摘要:目的:觀(guān)察通腦舒絡(luò)膠囊對(duì)小鼠腦缺血缺氧的保護(hù)作用,及其對(duì)大鼠血栓形成和小鼠凝血時(shí)間的影響。方法:采用斷頭及雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并迷走神經(jīng)結(jié)扎法造成小鼠急性腦缺血模型,采用大鼠動(dòng)、靜脈吻合法形成血栓和毛細(xì)玻璃管法測(cè)定小鼠凝血時(shí)間,觀(guān)察藥物對(duì)腦缺血缺氧的保護(hù)作用、對(duì)血栓形成的抑制作用及對(duì)凝血時(shí)間的延長(zhǎng)。結(jié)果:通腦舒絡(luò)膠囊能顯著延長(zhǎng)腦缺血缺氧小鼠的存活時(shí)間,減輕大鼠血栓重量,延長(zhǎng)凝血時(shí)間。結(jié)論:通腦舒絡(luò)對(duì)腦缺血缺氧具有保護(hù)作用,并能抑制血栓形成,延長(zhǎng)凝血時(shí)間。
關(guān)鍵詞:通腦舒絡(luò)膠囊;腦缺血缺氧;血栓形成;凝血時(shí)間
中圖分類(lèi)號(hào):R743.31
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):1007—2349(2007)05—0037—02
心腦血管疾病是目前發(fā)病率最高、對(duì)人類(lèi)健康威脅最為嚴(yán)重的疾病之一,其中80%以上為缺血性腦血管病。腦缺血性疾病發(fā)生在局部腦血流減少甚至完全喪失的基礎(chǔ)上,目前對(duì)其治療主要以溶栓恢復(fù)缺血組織血液灌流為主。
通腦舒絡(luò)膠囊是江蘇省中醫(yī)藥研究院根據(jù)名醫(yī)驗(yàn)方制作而成,有多年的臨床應(yīng)用基礎(chǔ),具有很好的臨床療效,主要用于腦中風(fēng)治療。本文采用斷頭及雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并迷走神經(jīng)結(jié)扎法造成小鼠急性腦缺氧缺血模型,大鼠動(dòng)、靜脈吻合法形成血栓等方法,觀(guān)察通腦舒絡(luò)膠囊對(duì)腦缺血的保護(hù)作用及其對(duì)血栓形成和凝血時(shí)間的影響,為中藥驗(yàn)方提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠,18~22g;SD清潔級(jí)大鼠,體重280~320g,購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,合格證號(hào):SCXK(滬)2003—0003,飼養(yǎng)環(huán)境清潔級(jí),合格證號(hào):SCXK(蘇)2002—0052。
1.2材料 通腦舒絡(luò)膠囊混懸液,蒸餾水稀釋至所需濃度;尼莫地平片,廣州華南藥業(yè)有限公司生產(chǎn),20mg/片,批號(hào)060201;阿司匹林腸溶片,南京白敬宇制藥有限公司,25mg/片,批號(hào)060601。
2、方法
2.1 對(duì)小鼠急性腦缺氧的保護(hù)作用 昆明種小鼠70只,體重18~22g,雌雄各半,將小鼠隨機(jī)分為5組,即對(duì)照組、陽(yáng)性藥組和給藥高、中、低劑量組。給藥組分別灌胃給予通腦舒絡(luò)膠囊混懸液11、5.5、2.75g生藥/kg,對(duì)照組灌胃給予同體積的蒸餾水,陽(yáng)性藥組灌胃給予尼莫地平20mg/kg,灌胃給藥7d,于末次給藥后1h,參照文獻(xiàn)方法將小鼠雙耳后頸部逐只斷頭,立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止的時(shí)間。
2.2雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并迷走神經(jīng)結(jié)扎致小鼠腦缺血 昆明種小鼠70只,體重18~22g,雌雄各半,分組同2.1,灌胃給藥7d,于末次給藥后1h,清醒狀態(tài)下仰位固定,頸部正中切口,分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并迷走神經(jīng),以0號(hào)手術(shù)線(xiàn),在近心端和遠(yuǎn)心端分別穿線(xiàn),結(jié)扎同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),剪斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并迷走神經(jīng),完全阻斷大腦血流。記錄各組小鼠的存活時(shí)間(以小鼠末次腹式呼吸為觀(guān)察指標(biāo))。
2.3大鼠體內(nèi)血栓形成(動(dòng)靜脈旁路法) 雄性SD大鼠50只,280~380g,隨機(jī)分為5組,每組10只。即對(duì)照組、陽(yáng)性藥組和給藥高、中、低劑量組。給藥組分別灌胃給予通腦舒絡(luò)膠囊混懸液5.5、2.75、1.375g生藥/kg,對(duì)照組灌胃給予同體積的蒸餾水,陽(yáng)性藥組灌胃給予阿司匹林30mg/kg。大鼠以20%烏拉坦(6ml/kg,ip)麻醉后,分離右頸內(nèi)動(dòng)脈及左頸外動(dòng)脈,以置入6cm 4~0手術(shù)絲線(xiàn)的聚乙烯管連通,形成動(dòng)靜脈旁路。分別舌下靜脈給藥15min后,開(kāi)放血流15min,取出絲線(xiàn)稱(chēng)重,總重減去絲線(xiàn)重即為血栓濕重。按下式計(jì)算抑制百分率,抑制率(%)=(對(duì)照組血栓濕重一給藥組血栓濕重)/對(duì)照組血栓濕重×100。
2.4小鼠凝血時(shí)間測(cè)定 昆明種小鼠70只,體重18~22g,雌雄各半。將小鼠隨機(jī)分為5組,即對(duì)照組、陽(yáng)性藥組和給藥高、中、低劑量組。給藥組分別灌胃給予通腦舒絡(luò)膠囊混懸液11、5.5、2.75g生藥/kg,對(duì)照組灌胃給予同體積的蒸餾水,陽(yáng)性藥組灌胃給予阿司匹林60mg/kg,灌胃給藥6d。末次給藥后1h,眼后靜脈叢取血,以毛細(xì)管法測(cè)定凝血時(shí)間(CT)L3J。
2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。組間比較采用t檢驗(yàn),組間率的比較采用x2檢驗(yàn)。
3、結(jié)果
3.1對(duì)小鼠急性腦缺氧的影響與對(duì)照組比較,通腦舒絡(luò)膠囊中、高劑量組能明顯延長(zhǎng)小鼠斷頭喘氣時(shí)間(P<0.05或0.01)。見(jiàn)表1。
與對(duì)照組相比,*P<0.05,**P%0.01
3.2對(duì)雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并迷走神經(jīng)結(jié)扎小鼠存活時(shí)間的影響與對(duì)照組比較,通腦舒絡(luò)膠囊中、高劑量組能明顯提高雙側(cè)頸總動(dòng)脈合并迷走神經(jīng)結(jié)扎小鼠的存活時(shí)間(P<0.05或0.01)。見(jiàn)表2。
4、討論
腦是高級(jí)神經(jīng)中樞,對(duì)血供的需求很大,腦重只占體重的2%~3%,卻利用了全身耗氧量的20%~25%,葡萄糖的75%。腦組織的氧、葡萄糖的儲(chǔ)備極少,一旦血流完全阻斷,6秒鐘內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞代謝即可受到影響,幾分鐘內(nèi)能量代謝和離子平衡就發(fā)生紊亂,因此腦血流的充足供應(yīng)是腦功能正常和結(jié)構(gòu)完整的首要條件Ⅲ。小鼠顱內(nèi)腦血管之間有吻合枝,單獨(dú)結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈不出現(xiàn)明顯腦缺血癥狀,當(dāng)將迷走神經(jīng)和頸總動(dòng)脈一起結(jié)扎時(shí),則迷走神經(jīng)受到刺激引起血壓下降,可產(chǎn)生腦缺血。在同時(shí)結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)后,大腦因?yàn)檠鞴?yīng)的減少出現(xiàn)供氧減少而出現(xiàn)明顯缺氧癥狀,模型動(dòng)物絕大多數(shù)在內(nèi)死亡。在斷頭實(shí)驗(yàn)中,腦血液供應(yīng)中斷,但腦中原有的血和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)尚能使腦功能維持一段時(shí)間,表現(xiàn)為小鼠規(guī)律地喘氣,當(dāng)能量耗至一定程度,活動(dòng)終止。實(shí)驗(yàn)表明通腦舒絡(luò)膠囊3個(gè)劑量組均可延長(zhǎng)結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈小鼠的存活時(shí)間,通腦舒絡(luò)膠囊高、中劑量能顯著延長(zhǎng)斷頭小鼠的喘息時(shí)間,使腦耗氧量降低,增加神經(jīng)細(xì)胞耐缺氧能力,對(duì)急性腦缺血缺氧有明顯的拮抗作用,提示該藥能具有提高機(jī)體的血氧利用率,降低機(jī)體的耗氧量,增加動(dòng)物血管動(dòng)靜脈血氧量,從而提高組織利用氧的能力,促進(jìn)對(duì)動(dòng)物心腦等重要器官的供氧需求,對(duì)腦組織有明顯的保護(hù)作用。
凝血系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)平衡,既保證了血液有潛在的可凝固性,又始終保證了血液的流體狀態(tài)。然而,有時(shí)在某些能促進(jìn)凝血過(guò)程的因素作用下,打破了上述動(dòng)態(tài)平衡,觸發(fā)凝血過(guò)程,血液便可在血管腔內(nèi)凝固,形成血栓。腦缺血時(shí),血液處于高凝、高粘、高聚狀態(tài),血栓的形成是其重要的生理病理過(guò)程之一。實(shí)驗(yàn)表明通腦舒絡(luò)膠囊各劑量組能顯著抑制大鼠動(dòng)靜脈旁路血栓的形成,提示能夠?qū)寡ǖ男纬?。缺血性心腦血管病的病理生理過(guò)程中存在著凝血一纖溶的異常變化。而凝血過(guò)程是一個(gè)多因子參與的復(fù)雜過(guò)程,既可由血管內(nèi)膜損傷激活的“內(nèi)源途徑”引發(fā),也可由血管外的凝血因子與血液接觸而啟動(dòng)的“外源途徑”引發(fā)。實(shí)驗(yàn)表明通腦舒絡(luò)膠囊中、高劑量能顯著延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間,從而也有對(duì)抗血栓生成的作用。
本文初步證實(shí)通腦舒絡(luò)膠囊能夠保護(hù)腦缺血缺氧,延長(zhǎng)凝血時(shí)間,抑制血栓形成,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。