康紹建　陳陽友　杜利云　楊文芬

摘要：目的：建立氣血康口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：定性鑒別采用薄層色譜法；含量測(cè)定采用高效液相色譜法。結(jié)果：薄層色譜鑒別(1)：原標(biāo)準(zhǔn)為人參皂苷Rg₁的鑒別，新標(biāo)準(zhǔn)增加人參皂苷Rb₁、三七皂苷R₁及黃芪甲苷的鑒別，經(jīng)驗(yàn)證未見干擾；薄層色譜鑒別(2)為新增項(xiàng)目，粉葛薄層色譜鑒別以葛根素為對(duì)照，經(jīng)驗(yàn)證未見干擾；含量測(cè)定色譜條件：采用漢邦(4.6×250mm，5μm)G8色譜柱，流動(dòng)相：乙腈—水(19:81)；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；柱溫30℃流速1mL／min。人參皂苷Rg₁進(jìn)樣量在0.678μg～10.17μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；回歸方程y＝279.47x—27.716(r=1.000)，人參皂苷Rg₁的平均回收率為97.54％，RSD=2.37％。結(jié)論：薄層色譜鑒別和含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于控制氣血康口服液質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：氣血康口服液；薄層色譜鑒別；HPLC，

中圖分類號(hào)：R286.0文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007—2349(2009)09—0061—03

氣血康口服液(原名為復(fù)方三七口服液)具有抗衰老，扶正培本，益氣強(qiáng)心，健脾固本，滋陰潤(rùn)燥，生津止咳；并有提高機(jī)體免疫力，升高白細(xì)胞和血色素的作用。原為提高國家藥品標(biāo)準(zhǔn)行動(dòng)計(jì)劃品種，后確認(rèn)為2010年版《中國藥典》收載品種。根據(jù)國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高行動(dòng)計(jì)劃任務(wù)表要求：鑒別：增加葛根、黃芪、人參、三七的TLC鑒別；含量測(cè)定：增加三七的含量測(cè)定；本次標(biāo)準(zhǔn)修訂的薄層色譜鑒別、新增薄層色譜鑒別項(xiàng)及新增含量測(cè)定均符合要求，可作為質(zhì)量控制指標(biāo)。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀：島津2010A，色譜柱：漢邦(4.6×250mm，5μm)C₁₈色譜柱；液相溶劑用水為純凈水經(jīng)0.45／μm微孔濾膜濾過，乙腈為色譜純，其他均為分析純；人參皂苷Rg₁對(duì)照品(110703—200726)含量測(cè)定用，按97.7％計(jì)、人參皂苷Rb₁對(duì)照品(110704—200420)、三七皂苷R₁對(duì)照品(110745—200415))、黃芪甲苷對(duì)照品(0781—200109)、葛根素對(duì)照品(752—200108)均購于中國藥品生物制品檢定所；氣血康口服液：由云南白藥集團(tuán)文山七花有限責(zé)任公司提供(批號(hào)：20080701、20080702、20080703)；氣血康口服液薄層色譜鑒別空白陰性試樣(缺三七、人參；缺黃芪；缺葛根)和含量測(cè)定空白陰性試樣(缺三七、人參)：均由云南白藥集團(tuán)文山七花有限責(zé)任公司提供。

2實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

2，1薄層色譜鑒別取本品20mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸至近干，加乙醇25mL溫浸，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5mL使溶解，移入分液漏斗中，用正丁醇提取3次，每次10mL(勿劇烈振搖以免乳化)，合并正丁醇液，用水洗2次，每次10mL，棄去水液，加氨試液25mL振搖提取，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。同法制得缺三七、人參和缺黃芪的陰性對(duì)照樣品；另取人參皂苷Rg₁、人參皂苷Rb₁、三七皂苷R₁及黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～3μL，分別點(diǎn)于同一高效硅膠H薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13:7:2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。色譜圖見圖1～圖2。

2，2薄層色譜鑒別取本品20mL，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯提取液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。同法制得缺葛根的陰性對(duì)照樣品；另取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成1mL含1，5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各1μL～3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(7:2.5:0.25)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。色譜圖見圖3。

2，2氣血康口服液的含量測(cè)定2，2，1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：乙腈—水(19:81)；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg₁峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000。2，2，2對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備對(duì)照品溶液制備取人參皂苷Rg₁對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含人參皂苷Rg₁對(duì)照品0.7mg溶液，搖勻，即得。

供試品溶液制備取本品約30mL，混勻，濾過，精密量取10mL于分液漏斗中，用水飽和正丁醇10mL、10mL、10mL提取3次，合并正丁醇液，用氨試液5mL、5mL洗滌2次，收集正丁醇液水浴蒸干，殘?jiān)眠m量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。2，2，3測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。色譜圖見圖4和圖5。2，2，3陰性對(duì)照試驗(yàn)陰性對(duì)照樣品溶液的制備取處方中除三七、人參外的其他藥味，按處方劑量及制法和工藝要求制備缺三七、人參陰性對(duì)照樣品溶液。照試驗(yàn)所得方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，在與人參皂苷Rg₁對(duì)照品相同的保留時(shí)間位置，未見干擾峰出現(xiàn)，表明處方中其他藥材和輔料對(duì)人參皂苷Rg₁的測(cè)定無干擾。與供試品溶液對(duì)照，未見明顯峰缺失。見液相色譜圖6。2，2，4線性關(guān)系考察

精密稱取人參皂苷Ra對(duì)照品6，78mg，置10mL量瓶中，加流動(dòng)相溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取對(duì)照品溶液1、2、5、10、15μl進(jìn)樣按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積積分值(mAuXs)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：y＝279.47x一27.716，r＝1。結(jié)果表明人參皂苷Rg₁進(jìn)樣量在0.678μg～10.17μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。符合要求。2，2，5精密度試驗(yàn)精密吸取人參皂苷Rg₁對(duì)照品溶液(0.6829mg／mL)各10μL，按試驗(yàn)所得方法重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)

定峰面積值。各次測(cè)得的峰面積值分別是2683159、2682968、2686880、2641316、2639333，平均值為2666731，RSD為0.91％，符合要求。2，2，6重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為20080701的氣血康口服液6份，按試驗(yàn)所得方法試驗(yàn)，測(cè)得樣品峰面積并計(jì)算含量，試驗(yàn)結(jié)果表明：RSD為0.72％，符合要求。2，2，7穩(wěn)定性試驗(yàn)取對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8h測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算RSD值，對(duì)照品溶液峰面積RSD為1.81％，供試品溶液峰面積RSD為1.82％；結(jié)果表明對(duì)照品及供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2，2，8加樣回收率試驗(yàn)采取全程加樣法。取已知含量的供試品(批號(hào)：20080701，人參皂苷Ra含量0.6267mg／mL)6份，每份5mL,精密加入人參皂苷Rg₁對(duì)照品溶液(0.5082mg／mL)各5mL，按試驗(yàn)所得方法試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法回收率在95％～105％之間，平均回收率為97.54％，RSD為2.37％，符合要求。2，2，9樣品含量測(cè)定取氣血康口服液3批樣品，按試驗(yàn)所得方法試驗(yàn)，測(cè)定人參皂苷Rg₁含量，每批3次。結(jié)果見表1。

3討論

原部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)WS3--B--2573--97中無[含量測(cè)定]項(xiàng)，根據(jù)氣血康口服液的處方，選擇方中的三七、人參中的有效成分人參皂苷Rg₁為含量測(cè)定指標(biāo)。最初擬選擇三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、Re、Rb₁作為含量測(cè)定指標(biāo)成分，通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在15cm C₁₈柱上，用乙腈一水的不同梯度洗脫均難以使這幾種成分完全分離；在25cm C₁₈柱上，用乙腈—水(0--35min，19：81；35—55min，29:71；55--70min，29:71；70—100min，40:60)梯度洗脫可以將幾種成分分開，但人參皂Rb₁：出峰時(shí)間在80min右左，這樣不適用大生產(chǎn)中--產(chǎn)品質(zhì)量控制，且處方中三七、人參、黃芪均含類似物質(zhì)，測(cè)定時(shí)相互干擾大，供試品溶液中三七皂苷R₁、人參皂苷Re含量低，若作控制產(chǎn)品質(zhì)量的指標(biāo)也起不了太大的現(xiàn)實(shí)意義。因此結(jié)合以上這些實(shí)際情況，最終放棄進(jìn)行多組分測(cè)定，選擇耗時(shí)短、分離較好的人參皂苷Rg,為氣血康口服液含量測(cè)定指標(biāo)性成分。對(duì)氣血康口服液中人參皂苷Rg₁含量測(cè)定的分析方法驗(yàn)證結(jié)果表明，該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可行。