付曉芳 趙曉亞 李 晶 王 鵬 鄭加儉

1（湖北出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，武漢 430050）2（武漢生物工程學(xué)院，武漢 430415）

液相色譜法測(cè)定蜂蜜中氟胺氰菊酯的不確定度評(píng)定

付曉芳1*趙曉亞1李 晶1王 鵬1鄭加儉2

1（湖北出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，武漢 430050）2（武漢生物工程學(xué)院，武漢 430415）

通過對(duì)液相色譜儀測(cè)定蜂蜜中氟胺氰菊酯殘留量的檢驗(yàn)過程進(jìn)行分析，找出其影響不確定度的因素，對(duì)各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評(píng)估和計(jì)算合成，并最終給出測(cè)定樣品中氟胺氰菊酯含量的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度。

液相色譜儀；不確定度；氟胺氰菊酯

分析測(cè)量的目的是為了確定被測(cè)量對(duì)象的量值。測(cè)量結(jié)果的品質(zhì)是量度測(cè)量結(jié)果可信程度的最重要的依據(jù)。測(cè)量不確定度就是對(duì)測(cè)量結(jié)果質(zhì)量的定量表征，測(cè)量結(jié)果的可用性很大程度上取決于其不確定度的大小，所以測(cè)量結(jié)果表述必須同時(shí)包含賦予被測(cè)量的值與該值相關(guān)的測(cè)量不確定度，只有這樣才是完整并有意義的測(cè)量結(jié)果表述。

測(cè)量結(jié)果會(huì)受到諸多因素的影響和限制，如儀器精度、人員技術(shù)熟練水平、操作條件等，為了客觀評(píng)價(jià)測(cè)量結(jié)果的可靠性，引入了“測(cè)量不確定度”這一概念。1993年國際計(jì)量局（BIPM）、國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）、國際電工委員會(huì)（IEC）、國際法制計(jì)量組織（OIML）、國際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IUPAC）、國際理論與應(yīng)用物理聯(lián)合會(huì)（IUPAP）、國際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IFCC） 聯(lián)合制定了《測(cè)量不確定度表示指南》。我國于1999年正式采用不確定度對(duì)測(cè)量結(jié)果及其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)定，而ISO/IEC17025：1999《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》在內(nèi)容上強(qiáng)化了評(píng)定測(cè)量不確定度的要求；中國實(shí)驗(yàn)室國家認(rèn)可委員會(huì)（CANL） 于2003年頒布《CNAL/AR11:2002 測(cè)量不確定度政策》，對(duì)申請(qǐng)認(rèn)可、通過認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室在測(cè)量不確定度方面提出了明確的要求。

本文通過對(duì)SN/T 0213.5-2002出口蜂蜜中氟胺氰菊酯殘留量檢驗(yàn)方法——液相色譜法研究和測(cè)定結(jié)果不確定度的評(píng)定，系統(tǒng)分析了該法測(cè)定蜂蜜中氟胺氰菊酯殘留量不確定度的來源，并對(duì)各不確定度進(jìn)行量化，提出了方法的合成不確定度。

1 測(cè)量方法描述

1.1 方法原理

樣品堿化后用正己烷——丙酮混合溶液提取，提取液經(jīng)蒸干后用乙腈和正己烷液液分配凈化，使被測(cè)物進(jìn)入乙腈層。乙腈提取液再經(jīng)蒸干，用乙腈定量溶解殘?jiān)?，供液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。

1.2 試樣處理

稱取試樣約25.00 g于100 mL離心管中，加15 mL0.5 g/L氫氧化鈉溶液，渦旋混勻1 min，使試樣溶解。加入20 mL正己烷和10 mL丙酮，渦旋混勻3 min，2 000 r/min離心3 min，將正己烷層轉(zhuǎn)移到100 mL濃縮瓶中。于殘液中再加入20 mL正己烷和10 mL丙酮，重復(fù)上述操作兩次，合并正己烷層于同一濃縮瓶中，于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。

用10 mL正己烷飽和乙腈溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)入另一100 mL離心管中，加入乙腈飽和的正己烷10 mL，渦旋混勻2 min，2 000 r/min離心5 min后，將上層正己烷棄去。于殘液中再加入乙腈飽和的正己烷10 mL，重復(fù)上述操作兩次，將乙腈相轉(zhuǎn)入50 mL濃縮瓶中。乙腈相于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，殘?jiān)考尤?.00 mL乙腈溶解，過直徑0.45μm微孔濾膜，濾液供液相色譜測(cè)定。

1.3 測(cè)量結(jié)果計(jì)算公式

蜂蜜中氟胺氰菊酯殘留量計(jì)算公式為：

式中：

X——試樣中氟胺氰菊酯殘留量，mg/kg；

A——樣液中氟胺氰菊酯的峰面積；

As——標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氟胺氰菊酯的峰面積；

c——標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中氟胺氰菊酯的質(zhì)量濃度，μg/mL；

V——樣液最終定容體積，mL；

m——最終樣液所代表的試樣量，g。

2 各不確定度分量來源分析

在整個(gè)測(cè)量過程中，氟胺氰菊酯的標(biāo)準(zhǔn)不確定度主要來源于標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、樣品制備過程與液相色譜的定量精密度（即重復(fù)性條件下的標(biāo)準(zhǔn)偏差）。標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)溶液過程所引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)溶液過程中的不確定度由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度的不確定度、移液器和容量瓶體積的不確定度、校準(zhǔn)和使用溫度不同導(dǎo)致的不確定度組成；

樣品質(zhì)量引入的不確定度，由天平的最大允許誤差構(gòu)成；

體積引入的不確定度，由定容體積和進(jìn)樣體積的不確定度組成；

制樣過程中引入的不確定度。測(cè)試樣品需經(jīng)過混勻、凈化、過濾、濃縮等步驟，每一步操作都會(huì)引入不確定度，要確定每個(gè)步驟對(duì)測(cè)定結(jié)果不確定度的貢獻(xiàn)是相當(dāng)困難的，可采用檢測(cè)方法確認(rèn)其中的有關(guān)數(shù)據(jù)，如回收率等，對(duì)制樣過程引入的不確定度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

3 各標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量的評(píng)定

3.1 氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

3.1.1 配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液所帶來的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取0.0115 g氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品，純度為質(zhì)量分?jǐn)?shù)97%±0.06%，定容至10 mL容量瓶中，其濃度：

其中：d——質(zhì)量濃度；

m——氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量；

V——定容體積。

式中：

ur（m）——稱量樣品引起的不確定度；

ur（V）——容量瓶體積引起的不確定度；

ur（P）——氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品純度引起的不確定度。

3.1.1.1 稱量樣品的不確定度

稱量樣品的電子天平最大允許誤差±0.03 mg，四角誤差±0.04 mg，重復(fù)性誤差±0.02 mg，按正態(tài)分布考慮，k＝3，稱樣量約為0.01 g，則：

3.1.1.2 容量瓶體積引起的不確定度

10 mL容量瓶的標(biāo)準(zhǔn)不確定度來源為：①容量瓶內(nèi)部體積帶來的不確定度，經(jīng)檢定后給出的容量誤差為0.020 mL，按均勻分布考慮，則標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.020/=0.012 mL；②估讀誤差，估計(jì)為±0.005，按均勻分布考慮，則標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.005×10/=0.029 mL；③容量瓶和溶液的溫度與校正時(shí)的溫度不同引起的體積不確定度，假設(shè)差為2℃，對(duì)水體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃，則95%置信概率（k＝1.96） 時(shí)的體積變化區(qū)間為±10×2×2.1×10-4＝±0.0042mL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0042/1.96＝0.002 1 mL。

以上三項(xiàng)合成得出：

3.1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)品純度引起的不確定度

氟胺氰菊酯的純度為97%±0.06%，按均勻分布考慮，其相對(duì)不確定度為0.000 6/=0.000 35。

3.1.2 稀釋氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液帶來的不確定度

將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液按1∶100、1∶100、1∶10分步稀釋得到11.155μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液Cref。

式中：f1、f2、f3——稀釋因子，為稀釋后體積比稀釋前的體積，表1列出了稀釋過程的數(shù)據(jù)。

表1 稀釋過程數(shù)據(jù)表

3.2 稱量樣品的不確定度

稱量樣品的電子天平最大允許誤差±0.3 mg，四角誤差±0.4 mg，重復(fù)性誤差±0.2 mg，按正態(tài)分布考慮，k＝3，稱樣量約為25 g，則：

3.3 回收率的不確定度

在每25 g蜂蜜樣品中添加0.010 mg/kg氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定其回收率，表2為測(cè)定氟胺氰菊酯回收率的結(jié)果。

表2 氟胺氰菊酯添加回收測(cè)定結(jié)果（n＝10）

3.4 總重復(fù)性的不確定度

蜂蜜中氟胺氰菊酯殘留量測(cè)試結(jié)果見表3。

表3 蜂蜜氟胺氰菊酯殘留量測(cè)試結(jié)果

儀器誤差已貢獻(xiàn)于重復(fù)實(shí)驗(yàn)中，不再另行計(jì)算。

4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

假如實(shí)驗(yàn)中測(cè)定氟胺氰菊酯殘留量為0.010mg/kg，則：

5 擴(kuò)展不確定度

6 結(jié)論

不確定度的評(píng)定可以判斷出哪些分量對(duì)總不確定度的貢獻(xiàn)突出，故可以對(duì)該分量采取措施，降低總不確定度。結(jié)果表明，氟胺氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度引入的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過程中移液器引入的不確定度、總重復(fù)性引入的不確定度影響較大，試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注，減小其對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。根據(jù)文獻(xiàn)資料，標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過程中，用移液管操作比用移液器的不確定度小得多，建議在稀釋過程中采用移液管操作。

［1］倪曉麗.化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定指南［M］.北京：中國計(jì)量出版社，2008：80.

［2］李慎安，王玉蓮，范巧成，等.化學(xué)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量不確定度［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008：181.

［3］丁耀魁.氣相色譜法測(cè)定玉米中馬拉硫磷的不確定度評(píng)定［J］.糧食與食品工業(yè)，2008（2）：53-56.

Uncertainty evaluation of measuring fluvalinate residues in honey with high performance liquid chromatography

FU Xiao-fang1*ZHAO Xiao-ya1LI Jing1Wang Peng1ZHENG Jian-jian2
1（HubeiEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Wuhan430050，China）
2（WuhanBioengineeringInstitute，Wuhan430415，China)

The measuringprocess offluvalinate residues in honey with high performance liquid chromatography was analyzed.The influence factors on measing uncertainty were found,and all uncertainties were evaluated and calculated.The combined standard uncertainty and expanded uncertainty of fluvaluated residues in the sample were given.

High Performance Liquid Chromatography； uncertainty；fluvalinate

*付曉芳，女，1980年出生，2005年畢業(yè)于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)專業(yè)，工程師。

2009-11-20