周錢(qián)宏　劉愛(ài)東

【摘要】 目的 檢測(cè)骨肉瘤中MMP-9的表達(dá)，探討其在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)46例骨肉瘤標(biāo)本中MMP-9的表達(dá)。結(jié)果 MMP-9在骨肉瘤組織中的表達(dá)量明顯高于良性骨腫瘤組織，在有無(wú)軟組織浸潤(rùn)及不同Ennecking分期的骨肉瘤之間比較，MMP-9表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 骨肉瘤組織中MMP-9高表達(dá)，MMP-9在骨肉瘤發(fā)展中起重要作用。

【關(guān)鍵詞】 腫瘤；骨肉瘤；MMP-9；免疫組織化學(xué)

基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase，MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要成員，是92kDa的明膠酶B，主要由巨噬細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞合成分泌。骨肉瘤是常見(jiàn)的腫瘤，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，本試驗(yàn)通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)MMP-9在骨肉瘤及良性骨腫瘤中的表達(dá)情況，探討MMP-9與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 材料 收集我院骨肉瘤手術(shù)治療后經(jīng)病理確診的病例46例，年齡為11-45歲，其中男25例，女21例，術(shù)前均未進(jìn)行任何治療，同時(shí)選取12例良性骨腫瘤作為對(duì)照(骨樣骨瘤6例，骨母細(xì)胞瘤6例)。

1.2 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)MMP-9的表達(dá) 采用S-P法，MMP-9單克隆抗體購(gòu)自北京中彬金橋生物技術(shù)有限公司，試驗(yàn)過(guò)程按照嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，并設(shè)用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 每張切片均由病理主治醫(yī)師確診，并分別觀察具有代表性的10個(gè)高倍視野。MMP-9陽(yáng)性染色者在細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿有棕黃色顆粒沉著，根據(jù)細(xì)胞膜或胞漿的染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行分析評(píng)分，基本不著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者2分，著色深者為3分。著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率≤5%為0分，6%-25%為1分，26%~50%為2分，≥51%為3分。將每張切片著色程度得分與著色細(xì)胞百分率得分各自相乘，為其最后得分。0-1分為陰性，2-3分為弱陽(yáng)性，≥4分為強(qiáng)陽(yáng)性。弱陽(yáng)性與強(qiáng)陽(yáng)性均計(jì)為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組間比較用χ²檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)均用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析完成。

2 結(jié)果

2.1 MMP-9在骨肉瘤、良性骨腫瘤中的表達(dá) 46例骨肉瘤標(biāo)本中37例MMP-9陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為80.4%，12例正常骨組織中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

2.2 MMP-9的表達(dá)與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系 骨肉瘤中，不同軟組織浸潤(rùn)、不同Ennecking分期的MMP-9表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。MMP-9在不同年齡、不同性別、不同腫瘤直徑的分組表達(dá)中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要一員，又名明膠酶B，因能降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的多種成分而倍愛(ài)關(guān)注。MMP-9位于染色體20q12-q13上，基因全長(zhǎng)4506 bp，含有13個(gè)外顯子。主要作用底物為構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)基底膜支架的IV型膠原酶，另外還能降解V、VII、X型膠原、明膠、纖維連接蛋白等，有研究認(rèn)為在組織發(fā)育、傷口愈合及腫瘤侵襲時(shí)被誘導(dǎo)表達(dá)^[1]。楊猛^[2]等用免疫組織化學(xué)二步法研究MMP-9在直腸癌中的表達(dá)，認(rèn)為其可作為直腸癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移重要的分子標(biāo)記物，對(duì)判斷直腸癌的預(yù)后具有重要意義。徐曉輝^[3]等用免疫組化SP法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌中MMP-9的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)其在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)增加，MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)率隨著腫瘤病理分級(jí)、臨床分期的增設(shè)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而表達(dá)增加，并認(rèn)為其是腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的促進(jìn)因子。

筆者的試驗(yàn)通過(guò)免疫組化檢測(cè)MMP-9在骨肉瘤中的表達(dá)，數(shù)據(jù)顯示在骨肉瘤中的表達(dá)明顯高于良性骨腫瘤，提示MMP-9在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。通過(guò)臨床病理特征的分析，觀察到與骨肉瘤的軟組織浸潤(rùn)密切相關(guān)，提示MMP-9可能是促進(jìn)骨肉瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的重要因素。由于Ennecking臨床分期與患者預(yù)后相關(guān)，本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)MMP-9與其相關(guān)，提示MMP-9是與骨肉瘤患都預(yù)后有關(guān)的重要因素。MMP-9的表達(dá)也可以作為判斷腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)。

骨肉瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素多階段的過(guò)程，筆者的研究是從MMP-9蛋白表達(dá)方面來(lái)反映骨肉瘤的生物學(xué)行為等因素。另有研究顯示其抑制因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，今后筆者可以繼續(xù)研究MMP-9與抑制因子的關(guān)系，以進(jìn)一步探討骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] Polette M，Nawrocki-Raby B，Gilles C，et al.Tumor invasion and matrix metallo- proteinases.Crit Rev Oncol Hemat 2004，49(3)：179-186.

[2] 楊猛，劉霞，趙恭華，等.N-cadherin、MMP-9在直腸癌中表達(dá)的臨床意義.腫瘤防治研究.2005，32(2)：105-107.

[3] 徐曉輝，王耿，崔艷紅.MMP-9，EGFR和E-cadherin在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義.腫瘤防治研究，2004，31(12)：745-747.