xiàn)armery SM,et al.Expression of theanti-apoptosisgene,surviving,predicts death from recurrent colorectal carcinoma.Gut,2000,46:645-650.

        2 Trieb K,Lehner R,Stulnig T,et al.Survivin expression in human osteosarcoma isa marker for survival.Eur JSurg Oncol,2003,29:379-382.

        3 顧霞,林漢良.不同類型淋巴瘤 survivin的表達(dá)及其意義.癌癥,2004,23:655-661.

        4 梁群英,郭瑞珍,唐文臺,等.survivin基因在鼻型 NK/T細(xì)胞淋巴瘤的表達(dá)及其與 p53和 bcl-2基因表達(dá)的關(guān)系.腫瘤防治雜志,2003,10:343-344,369.

        5 明萌,鄒典定,王大斌,等.鼻NK/T細(xì)胞淋巴瘤生存素基因表達(dá)與細(xì)胞凋亡和增殖的關(guān)系.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2004,25:501-503,520.

        6 Adida C,Crotty PL,McGrath J,et al.Developmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosisgene survivin in human andmouse differentiation.Am JPathol,1998,152:43-49.

        7 楊連粵,易彤波.caspase-3、caspase-8與 Fas介導(dǎo)凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其在肝細(xì)胞癌凋亡中的作用.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2000,10:27-29.

        8 Backus HH,Van Goeningen CJ,Vos W,et al.Differential expression of cell cycle and apoptosis related proteins in colorectal mucosa,primary colon tumors,and livermetastases.JClin Pathol,2002,55:206-211.

        9 朱紅霞,劉爽,周翠琦,等.抗凋亡基因 survivin促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制.中華醫(yī)學(xué)雜志,2002,82:338-340.

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