羅宇鵬

(四川省成都市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 611130)

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·論 著·

改良TT增菌液在分離腸道致病菌沙門菌和志賀菌的應(yīng)用評(píng)價(jià)

羅宇鵬

(四川省成都市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 611130)

目的 分析改良TT增菌液在分離腸道致病中沙門菌和志賀菌的效果評(píng)價(jià)。方法 采用常規(guī)接種麥康凱平板及SS平板，同時(shí)另外加種改良TT增菌液(硫代硫酸鈉碳酸鈣增菌液)兩種不同方法篩查沙門志賀菌，并參考該院歷年菌株分離情況進(jìn)行血清凝聚。采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)，比較兩種不同糞便培養(yǎng)方法對(duì)沙門菌和志賀菌的分離率之間差異。結(jié)果 2013～2015年納入統(tǒng)計(jì)分析糞便培養(yǎng)標(biāo)本790例，采用常規(guī)方法分離出沙門菌屬30例，陽(yáng)性率3.80%；志賀菌屬5例，陽(yáng)性率0.63%；而采用改良TT增菌培養(yǎng)方法分離出沙門菌屬77例，陽(yáng)性率9.75%，志賀菌屬7例，陽(yáng)性率0.89%；采用改良TT增菌液培養(yǎng)方法沙門菌檢出率是常規(guī)培養(yǎng)方法2.57倍，志賀菌屬是1.41倍，兩種方法對(duì)沙門志賀菌屬的分離差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 改良TT增菌液能夠顯著地提高糞便培養(yǎng)沙門菌和志賀菌的陽(yáng)性分離率，為臨床醫(yī)生正確診治患者提供較大幫助。

改良TT增菌液； 大便培養(yǎng)； 沙門菌； 志賀菌； 分離率

沙門菌和志賀菌是引起腸道致病菌的主要病原菌。其中沙門菌主要通過(guò)污染的食品或水源經(jīng)口傳染引起急性胃腸炎或食物中毒、菌血癥或敗血癥、傷寒與副傷寒等。而志賀菌主要引起人類細(xì)菌性痢疾，引起發(fā)熱、腹痛、腹瀉、黏液膿血便等癥狀，小兒感染常可以發(fā)生中毒性菌痢引起全身中毒癥狀，搶救不及時(shí)往往可導(dǎo)致死亡。而沙門菌和志賀菌常規(guī)分離主要依靠采取糞便標(biāo)本接種麥康凱、SS平板或XLD平板(木糖賴氨酸去氧膽酸鈉瓊脂平板)隔夜培養(yǎng)后，挑取可疑菌落進(jìn)行生化反應(yīng)和血清凝集，但由于腸道中正常菌群將較多及臨床抗菌藥物使用后采集標(biāo)本送檢，使得沙門菌和志賀菌的檢出率偏低，為臨床醫(yī)生正確診治患者帶來(lái)很大困擾。筆者對(duì)本院2013～2015年所送檢的糞便標(biāo)本采用加種改良TT增菌液與常規(guī)接種麥康凱和SS平板篩查沙門志賀菌兩種不同方法進(jìn)行對(duì)比分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 材料來(lái)源 選擇2013～2015年本院門診及住院患者所送檢的糞便培養(yǎng)標(biāo)本7 743例，納入統(tǒng)計(jì)標(biāo)本790例。標(biāo)本納入標(biāo)準(zhǔn)[1]：糞便性狀異常如稀便、水樣便、黏液便、膿血便及血便；糞便涂片鏡檢白細(xì)胞≥5/HP。

1.2 儀器、試劑與方法

1.2.1 儀器與試劑 珠海迪爾鑒定及藥敏系統(tǒng)；營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱平板、SS平板、改良TT增菌液及其配套碘液均購(gòu)自成都瑞琦實(shí)業(yè)有限公司；沙門志賀菌診斷血清均由寧波天潤(rùn)；珠海迪爾鑒定及藥敏系統(tǒng)、普通培養(yǎng)箱及二氧化碳培養(yǎng)箱等。

1.2.2 改良TT增菌液及其配套碘液配方及制作流程[1]蛋白胨5 g、酵母粉5 g、膽鹽1 g、碳酸鈣10 g、硫代硫酸鈉30 g、蒸餾水1 000 mL，將所有成分煮沸溶解，分裝大試管，每支10 mL，121 ℃高壓蒸汽滅菌后置2～8 ℃保存?zhèn)溆茫慌涮椎庖海旱饣?.0 g，碘2.0 g,蒸餾水300 mL，碾磨溶解避光備用；上述兩個(gè)產(chǎn)品均有成都瑞琦實(shí)業(yè)有限公司代配制。

1.2.3 質(zhì)控菌株 大腸埃希菌 ATCC 25922、鼠傷寒沙門菌ATCC14028、福氏志賀菌ATCC12022、糞腸球菌ATCC29212、奇異變形桿菌ATCC12453等購(gòu)自國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心。

1.2.4 標(biāo)本接種及培養(yǎng)方法 (1)常規(guī)方法：挑取理想部位糞便標(biāo)本接種麥康凱及SS平板，隔夜培養(yǎng)；(2)改良方法：取200 μL配套碘液至改良TT增菌液管中搖勻后，在挑取理想部位糞便標(biāo)本接種改良TT增菌液中隔夜培養(yǎng)后，再將增菌液轉(zhuǎn)種在麥康凱及SS平板。

1.2.5 病原菌的鑒定及血清學(xué)分型[1-3](1)沙門菌：挑取麥康凱平板無(wú)色透明菌落而SS平板產(chǎn)黑色色素中心透明可疑菌落進(jìn)行分純于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板35 ℃隔夜培養(yǎng)后上迪爾鑒定藥敏板，若初步生化反應(yīng)提示為沙門菌后，用沙門菌診斷血清進(jìn)行分型，分型標(biāo)準(zhǔn)參照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第4版)相關(guān)章節(jié)執(zhí)行；(2)志賀菌：挑取麥康凱平板、SS平板上均為無(wú)色透明可疑菌落分純于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板35 ℃隔夜培養(yǎng)后上迪爾鑒定藥敏板，若初步生化反應(yīng)提示為志賀菌后，用志賀菌診斷血清進(jìn)行分型，分型標(biāo)準(zhǔn)參照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第四版)相關(guān)章節(jié)執(zhí)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

采用常規(guī)方法分離出沙門菌30株，志賀菌5株；采用改良TT增菌液方法分離出沙門菌77株，志賀菌7株；采用χ2檢驗(yàn)，兩種不同糞便培養(yǎng)方法學(xué)分離的沙門菌屬和志賀菌屬陽(yáng)性率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 糞便培養(yǎng)常規(guī)方法與改良TT增菌液培養(yǎng)沙門菌與志賀菌分離率情況

注：-表示無(wú)數(shù)據(jù)。

3 討 論

引起腸道腹瀉的原因可以分為細(xì)菌性、真菌性及病毒性三大類，而細(xì)菌性腹瀉又可分為侵襲性腹瀉和毒素性腹瀉兩大類，在侵襲性腹瀉中有沙門菌、志賀菌、致泄性大腸埃希菌中的腸致病性大腸桿菌(EPEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(ETEC)、小腸耶爾森菌等[4-6]。細(xì)菌性腹瀉尤以沙門菌和志賀菌屬最為多見(jiàn)。沙門菌屬主要通過(guò)污染食品或水源經(jīng)口傳染，引起急性胃腸炎或食物中毒、菌血癥或敗血癥、傷寒與副傷寒或病原菌攜帶者等。志賀菌屬主要引起人類細(xì)菌性痢疾，表現(xiàn)為急性菌痢、慢性菌痢、隱匿性菌痢和攜帶者；典型的急性菌痢表現(xiàn)為發(fā)熱、腹痛、腹瀉、黏液膿血便等癥狀。在小兒?？砂l(fā)生中毒性菌痢，患兒常無(wú)明顯的消化道癥狀而表現(xiàn)為中毒癥狀，若搶救不及時(shí)，往往可導(dǎo)致死亡。因此，在臨床糞便培養(yǎng)標(biāo)本中對(duì)沙門志賀菌屬的分離顯得尤為重要。

改良TT增菌液(硫代硫酸鈉碳酸鈣增菌液)由四硫黃酸鹽(TT)增菌液衍生而來(lái)，用于對(duì)沙門菌和志賀菌等腸道致病菌進(jìn)行增菌。增菌液中的硫代硫酸鈉、碳酸鈣能夠很好起到拮抗抗菌藥物的作用，碳酸鈣更能使整個(gè)培養(yǎng)基在增菌培養(yǎng)過(guò)程中pH值始終維持在一個(gè)弱堿的狀態(tài)，因此特別適用于從經(jīng)過(guò)經(jīng)驗(yàn)性治療后的糞便中分離沙門菌或志賀菌。通過(guò)表1的數(shù)據(jù)可以看出，通過(guò)改良TT增菌培養(yǎng)對(duì)沙門菌、志賀菌的分離率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于常規(guī)培養(yǎng)的分離率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；尤其對(duì)沙門菌屬的檢出率明顯高于我國(guó)監(jiān)測(cè)報(bào)道結(jié)果[7-9]；常規(guī)培養(yǎng)的方法對(duì)沙門志賀菌的檢出率存在著較高的假陰性率，對(duì)沙門菌屬表現(xiàn)尤為明顯，假陰性率達(dá)61.04%，對(duì)志賀菌也存在著較高的假陰性率(28.57%)。

另外值得注意的是，3年志賀菌屬總共才分離到7例標(biāo)本，檢出率較低(0.89%)，即使使用改良TT增菌液也是如此，這與相關(guān)研究報(bào)道的18.78%、16.70%明顯偏低很多[8-9]。究其原因，志賀菌屬的抵抗力弱于其他腸道桿菌，加熱至60 ℃、10 min就可殺死，對(duì)酸和一般消毒劑敏感。在糞便中，由于其他腸道菌產(chǎn)酸或噬菌體的作用常使志賀菌屬在數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡，因此要求糞便標(biāo)本培養(yǎng)應(yīng)迅速送檢。本次分析中如此低的志賀菌屬檢出率或許與志賀菌屬細(xì)菌自身對(duì)環(huán)境及化學(xué)消毒劑抵抗力較差、標(biāo)本延遲送檢延遲處理以及患者經(jīng)驗(yàn)性使用抗菌藥物等因素有關(guān)。

總之，改良TT增菌液在腸道腹瀉患者的糞便培養(yǎng)中對(duì)沙門志賀菌屬尤其是沙門菌屬的分離率有著顯著提高，從而有助于臨床醫(yī)生對(duì)腸道腹瀉患者的正確診治，值得推廣使用。

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Application evaluation of modified TT enrichment broth in separation of intestinal pathogenic Salmonella and Shigella bacteria

LUOYupeng

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChengduMunicipalFifthPeople′sHospital,Chengdu,Sichuan611130,China)

Objective To analyze the effect evaluation of modified TT enrichment broth in the separation of intestinal pathogenic Salmonella and Shigella bacteria .Methods The routine inoculation of Macconkey agar and SS agar were adopted,meanwhile two different methods for adding the modified TT enrichment broth(sodium thiosulfate and calcium carbonate) were used to screen Salmonella and Shigella bacteria.Serum coagulation was performed by referring to the bacterial isolation situation over the years.The SPSS 18.0 software was adopted to process the data.Then the difference in the separation rate of Salmonella and Shigella bacteria between the two different stool culture methods was compared.Results Totally 790 stool culture samples during 2013-2015 were included into the statistical analysis,30 cases of Salmonella bacteria were isolated by adopting the routine method,the positive rate was 3.80%;5 cases were Shigella bacteria,the positive rate was 0.63%;but 77 cases of Salmonella bacteria were isolated by adopting the modified TT enrichment broth method,the positive rate was 9.75%,7 cases were Shigella bacteria,the positive rate was 0.89%;the detection rate of Salmonella bacteria by adopting the modified TT enrichment broth method was 2.57 times of the conventional culture method,which of Shigella bacteria was 1.41 times,showing that the difference of Salmonella and Shigella bacteria isolation between the two different methods had statistical significance(P<0.05).Conclusion The modified TT enrichment broth can significantly improve the positive isolation rate of Salmonella and Shigella stool culture,which provides larger help for clinical doctor′ s correct diagnosis and treatment of patients.

modified TT enrichment broth; stool cultivation; Salmonella; Shigella; isolation rate

羅宇鵬,男,主管技師,主要從事臨床微生物檢驗(yàn)研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.028

A

1673-4130(2016)23-3313-02

2016-06-08

2016-07-28)