何淑霞

【摘要】 目的 探討HCV核心抗原在丙肝檢測(cè)中的應(yīng)用。方法 收集2005年10月至2008年10月本院門(mén)診和住院HCV感染患者血清標(biāo)本98份。本組病例均經(jīng)HCVRNA檢測(cè)為陽(yáng)性，再進(jìn)行抗-HCV、HCV-cAg檢測(cè)了解檢測(cè)結(jié)果及符合率。結(jié)果 HCV核心抗原陽(yáng)性91例，符合率92.85%；抗-HCV陽(yáng)性79例，符合率80.61%；HCV核心抗原與抗-HCV的HCVRNA符合率比較P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 通過(guò)本組數(shù)據(jù)觀察分析HCV核心抗原檢測(cè)與HCVRNA符合率92.85%，說(shuō)明了HCV核心抗原檢測(cè)技術(shù)反映了HCV復(fù)制的間接指標(biāo),預(yù)防窗口期感染，本方法簡(jiǎn)便、快捷、價(jià)廉,所需設(shè)備簡(jiǎn)單,可進(jìn)行批量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】丙型肝炎;HCV;核心抗原;HCV RNA;抗-HCV;臨床應(yīng)用

丙型肝炎病毒(HCV)感染人體后,有將近一半的人會(huì)變?yōu)槁愿窝?sup>[1]，早期診斷仍是防止HCV 傳播的有效手段。2001 年Ortho 公司推出了檢測(cè)HCV 核心抗原(HCV-cAg)ELISA 試劑,通過(guò)大量臨床考核評(píng)價(jià),在抗-HCV陰性樣本中,仍檢出少量HCV-cAg 陽(yáng)性病例,證明HCV-cAg 檢出可比抗體早^[2]。為了進(jìn)一步對(duì)HCV 核心抗原檢測(cè)進(jìn)行探討，筆者對(duì)此進(jìn)行了綜合的檢測(cè)比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2005年10月至2008年10月本院門(mén)診和住院HCV 感染患者血清標(biāo)本98 份。本組患者均經(jīng)HCV RNA檢測(cè)為陽(yáng)性；98例患者男性50例，女性48例；急性丙型肝炎42例，慢性丙型肝炎56例。

1.2 試劑和儀器 抗-HCV試劑由廈門(mén)新創(chuàng)公司提供；HCV-cA g ELISA 試劑由湖南景達(dá)基因公司提供；HCV RT2PCR熒光定量試劑由上?？迫A公司提供。洗板機(jī)(ST236W)和酶標(biāo)儀(ST2360)為上?？迫A實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)PCR擴(kuò)增儀(L igh t Cycler)。

1.3 方法

1.3.1 檢測(cè)方法 HCV核心抗原測(cè)定：先加樣品處理液對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理30 min,將抗原抗體復(fù)合物中的結(jié)合抗原游離,采用ELISA技術(shù),利用包被在酶標(biāo)板固相載體上的單克隆抗體捕獲,待測(cè)樣本中的HCV抗原,然后加入與包被抗體識(shí)別不同抗原表位的酶標(biāo)記的不同株單克隆抗體檢測(cè)。利用Bio-TekELX800酶標(biāo)儀,在450 nm 波長(zhǎng)進(jìn)行比色,測(cè)定各孔的OD值。臨界值(CO)=陰性對(duì)照平均值+0.06,低于臨界值為陰性,高于臨界值為陽(yáng)性抗-HCV抗體檢測(cè):采用間接ELI SA方法檢測(cè)血清或血漿中丙型肝炎病毒的抗體。在微孔中預(yù)包被基因表達(dá)HCV抗原,與樣品中的抗-HCV抗體反應(yīng),再加入HRP標(biāo)記的羊抗人-IgG酶標(biāo)抗體與之結(jié)合,然后加入底物TMB作用顯色。利用Bio-Tek ELX800于450 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行比色,測(cè)各孔OD值,臨界值(CO)=陰性對(duì)照均值×2.8,樣品OD值/CO≥1為陽(yáng)性,樣品OD值/CO<1為陰性。

1.3.2 觀察內(nèi)容 本組病例均經(jīng)HCV RNA檢測(cè)為陽(yáng)性，再進(jìn)行抗-HCV、HCV-cA g檢測(cè)了解檢測(cè)結(jié)果及符合率:(指相同項(xiàng)目不同方法均為異常或均為正常的樣本比率之和。)

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ²檢驗(yàn)。組間采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

3 討論

丙肝可以通過(guò)輸血、靜脈吸毒、密切接觸等途徑傳播,而輸血和注射是我國(guó)丙型肝炎重要的傳播途徑，目前的常用的檢測(cè)方法，抗-HCV 抗體檢測(cè)進(jìn)行篩查和疾病的診斷,使輸血后丙型肝炎的發(fā)生率大大降低^[3]，應(yīng)用抗-HCV ELISA法還存在的一大缺陷是“窗口期”長(zhǎng),約為50 d左右,仍有漏檢現(xiàn)象,抗-HCV 檢測(cè)試劑盒無(wú)法檢出^[4]還不能完全預(yù)防輸血后HCV 感染的發(fā)生。

HCV RNA,被視為HCV 病毒復(fù)制的直接標(biāo)志,可以縮短感染后血清陽(yáng)轉(zhuǎn)前的檢測(cè)窗口期,以實(shí)現(xiàn)HCV 感染的早期診斷。PCR 法檢測(cè)的影響因素較多,在樣本收集、儲(chǔ)存和檢測(cè)方面都有嚴(yán)格的要求。而且要求昂貴精密的儀器、較高的實(shí)驗(yàn)技藝,試劑也比較昂貴,又容易出現(xiàn)交叉污染導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果,使得PCR 技術(shù)的推廣受到了極大的限制。

2001 年Ortho 公司推出了檢測(cè)HCV 核心抗原(HCV-cAg)ELISA試劑臨床考核證明HCV-cA g檢出可比抗-HCV平均約早23~46 d^[5],通過(guò)本組數(shù)據(jù)觀察分析HCV核心抗原檢測(cè)與HCV RNA符合率92.85%，說(shuō)明了HCV核心抗原檢測(cè)技術(shù)反映了HCV復(fù)制的間接指標(biāo),預(yù)防窗口期感染，本方法簡(jiǎn)便、快捷、價(jià)廉,所需設(shè)備簡(jiǎn)單,可進(jìn)行批量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 朱忠政,叢文銘.乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒在肝癌發(fā)生中的作用研究進(jìn)展.中華肝臟病雜志,2003,11(9):5741.

［2］ Widell A,Molnegren V,Pieksma F,et al.Detection of hepatitis C coreantigen in serumor plasma as a marker of hepatitis C viraemia in the sero-logical window2phase.Transfusion Med,2002,12(2)107.

［3］ 潘衛(wèi),方芳.抗-HCV陰性獻(xiàn)血員中丙型肝炎病毒RNA檢測(cè)及序列分析.中國(guó)病毒學(xué),1997,12(1):39-42.

［4］ 陳鋒,江訓(xùn)良,鄧蘭軍.1 203例泌尿生殖道衣原體和支原體感染檢測(cè)及藥敏分析.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,14(1):194-1961.

［5］ W idellA,Mo lnegren V,P iek sma F,et al.Detection of hepatitisC co re antigen in serum o r p lasma as a marker of hepatitis Cviraem ia in the sero logical w indow phase.T ransfusion M ed,2002,12(2):107-113.