關(guān)鍵詞：中藥；肺癌；細胞增殖；凋亡；綜述

中圖分類號：R734.2

文獻標識碼：A

文章編號：1007—2349(2007)05—0042—03

從腫瘤細胞學來看，肺癌發(fā)生的本質(zhì)在于細胞增殖與凋亡的調(diào)節(jié)失控。它使本應脫離細胞周期而停止增殖或應自行凋亡的細胞不斷進入細胞周期，從而出現(xiàn)無限制、自主的細胞增生和分裂，表現(xiàn)為癌細胞在數(shù)量上無限制的膨脹。近年來中藥的抗癌機理研究取得了很大進展。現(xiàn)就其對肺癌細胞增殖周期的調(diào)控與誘導細胞凋亡兩方面內(nèi)容，綜述如下。

1、中藥對肺癌細胞增殖周期的調(diào)控

細胞增殖周期是指細胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂完成所經(jīng)歷的整個連續(xù)過程，按順序分為G—S—G2—M四個階段。細胞增殖周期調(diào)控與細胞周期不同時相間存在的關(guān)鍵調(diào)控點密切相關(guān)，其中兩個最基本的調(diào)控點是G₁／S調(diào)控點(位于G₁與S期的過渡時期，決定是否進入細胞周期)和G₂／M過渡點(位于G與M期之間，決定細胞是否進入M期完成有絲分裂)。其中最重要的調(diào)控點是G₁／S調(diào)控點，細胞在該點分析細胞內(nèi)、外的各種復雜信號以及DNA損傷情況，以決定細胞是進入分裂程序S期、或處于靜止的G0期。

譚永忠應用流式細胞術(shù)分析茵陳蒿提取物茵陳素對肺癌細胞周期的影響。結(jié)果：茵陳素能抑制肺癌細胞的增殖，呈劑量依賴性，以160ug／ml抑制作用最明顯，抑制率達52.4％。80ug／ml時，S期和G₂／M期細胞比例開始下降，細胞被阻滯于G₀／G₁期，不能進入 S期及G₂／M期，增殖指數(shù)明顯下降，與對照組比較有顯著性差異(P<0.01)。張維彬等根據(jù)中醫(yī)扶正培本，祛邪解毒等理論，以黃芪、補骨脂、靈芝、白花蛇舌草、大黃、莪術(shù)、全蝎和蜈蚣等為主，組成中藥扶正祛邪方。運用流式細胞儀及免疫組織化學等方法分析該方對小鼠Lewis肺癌細胞周期的影響及其與細胞周期調(diào)控基因蛋白(eyelinD₁)間的相關(guān)性。結(jié)果：該中藥組方能有效降低小鼠Lewis肺癌eyelinDl的表達，影響細胞周期G₁／s調(diào)控點，有效地將細胞周期阻滯于G₀／G₁期。劉寶瑞研究人肺癌A549細胞對市售4種中藥制劑(斑蟊酸鈉、苦參素、華蟾素和川芎索)的敏感性，以及川芎素影響肺癌A549細胞增殖的可能機制。采用MTY法測定藥物對細胞增殖的抑制率，流式細胞法測定細胞周期。結(jié)果：4種中藥只有川芎素可明顯抑制肺癌A549細胞的增殖(P<0.01)。劉宇龍等觀察消積飲對Lewis肺癌的生長及對肺癌細胞周期的影響。結(jié)果：根據(jù)扶正培本、化瘀解毒法組方的消積飲，可有效抑制Lewis肺癌的生長(抑瘤率為43％)，降低小鼠Lewis肺癌cyelinD₁的表達，影響其細胞周期G₁／S調(diào)控點，有效阻止腫瘤細胞周期于G₀／G₁期，使其不能進入S期進行DNA復制，從而抑制細胞分裂增殖，對腫瘤細胞起到了抑制作用。韓明權(quán)等探討臨床驗方益肺抗瘤飲對小鼠Lewis肺癌和人肺腺癌SPCAl細胞增殖和細胞周期及核酸、蛋白質(zhì)合成的影響。其采用體內(nèi)接種瘤體稱重和體外培養(yǎng)細胞計數(shù)相結(jié)合計算腫瘤抑制率，并以流式細胞儀測定腫瘤細胞周期的比例和DNA、RNA及蛋白質(zhì)指數(shù)。結(jié)果：實驗組腫瘤生長抑制率在30.4％(P＜0.05)，益肺抗瘤飲各組S期細胞比例明顯小于對照組，最顯著的一組有72.6％的細胞滯留于G₀／G₁期。婁金麗等式細胞術(shù)和免疫組化法檢測威麥寧對模型鼠腫瘤細胞周期及對CyclinD₁表達的影響。結(jié)果：威麥寧濃度在100、150、200、250mg(kg.d)時，對小鼠Lewis肺癌的抑制率分別為19.1％、33.5％、40.6％、51.5％；威麥寧可將腫瘤細胞阻滯在G₀／G₁期，并降低腫瘤細胞CyelinD₁的表達(P＜0.01)。金念祖研究槐米提取物對小鼠Lewis肺癌移植瘤細胞周期和增殖細胞核抗原(PCNA)表達的影響，探討槐米提取物對肺癌細胞增殖的抑制作用及其機制。用流式細胞儀分析細胞周期分布，用免疫組化方法測定PCNA表達水平。結(jié)果與模型對照組比較，槐米提取物高劑量組、中劑量組能顯著性抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生長。小鼠Lewis肺癌移植瘤的G₀／G₁期細胞比例明顯增加，S期細胞比例明顯減少；PCNA指數(shù)明顯降低。肖寶紅選擇Lewis肺癌小鼠為實驗模型進行試驗，觀察貓眼草對肺癌的抑制，用流式細胞儀檢測瘤組織的細胞周期。結(jié)果：①貓眼草7.5、15、30、60g／kg組抑瘤率分別為6.1％、16.93％、32.81％和58.26％，與模型組相比30、60g／kg組有顯著性差異(P＜0.05)。②流式細胞儀檢測貓眼草30、60g／kg組可使Lewis肺癌細胞S期細胞比例增高，與模型組相比有顯著性差異(P<0.05)。

2、誘導肺癌細胞凋亡

細胞凋亡(Apoptosis)又稱程序性細胞死亡(ProgrammedCellDeath，PCD)，是由于機體內(nèi)、外環(huán)境變化或死亡信號觸發(fā)，在基因調(diào)控下引起細胞主動死亡的過程。腫瘤不僅是細胞增殖和分化異常的疾病，也是細胞凋亡異常的疾病。許多惡性腫瘤的發(fā)生是細胞的死亡過程受阻，而使腫瘤細胞在數(shù)量上無限制的惡性增生的結(jié)果。這種增生與死亡的平衡失調(diào)目前認為是由細胞凋亡的調(diào)節(jié)紊亂所引起的。

楊勤建通過血清藥理學方法發(fā)現(xiàn)，由半夏、天南星、馬錢子、三七等中藥組成的892號藥液用于人肺癌SPCAI細胞24h后，用倒置相差顯微鏡觀察到細胞由原來貼壁生長而逐漸脫落、外形變圓、體積縮小、折光性增強；經(jīng)熒光染色后，用熒光顯微鏡觀察可見細胞核破碎，呈大小不等、形態(tài)不規(guī)則的碎片。其凋亡率與模型組相比有顯著性差異(P<0.05)。復方青癌靈口服液是由青蒿等6種中藥組成，徐軍等用該藥物作用于肺AGZY一83a細胞72h出現(xiàn)凋亡峰，電鏡觀察到核周隙增寬，核固縮，染色質(zhì)成塊狀等典型凋亡細胞形態(tài)特征。周彩虹在臨床實踐基礎上，依據(jù)中醫(yī)理論，用黃芪、苦參、川芎等組方而制成的中藥復方金安粉針劑，能增強順鉑誘導Lewis肺癌細胞凋亡，提取的DNA電泳可檢測到細胞凋亡主要標志DNA—Ladder的出現(xiàn)，與單用順鉑組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。細胞毒性T細胞(CytotoxicTcell，CTL)可介導靶細胞凋亡。孫剛掣用中藥金復康(由黃芪、北沙參、天冬、女貞子、大葉菜、蚤休等組成)治療中晚期肺癌19例，檢測到CTL(CD₈^＋、CD₂₈⁺)百分率顯著上升。YL等研究結(jié)果表明，柴胡皂苷D能誘導A549細胞凋亡和阻滯細胞周期G₁期的進程，與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)。何全濤用SPCAI細胞經(jīng)丹參酮ⅡA處理后，測得促凋亡基因p53，Bax，F(xiàn)as表達水平顯著升高，而凋亡抑制基因Bcl—2表達水平則顯著降低，提示丹參酮具有誘導人肺癌SPCAl細胞凋亡作用，其分子機制可能是上調(diào)p53，Bax，F(xiàn)as及下調(diào)Bcl—2的表達。Chen證實了尖葉唐松草根部提取成分唐松草阿原堿能誘導肺癌細胞株95—D細胞凋亡。免疫組化和Western—blot分析結(jié)果顯示Bcl—2基因表達下調(diào)，Bax和C—myc基因表達上調(diào)。目前已發(fā)現(xiàn)，在某些細胞中，cAMP是引起細胞凋亡的信號。細胞內(nèi)cAMP濃度的上升，可激話cAMP依賴的蛋白激酶A，使其靶細胞蛋白上某些絲氨酸和蘇氨酸磷酸化，影響這此蛋白生物學功能，引起細胞凋亡。化痰散結(jié)方(由半夏、天南星、馬錢子、三七等中藥組成)誘導人肺癌SPCAI細胞凋亡的主要機制之一，可能是作用于cAMP反應元件，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)基因的表達，從而誘導SPCAl細胞凋亡。另外細胞內(nèi)第二信使Cd在細胞凋亡過程中發(fā)揮著重要作用。細胞內(nèi)鈣離子信號系統(tǒng)早在上世紀70年代末就被發(fā)現(xiàn)與細胞凋亡的調(diào)控有密切關(guān)系。馬靖等用甘草提取物誘導肺癌NSCLC細胞凋亡，并觀察到胞內(nèi)游離Ca2+升高和線粒體膜電位的下降，提示甘草提取物誘導肺癌NSCLC細胞凋亡的機制是通過胞內(nèi)游離Caz介導通路起作用的。此外調(diào)控蛋白Caspases家族的Caspase—8在細胞凋亡中起著極其重要的作用，它在Caspase級聯(lián)反應中屬于啟動性Caspases。Caspase—3是Caspases家族中最重要的凋亡執(zhí)行者之一，在細胞凋亡的執(zhí)行階段，負責對全部或部分關(guān)鍵性蛋白的酶切。黃冬生等用原位末端標記法證實200umol／L姜黃素作用于人肺癌SPCAl細胞24h后，細胞內(nèi)cAMP濃度升高，Caspase—3、Caspase—8mRNA表達明顯增高。LeeJH等研究發(fā)現(xiàn)，漢防己堿作用于肺癌細胞，流式細胞儀檢測到凋亡峰，G₁期細胞比例增加。進一步對其分子機制的研究發(fā)現(xiàn)，漢防己堿主要是通過誘導CDK的抑制因子p21來抑制cyclinD₁和激話Caspase—3的。

3、評價與展望

長久以來，中藥對肺癌作用的研究主要在臨床療效上，而細胞分子水平的研究近10年來才逐漸引起人們的注意。目前，研究中藥抗癌分子機理的還比較少，也不深入，對其作用機制還不十分清楚，許多問題還要進一步深入探索：(1)要研究復方制劑的整體作用機制，也要對復方制劑中的各單味藥的協(xié)同作用有研究；(2)中西醫(yī)藥結(jié)合抗癌的增效減毒作用的研究還要深入；(3)中藥抗癌研究多為體外實驗，體內(nèi)實驗較少；(4)中藥抗癌的分子機制中，對基因調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導通路和細胞因子影響等方面，有待進一步研究。

基于中藥抗癌的臨床療效和其抗癌機理在細胞分子水平取得的進展，利用現(xiàn)代科學技術(shù)從傳統(tǒng)中藥中篩選出新的天然抗癌藥物，不僅具有臨床應用價值和良好的開發(fā)前景，而且對中藥走向世界有著重要的意義。