張志梅 孫 輝

兩種血涂片染色方法在教學(xué)和臨床應(yīng)用的比較

張志梅 孫 輝

血涂片；教學(xué)；臨床應(yīng)用

血涂片染色廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和教學(xué)片的制作，在臨床上血涂片染色效果將直接影響血細(xì)胞形態(tài)學(xué)辨認(rèn)及疾病診斷，在教學(xué)上血涂片的制作和染色質(zhì)量也會(huì)直接影響到學(xué)生觀察的效果。我們醫(yī)院是漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校的附屬醫(yī)院，作為一個(gè)教學(xué)醫(yī)院，既要保證一般臨床檢驗(yàn)工作的需要，又要考慮教學(xué)和保存標(biāo)本的需要，為此，我們觀察比較了瑞氏染色法（Wright，stain）和瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染色法，以其探討既利于日常臨床檢驗(yàn)工作，又能緊緊結(jié)合細(xì)胞學(xué)教學(xué)的染色技術(shù)。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

700張血涂片均來自2008年1月至2009年8月，漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科采集的130份患者末梢血或者靜脈血血樣、120份臨床檢驗(yàn)科無需保存、排除無傳染性的靜脈血（加過EDTA-K2抗凝劑）、50份學(xué)生自愿相互采集的末梢血或者靜脈血血樣，每份血樣均加EDTA-K2抗凝劑，根據(jù)采血量和病情需要制成2～5張血片分別用瑞氏和瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染液染色，兩種染色液均根據(jù)第三版全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[1]由本實(shí)驗(yàn)室自行配制。

1.2 染色方法

瑞氏染色法和瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染色法的操作及注意事項(xiàng)主要依據(jù)全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程、供醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)用的《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》第3版[2]等教材。

1.2.1 試劑

瑞氏（Wright）染液：包含瑞氏染料粉1.0g、甲醇（AR）600mL、中性甘油15mL。瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液：包含瑞氏染料粉1.0g、姬姆薩染料粉0.3g、甲醇（AR）500mL、中性甘油10mL。pH 6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液：包含無水磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.3g、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）0.2g、蒸餾水加至1000mL。按臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程預(yù)先配好。

1.2.2 瑞氏（Wright）染色法

我們使用配制1個(gè)月后的Wright氏染液和pH 6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液。①滴加瑞氏染液數(shù)滴，固定0.5～1min；②加緩沖液，按染液∶緩沖液為1∶1～1∶2加磷酸鹽緩沖液，混勻，染色5～10min后用接近中性的清水沖洗干凈，待干。③如需保存，二甲苯透明，樹膠封片。染色時(shí)間與染液的濃度、室溫高低和有核細(xì)胞數(shù)量有關(guān)。根據(jù)需要每份染1～2張血片。

1.2.3 瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染色法染色步驟同瑞氏（Wright）染色法，只是將瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液代替瑞氏染液。

1.2.4 注意事項(xiàng)

未干透血膜不能立即染色，否則染色時(shí)血膜易脫落；染色時(shí)間的長短與染液的濃度、室溫高低和有核細(xì)胞數(shù)量有關(guān)；加染液量應(yīng)適當(dāng)；沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖洗；沖洗完的血涂片應(yīng)立放于支架上；染色偏酸偏堿時(shí)應(yīng)更換緩沖液。

1.3 觀察方法

先在低倍顯微鏡下尋找體尾交界細(xì)胞分布好的地方，再換高倍和油鏡認(rèn)真觀察紅細(xì)胞和血小板染色、形態(tài)，白細(xì)胞胞質(zhì)、胞核、顆粒著色情況，詳細(xì)記錄觀察結(jié)果。

2 結(jié) 果

染色適宜的血膜，外觀呈淡琥珀色，顯微鏡下紅細(xì)胞染成淺紅色，中央著色淺，周圍較深，血小板染成紫紅色，白細(xì)胞胞質(zhì)中的顆粒能顯示出各種細(xì)胞的特有色彩，細(xì)胞核染紫紅色。瑞氏染色法：對(duì)白細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和各種粒細(xì)胞顆粒染色效果好，染色時(shí)間短，最適于一般臨床檢驗(yàn)；瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染色法：除保留了瑞氏染色對(duì)細(xì)胞質(zhì)和顆粒染色效果好的優(yōu)點(diǎn)，又兼有對(duì)細(xì)胞核染色效果好，結(jié)構(gòu)顯示更為清晰，更適于制作教學(xué)用的標(biāo)本；但染液變性快、易污染并且成本高。

3 討 論

血細(xì)胞染色液種類很多，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）推薦羅曼諾夫斯基（Romanowsky）染色為標(biāo)準(zhǔn)染色法[3]，但根據(jù)我國的情況，全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程推薦的是瑞氏染色法和瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合染色法，這也是目前國內(nèi)最為常用的血涂片染色方法。通過我們對(duì)700張血涂片用兩種染色方法染色的觀察比較，我們認(rèn)為瑞氏染色法最適于一般臨床檢驗(yàn)；瑞氏-姬姆薩氏復(fù)合法更適于特殊標(biāo)本以及制作教學(xué)用的標(biāo)本使用。也有文獻(xiàn)報(bào)道[4]，單獨(dú)用姬姆薩氏染色法更適于特制作教學(xué)用的血涂片標(biāo)本使用，但該法對(duì)細(xì)胞質(zhì)和顆粒著色較差，我們沒有作對(duì)比觀察。還有一種伊紅美藍(lán)快速染色法，時(shí)間短，只需2min，但對(duì)各種血細(xì)胞的染色效果不好，只有經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員才能觀察，且對(duì)幼稚血細(xì)胞的觀察也不使用，所以，臨床上很少使用，更不能用于實(shí)驗(yàn)教學(xué)。

[1] 葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:123-124.

[2] 吳曉蔓.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:7.

[3] 趙捷,李揚(yáng).四種血細(xì)胞染色液染色效果的評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2005,20(6):510.

[4] 張賽霞,張立群,吳紹鋒.幾種血涂片染色方法的比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2007,6(7):124.

R446.11+2

A

1671-8194（2010）17-0173-02

漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科（462000）