張鳳雪　許慶棟

摘要： 本文作者以高效液相色譜法測(cè)定甘露醇注射液藥液殘留，此法簡(jiǎn)便靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于甘露醇注射液藥液殘留的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜法 甘露醇注射液 藥液殘留

高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于20世紀(jì)60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜；又因分析速度快而被稱為高速液相色譜。高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法，與經(jīng)典液相色譜相比，具有速度快、分辨率高、靈敏度高、樣品量少、容易回收和色譜柱可反復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)［１］。它由流動(dòng)相儲(chǔ)液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。如HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)；進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利切換嚴(yán)密；由于液體流動(dòng)相粘度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體，為了減低柱壓，高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱［２］。

甘露醇為脫水藥，主要用20％的高滲溶液靜脈注射或靜脈點(diǎn)滴。靜脈注射后其脫水作用可迅速降低顱內(nèi)壓和眼內(nèi)壓，是治療腦水腫、降低顱內(nèi)壓安全而有效的首選藥物；也可用于急性腎衰早期，其可增加腎血流量，提高腎小球?yàn)V過(guò)率，增加尿量，從而防止腎小管萎縮、壞死，改善腎缺血［３］。甘露醇注射液為超飽和溶液，主藥成分為甘露醇。因其濃度高，為防止對(duì)其他藥品的生產(chǎn)造成影響［４］，所以必須對(duì)其進(jìn)行藥液殘留檢測(cè)。根據(jù)相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則［５］，生產(chǎn)用配液罐、管道等部位清洗液的藥液殘留限度為1.0mg·mL^-1。在藥液殘留檢測(cè)的研究過(guò)程中，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法，以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體陽(yáng)離子交換樹(shù)脂H型為填充劑（8μm，300mm×7.80mm），0.04mol/L磷酸溶液為流動(dòng)相，以紫外檢測(cè)儀為檢測(cè)器，建立其檢測(cè)方法［６］，［７］。經(jīng)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證，本方法簡(jiǎn)便靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于甘露醇注射液藥液殘留的檢測(cè)。

1.儀器與試藥

1.1儀器

梅特勒AE－240電子天平（上海）；島津高效液相色譜儀：LC-10ATvp型液相泵，SPD-10Avp型紫外檢測(cè)器。

1.2試藥

甘露醇對(duì)照品（由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；磷酸為色譜純；水為二次蒸餾去離子水；甘露醇注射液250ml；甘露醇50g。

2.色譜條件與色譜圖

2.1色譜條件

色譜柱：以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體陽(yáng)離子交換樹(shù)脂H型為填充劑（8μm，300mm×7.80mm）；

流動(dòng)相：0.04mol/L磷酸溶液為流動(dòng)相；

檢測(cè)波長(zhǎng)：200nm；

流速：1.0ml·min^-1；

柱溫：50℃；

進(jìn)樣量：20μL。

2.2對(duì)照品溶液制備

精密稱取甘露醇對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含甘露醇 1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液制備

取生產(chǎn)用配液罐、管道等部位清洗液。

在上述條件下，分別取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，甘露醇出峰時(shí)間為6.80min，理論板數(shù)按甘露醇峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000，對(duì)照品色譜圖見(jiàn)下圖。

3.方法學(xué)驗(yàn)證［８］

3.1線性范圍

精密量取甘露醇對(duì)照品適量，分別用水溶解并稀釋成每1ml含甘露醇10mg的溶液，作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液0.1，0.3，0.5，1.0，1.5，2.0mL分別置10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。以樣品濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程如下：

A_甘露醇=1.0642×10⁶C＋324，r=0.9995

試驗(yàn)結(jié)果表明，甘露醇在0.1～2.0mg·mL^-1范圍內(nèi)，其濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

3.2精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算，RSD為0.5%。

3.3最低檢測(cè)限的測(cè)定

用3.2中的對(duì)照品溶液，采用逐步稀釋法，按上述色譜條件進(jìn)樣，稀釋至1500倍時(shí)，測(cè)得甘露醇的檢測(cè)限（S/N=3）為2.0μg·mL^-1。

3.4回收率試驗(yàn)

精密稱取甘露醇對(duì)照品8mg，10mg，12mg，分別置10ml容量瓶中。每個(gè)濃度各3份，共9份，分別加水溶解并稀釋制成溶液，搖勻，作為供試品溶液；

另精密稱取甘露醇對(duì)照品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含甘露醇 1mg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。分別取對(duì)照品溶液及9份供試品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)下表。試驗(yàn)表明，本法回收率良好。

3.5樣品測(cè)定

取配液罐、管道等部位清洗液，按上述色譜條件分別取對(duì)供試品溶液20μl注入液相色譜儀，以外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果各取樣點(diǎn)藥液殘留未檢出，由此證明配液罐、管道清洗符合規(guī)定。

4.討論

從譜圖和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，本文提出的測(cè)定方法得到了很好的結(jié)果。目前，應(yīng)用HPLC測(cè)定糖的文獻(xiàn)報(bào)道中，大部分使用氨基鍵合柱、氨基-氨基鍵合柱等，流動(dòng)相通常是不同比例的乙腈-水體系，檢測(cè)器為示差檢測(cè)器。本法提出使用以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體陽(yáng)離子交換樹(shù)脂H型為填充劑（8μm，300mm×7.80mm），0.04mol/L磷酸溶液為流動(dòng)相，用紫外檢測(cè)器代替了示差檢測(cè)器，這樣一方面降低了分析費(fèi)用，提高了工作效率，另一方面提高了實(shí)驗(yàn)的安全性。試驗(yàn)證明該法測(cè)定甘露醇注射液藥液殘留，方法簡(jiǎn)單易行，簡(jiǎn)便靈敏，色譜條件容易掌握，測(cè)試數(shù)據(jù)重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，精密度和準(zhǔn)確度都能滿足分析要求，適用于甘露醇注射液藥液殘留的檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

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