高 偉，李連宏

(1．大連市中心醫(yī)院 普外三科,遼寧 大連116033；2.大連醫(yī)科大學(xué) 病理與法醫(yī)學(xué) 教研室,遼寧 大連 116044)

胰島素樣生長(zhǎng)因子2(insulin-like growth factor 2，IGF-2)基因是第一個(gè)被證實(shí)的內(nèi)源性印跡基因，它的印記丟失已經(jīng)在乳腺癌等20多種腫瘤細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。IGF-2作為一類多功能細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控因子,對(duì)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和轉(zhuǎn)化起著調(diào)節(jié)作用，也可以與其他因素一起在乳腺癌發(fā)生機(jī)制中協(xié)同發(fā)揮作用。

本研究通過(guò)采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)IGF-2在乳腺癌中的表達(dá)情況，以及與Ki-67表達(dá)的相關(guān)性，分析其與乳腺癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移及與腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 材 料

收集2005年～2007年大連市中心醫(yī)院病理科乳腺組織送檢標(biāo)本，乳腺癌、乳腺纖維腺瘤和乳腺增生組織石蠟包埋標(biāo)本各40例，乳腺癌中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌29例，浸潤(rùn)性小葉癌11例，患者年齡30～73歲，平均年齡51.3歲。所有病例術(shù)前均未接受放療或化療。

IGF-2、Ki-67(鼠抗，單克隆，MID-1)、DAB顯色劑及檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.2 方 法

采用免疫組化SP法檢測(cè)IGF-2、Ki-67的表達(dá)。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，4 μm層厚連續(xù)切片，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，抗原修復(fù)后血清濕盒內(nèi)孵育，再陸續(xù)加入一抗(IGF-2，1∶75稀釋；Ki-67，工作液)，二抗(即用型生物素標(biāo)記的IgG)，三抗(鏈霉素抗生物素蛋白—過(guò)氧化酶液)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。每批染色均設(shè)置已知陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照以PBS替代一抗。

結(jié)果判斷：在高倍鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)視野，IGF-2陽(yáng)性表達(dá)部位在胞質(zhì)，取陽(yáng)性細(xì)胞占全部腫瘤細(xì)胞的百分比計(jì)數(shù)：按Kawamato的標(biāo)準(zhǔn)[1]，陽(yáng)性細(xì)胞< 30%計(jì)為(-)，31%～50%為(+)，51%～80%為(++)，≥81%為(+++)，(++～+++)為強(qiáng)陽(yáng)性。Ki-67陽(yáng)性表達(dá)部位在胞核，陽(yáng)性細(xì)胞占全部腫瘤細(xì)胞的百分比<5%計(jì)為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為(++)，≥50%為(+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析處理，樣品率的比較用四格表及行×列χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 IGF-2和Ki-67在不同乳腺病變中的表達(dá)

與對(duì)照組比較，雖然乳腺癌的IGF-2陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；但是，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，差異有顯著性意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。IGF-2在不同乳腺病變中的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)圖1；Ki-67在不同乳腺病變中的表達(dá)見(jiàn)圖2。

圖1 IGF-2在不同乳腺病變中的表達(dá)

圖2 Ki-67在不同乳腺病變中的表達(dá)

++～+++為強(qiáng)陽(yáng)性，3組間強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)比較，P<0.05

2.2 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性

在乳腺癌組中，IGF-2和Ki-67二者表達(dá)呈正相關(guān)性。見(jiàn)表2。

表2 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中表達(dá)的相關(guān)性

P<0.01,rs=0.433

2.3 IGF-2、Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

IGF-2和Ki-67二者在不同年齡、不同組織學(xué)類型及不同受體情況中的表達(dá)差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)。二者在原發(fā)灶大小不同和淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移組間表達(dá)差異有顯著性意義(P<0.05)。其中，淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組；原發(fā)灶直徑>2 cm組的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于原發(fā)灶直徑≤2 cm組。見(jiàn)表3。

3 討 論

IGF-2是一類小分子單鏈多肽類，其基因定位于染色體11P15，有研究已證實(shí)該基因的缺失會(huì)導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生[1]，而且IGF-2轉(zhuǎn)基因小鼠的乳腺癌發(fā)生率明顯增高[2]，說(shuō)明IGF-2在基因水平對(duì)乳腺癌發(fā)生有十分重要的意義。研究顯示，早期乳腺癌患者血清中游離IGF-2水平較正常人明顯升高[3]，說(shuō)明IGF-2與乳腺癌的發(fā)生關(guān)系密切。本研究顯示，IGF-2在乳腺增生、乳腺纖維腺瘤和乳腺癌組織中的表達(dá)逐漸升高，在乳腺癌組中的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)明顯高于另外兩組，提示IGF-2與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。這可能是由于IGF-2可以刺激細(xì)胞增殖，刺激組織器官的生長(zhǎng)、分化，因此腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)隨著IGF-2表達(dá)的升高而有所促進(jìn)[4]。

表3 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

分組nIGF-2陽(yáng)性陽(yáng)性率(%)Ki-67陽(yáng)性陽(yáng)性率(%)年齡(歲) ≤358675.0675.0 >35322784.42475.0原發(fā)灶直徑(cm) ≤210550.0330.0 >2302893.32790.0淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有262492.32284.6 無(wú)14964.3857.1受體情況 ER+PR+11981.8872.7 ER+PR-131184.6969.2 ER-PR+8787.5787.5 ER-PR-8675.0675.0類型 浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌292689.72379.3 浸潤(rùn)型小葉癌11763.6763.6

ER：雌激素，PR：孕激素

Ki-67是一種與細(xì)胞增殖有關(guān)的核抗原，也是目前較常用的核增殖標(biāo)記物。本實(shí)驗(yàn)選用該指標(biāo)與IGF-2在乳腺癌中聯(lián)合檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)IGF-2、Ki-67在原發(fā)灶≤2 cm的乳腺癌組中表達(dá)明顯低于原發(fā)灶>2 cm組 (P<0.05)，二者表達(dá)情況與原發(fā)灶的大小密切相關(guān)。二者在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。提示IGF-2不僅與乳腺癌的發(fā)展密切相關(guān)，而且參與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。IGF-2必需與其受體結(jié)合才能發(fā)揮生物學(xué)作用[5]，有研究顯示，IGF-2與IGF-1受體結(jié)合的多少與腫瘤在原發(fā)部位及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移部位的生長(zhǎng)能力有關(guān)[6]。很多因素可以影響這種結(jié)合能力。本研究中IGF-2和Ki-67分別在不同乳腺癌患者年齡組和雌孕激素受體情況組中的表達(dá)差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)，提示年齡和雌孕激素受體對(duì)這種結(jié)合能力的影響不大，即對(duì)腫瘤的原發(fā)生長(zhǎng)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的影響不大。

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