王雅娟 張 敏

【摘要】 2008年5月筆者從患者分泌物膿汁中培養(yǎng)分離出1株觸酶試驗(yàn)陰性的金黃色葡萄球菌。通過(guò)細(xì)菌學(xué)鑒定,革蘭氏染色、顯微鏡下細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查和重要的觸酶試驗(yàn)及血漿凝固酶試驗(yàn),及若干生化試驗(yàn)及生化鑒定編碼對(duì)其確認(rèn),并對(duì)其做藥敏試驗(yàn),以指導(dǎo)臨床正確用藥,達(dá)到治愈的目的。同時(shí)進(jìn)一步認(rèn)識(shí)細(xì)菌本身某些因素的變異性。

【關(guān)鍵詞】 金黃色葡萄球菌;觸酶試驗(yàn);生化鑒定

1 病例資料

門(mén)診患者,女性,18歲,因嘴角裂口產(chǎn)生膿性分泌物并形成厚膜,而疼痛腫脹、功能受限1月余。在此期間,曾用頭孢曲松納、慶大霉素、青霉素等抗菌素抗炎,未見(jiàn)效果。檢查體溫正常;實(shí)驗(yàn)室檢查:白細(xì)胞 11.8×10.9/L , 中性分葉粒細(xì)胞69%,淋巴細(xì)胞26% ,單核細(xì)胞 3%; 嗜酸性粒細(xì)胞2%;紅細(xì)胞4.4×1012/L,血紅蛋白131 g/L,血小板192×109/L。后經(jīng)藥敏結(jié)果指導(dǎo),用紅霉素治療痊愈。

2 細(xì)菌學(xué)鑒定

2.1 取患者患處膿性分泌物,分別接種于肉浸湯液體培養(yǎng)基、含10%氯化鈉的高鹽培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基(普通培養(yǎng)基、含血液平板、), 5% 二氧化碳35°C 24 h后,生長(zhǎng)情況:固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出光滑、濕潤(rùn)、圓型、凸起、不透明、有光澤、直徑約1～2 cm的白色菌落;含血液培養(yǎng)基平板上所生長(zhǎng)的菌落周?chē)?有明顯透明溶血環(huán);肉浸湯液體培養(yǎng)基中迅速生長(zhǎng)、呈均勻混濁,管底有少量沉淀、搖動(dòng)時(shí)容易消散,不產(chǎn)生色素。培養(yǎng)出的細(xì)菌極易被鹼性染料著色,即革蘭染色呈陽(yáng)性。顯微鏡下菌體為圓形,并以單、雙、形似葡萄狀不規(guī)則排列;液體培養(yǎng)基中,因菌體有時(shí)可作平面分裂有部分呈短鏈存在。無(wú)動(dòng)力、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜。菌體較小、大小比較均勻一致。

2.2 與鏈球菌鑒別 鏈球菌經(jīng)相同條件下培養(yǎng),固體培養(yǎng)基上菌落形態(tài)為灰白色,半透明,直徑約0.5～0.75 cm,圓形凸起小菌落,溶血現(xiàn)象不定;在液體培養(yǎng)基中,呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)。在顯微境下革蘭氏染色陽(yáng)性,菌體為鏈狀排列,長(zhǎng)短不一,長(zhǎng)者可達(dá)20～30個(gè)菌細(xì)胞組成。菌體為圓形或卵圓形。

2.3 與微球菌鑒別 微球菌菌落在固體培養(yǎng)基上略小于葡萄菌菌落,為圓形突起、不透明、黃色或粉紅色,有粘性,并不易混懸于鹽水中,在液體培養(yǎng)基中均勻混濁生長(zhǎng)、表面有菌膜。鏡下革蘭氏染色陽(yáng)性,菌體較葡萄球菌稍大,四聯(lián)排列為主,或呈不規(guī)則的團(tuán)塊,膿汁中可產(chǎn)生莢膜。

3 觸酶試驗(yàn)

挑取菌落于潔凈載玻片上(避免混入培養(yǎng)基),滴加新鮮配制的3%過(guò)氧化氫試劑一滴于菌落上并仔細(xì)觀察結(jié)果,菌落上未出現(xiàn)氣泡。同時(shí)以金黃色葡萄球菌ATCC25923為陽(yáng)性對(duì)照,以糞腸球菌ATCC29212為陰性對(duì)照,判定此株金黃色葡萄球菌觸酶試驗(yàn)為陰性。

4 生化試驗(yàn)

4.1 此菌血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性;桿菌肽敏感試驗(yàn)陽(yáng)性;呋喃唑酮敏感試驗(yàn)陰性;發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸試驗(yàn)陽(yáng)性;能分解果糖、半乳糖、甘露醇、核糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、甘露糖、松二糖、藻糖產(chǎn)酸,不產(chǎn)生吲哚,甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性,VP試驗(yàn)陽(yáng)性;金黃色葡萄球菌抗體膠乳凝集試驗(yàn)陽(yáng)性;其代謝方式為呼吸兼發(fā)酵,對(duì)1.6 ul/ml新生霉素耐藥,可使美藍(lán)、石蕊等染料還原為無(wú)色,能分解尿素而產(chǎn)氨,磷酸酶試驗(yàn)陽(yáng)性。明膠液化試驗(yàn)陽(yáng)性,硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性,32STAPH 35°C孵育24 h,經(jīng)ATB儀器鑒定,生物編碼為267312610,其可信度為99.3%,鑒定結(jié)果為金黃色葡萄球菌。

4.2 與鏈球菌鑒別 鏈球菌血漿凝固酶試驗(yàn)為陰性。

4.3 與微球菌鑒別 發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸試驗(yàn)陰性;桿菌肽敏感試驗(yàn)陰性;呋喃唑酮敏感試驗(yàn)陽(yáng)性。

5 藥敏試驗(yàn):采用Kirby睟auer法

結(jié)果:此菌對(duì)青霉素耐藥、對(duì)克林霉素耐藥、對(duì)慶大霉素耐藥;對(duì)萬(wàn)古霉素敏感、對(duì)苯唑青霉素敏感、對(duì)紅霉素敏感、對(duì)氧氟沙星敏感、對(duì)復(fù)方新諾明敏感、對(duì)呋喃妥因敏感、對(duì)頭孢唑林敏感。

6 小結(jié)

金黃色葡萄球菌為傷口化膿感染常見(jiàn)菌群。典型的金黃色葡萄球菌為:革蘭氏染色陽(yáng)性,在革蘭陽(yáng)性球菌中菌體比較小,常單個(gè)或呈雙存在或成短鏈、不規(guī)則葡萄狀排列。最適pH為7.4,其菌落形態(tài)在普通平板上,經(jīng)35°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h為光滑、濕潤(rùn)、白色菌落,菌落周?chē)型该魅苎h(huán),產(chǎn)生胞外酶也就是血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性,其觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性。據(jù)上所述特征,即可鑒定金黃色葡萄球菌。而此次分離出的金黃色葡萄球菌其觸酶試驗(yàn)為陰性。在實(shí)際工作中較為少見(jiàn),報(bào)道也很少。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 陶月, 張之烽, 寧明哲,等. 觸酶陰性的金黃色葡萄球菌一例. 臨床檢驗(yàn)雜志,2008, 26(3) :172.

[2] 丁振若, 于文彬, 蘇明權(quán),等. 現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué).人民軍醫(yī)出版社, 2007: 11021110.