丁立平 李 華

(南平出入境檢驗(yàn)檢疫局，南平 353000)

八氯二丙醚(S-421)為淡黃色液體，帶香味，有較好的穩(wěn)定性[1]，常用作農(nóng)藥增效劑，可以和多數(shù)的殺蟲劑如有機(jī)磷、氨基甲酸酯、有機(jī)氯和擬除蟲菊酯發(fā)生不同程度的作用，增加殺蟲效果[2，3]，對(duì)防止昆蟲產(chǎn)生抗藥性有較好的作用，因此在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用較為廣泛。研究表明，蔬菜、水果、茶葉中八氯二丙醚的微量殘留可能對(duì)人體具有一定的致癌、致畸變作用[4-6]，存在較大的隱患。為了強(qiáng)化管理，減少危害，農(nóng)業(yè)部出臺(tái)了自2008年開始不得銷售含有八氯二丙醚的農(nóng)藥產(chǎn)品的規(guī)定。同時(shí)作為茶葉生產(chǎn)和銷售大國(guó)，我國(guó)對(duì)日本和歐盟茶葉出口量巨大，但是在對(duì)日本出口10項(xiàng)檢測(cè)和對(duì)歐盟出口15項(xiàng)檢測(cè)中，相關(guān)國(guó)家對(duì)八氯二丙醚殘留量都有嚴(yán)格要求，其殘留量成為影響我國(guó)茶葉出口的壁壘之一，因此建立快速準(zhǔn)確檢測(cè)茶葉中的八氯二丙醚殘留量方法成為當(dāng)務(wù)之急。

目前，我國(guó)檢測(cè)進(jìn)出口茶葉中的八氯二丙醚主要采用SN 1774-2006中規(guī)定的方法[7]，國(guó)內(nèi)其它有關(guān)茶葉中八氯二丙醚的研究報(bào)道較少[8-10]。筆者采用丙酮-石油醚(體積比為1∶1)提取，濃硫酸凈化，氣相色譜定量分析，可以滿足茶葉中八氯二丙醚檢測(cè)需要。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 7890A型，配有μECD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，美國(guó)安捷倫科技有限公司；

超聲波清洗器：KQ-500TDB型，上海昆山儀器設(shè)備廠；

氮吹儀：HGC-12A型，天津恒奧科技公司；

均質(zhì)器：上海醫(yī)療器械公司；

渦旋混合器：德國(guó)IKA公司；

臺(tái)式離心機(jī)：北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司；

固相萃取裝置：Visiprep DL SPE型，美國(guó)Supelco公司；

具塞塑料試管: 25 mL；

塑料離心管: 15 mL;

中性氧化鋁:100～75 μm(100～200目);

活性炭、氯化鈉:分析純;

濃硫酸：優(yōu)級(jí)純；

丙酮、石油醚(沸程30～60℃)、正己烷：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

八氯二丙醚標(biāo)準(zhǔn)樣品：針劑型，100 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；

丙酮、石油醚、正己烷：農(nóng)殘級(jí)試劑；

實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

八氯二丙醚標(biāo)準(zhǔn)品保存在4℃冰箱中，使用時(shí)用正己烷配制成2.0 μg/mL儲(chǔ)備液，并根據(jù)需要配制成相應(yīng)的使用液。

(2)樣品制備

將約500 g的茶葉試樣按照四分法對(duì)角取樣約50 g,用均質(zhì)機(jī)磨碎成均勻粉末狀，裝入潔凈的容器中密封備用。

(3)樣品提取與凈化

提?。涸谒芰显嚬苤蟹Q取1.000 g茶葉粉末(精確到4位有效數(shù)字)，加入1.5 mL的飽和食鹽水，渦旋混勻，置于超聲波中超聲10 min使其浸透充分，加入10 mL混合提取液，渦旋30 s，超聲10 min，以4 000 r/m離心5 min，取上清液于15 mL離心管中45℃下吹干，殘?jiān)匦绿崛∫淮危蹈桑齼艋?/p>

凈化：向離心管中準(zhǔn)確量取2.00 mL正己烷渦旋溶解提取樣品，加入2.0 mL濃硫酸，渦旋1 min，以4 000 r/m離心5 min，吸取上清液待氣相色譜分析。

1.3 色譜條件

色譜柱：石英毛細(xì)管色譜柱HP-5(3 0 m×0.32 mm， 0.25 μm)，美國(guó)安捷倫科技有限公司；載氣和尾吹氣：氮?dú)?純度大于99.999%)，載氣流量為1.0 mL/min，尾吹氣流為30 mL/min；柱溫：初始溫度70℃保持1 min，以10℃/min升至280℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測(cè)器溫度：300℃；進(jìn)樣方式：不分流；進(jìn)樣量：1.0 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取液及提取條件的選擇

試驗(yàn)選擇丙酮-正己烷(體積比1∶2)混合液，丙酮-石油醚(體積比1∶1)混合液兩種提取液進(jìn)行提取，從提取效果來(lái)看，兩者之間沒有較大差別，但是使用丙酮-石油醚(體積比1∶1)混合液提取回收率較高，而且吹干時(shí)間較短，可以提高工作效率。

超聲波可以通過(guò)加速介質(zhì)質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)、空化作用和振動(dòng)勻化作用，達(dá)到使固體樣品分散，增大樣品與萃取溶劑之間的接觸面積，以提高目標(biāo)物從固相轉(zhuǎn)移到液相的傳質(zhì)速率的目的。試驗(yàn)考察了超聲提取的時(shí)間和超聲溫度兩個(gè)條件，最終確定溫度控制在30℃，超聲提取10 min，同時(shí)，采用二次超聲提取的條件較優(yōu)。

2.2 濃硫酸磺化凈化法和中性氧化鋁柱凈化效果比較

在凈化部分對(duì)磺化法和中性氧化鋁柱層析法凈化效果做了對(duì)比試驗(yàn)。采用中性氧化鋁-活性炭(質(zhì)量比為49∶1)3.0 g裝于5 mL注射器針管做成的SPE柱中，3 mL丙酮-石油醚混合液(體積比1∶1)淋洗柱體，1.0 mL丙酮-石油醚(體積比1∶1)溶解上柱，7.0 mL丙酮-正己烷(體積比1∶4)洗脫，吹干定容至1.00 mL分析。試驗(yàn)結(jié)果表明，添加0.02 mg/kg的6個(gè)樣品平均回收率可以達(dá)到103.5%，但是此過(guò)程較濃硫酸磺化法繁瑣，而且雜質(zhì)去除效果不如磺化法好。

2.3 濃硫酸凈化中的乳化問(wèn)題

在使用濃硫酸凈化時(shí)，由于茶葉提取物中含有較多蛋白質(zhì)、多糖、脂類等成分，這些成分在與濃硫酸作用時(shí)易形成膠狀物質(zhì)，從而使得在最后離心時(shí)發(fā)生乳化作用，正己烷液體被包含在乳狀物中。此時(shí)可以通過(guò)超聲并搖振破乳后重新離心得到正己烷溶解液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

將八氯二丙醚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋至0.01、0.02、0.04、0.16、0.4 μg/mL使用液，以標(biāo)準(zhǔn)品響應(yīng)值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，工作液濃度c(μg/mL)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在0.01～0.4 μg/mL范圍內(nèi)，線性良好，線性方程為A=70 135c-538.6,r2= 0.999 8。

按照S/N=3計(jì)算得到方法的檢出限為0.001 mg/kg。

2.5 回收率和精密度試驗(yàn)

由于日常檢測(cè)樣品中未有陰性樣品，只能做陽(yáng)性樣品添加試驗(yàn)，并在做添加前稱取6個(gè)同一樣品做平行試驗(yàn)，按照1.2方法進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算所得結(jié)果平均值為 0.004 mg/kg，以此作為樣品中八氯二丙醚含量。

稱取茶葉樣品1.000 g添加適宜濃度的八氯二丙醚標(biāo)準(zhǔn)液，制得所需要的陽(yáng)性添加樣品，并按照1.2實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)。由于日本和歐盟規(guī)定茶葉中八氯二丙醚的最高限量(MRL)為0.01 mg/kg，所以選擇包含0.01 mg/kg在內(nèi)的4個(gè)水平，每個(gè)水平做6個(gè)重復(fù)樣品。

通過(guò)外標(biāo)法進(jìn)行定量，在扣除樣品濃度后得到相應(yīng)的添加平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖見圖1，添加0.01 mg/kg濃度樣品色譜圖見圖2。

圖1 八氯二丙醚標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2 添加0.01 mg/kg濃度茶葉樣品色譜圖

3 結(jié)論

采用丙酮-石油醚混合液作為提取液，超聲波輔助提取的簡(jiǎn)便方式，快速高效地完成茶葉中八氯二丙醚的提取，并利用八氯二丙醚在濃硫酸中穩(wěn)定的特性，使用濃硫酸去除樣品雜質(zhì)，目標(biāo)物提取完全，凈化效果理想，測(cè)定結(jié)果可靠，方法靈敏度高，可以滿足日常農(nóng)藥快速分析的要求。

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