【關(guān)鍵詞】自身免疫甲狀腺?。患?xì)胞凋亡

文章編號(hào)：1003-1383(2006)03-0308-03

中圖分類號(hào)：R 581文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

自身免疫性甲狀腺?。ˋITD）是一組由Ｔ細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病，以Graves病(GD)和橋本氏甲狀腺炎(HT)為代表，是人類最常見的自身免疫性疾病。遺傳因素與環(huán)境因素的復(fù)雜相互作用導(dǎo)致該病的發(fā)生。近年隨著基礎(chǔ)研究的不斷進(jìn)展，提出甲狀腺細(xì)胞凋亡與AITD的發(fā)病亦有一定的關(guān)系，認(rèn)為細(xì)胞死亡受體的激活及調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的因子參與AITD的發(fā)病過程。細(xì)胞凋亡，又稱細(xì)胞程序化死亡，是機(jī)體防御遺傳損傷，維持正常發(fā)育，器官組織正常代謝和免疫調(diào)節(jié)所需的一個(gè)生理過程。細(xì)胞凋亡的不足和增加與人類許多增生性疾病和自身免疫疾病相關(guān)。本文就近幾年來(lái)細(xì)胞凋亡與AITD的研究綜述如下。

一、與AITD相關(guān)的細(xì)胞凋亡的因子

1.Fas/FasL(Fas ligand)系統(tǒng)細(xì)胞凋亡(apoptosis)與AITD密切相關(guān)，特別是與細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白Fas、sFas、FasL、sFasL等的表達(dá)及其調(diào)控關(guān)系密切，由Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是AITD甲狀腺細(xì)胞凋亡的主要途徑。關(guān)于FasL和 Fas介導(dǎo)的甲狀腺細(xì)胞凋亡，目前有２種解釋：其一，Bluher^[1]等觀察誘發(fā)為實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)的BB／W大鼠的甲狀腺中Fas/FasL表達(dá)水平較未發(fā)生ＥＡＴ的BB／Ｗ大鼠明顯升高。認(rèn)為ＢＢ／Ｗ大鼠甲狀腺組織破壞與甲狀腺細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。HT大鼠的甲狀腺細(xì)胞Fas表達(dá)過多，淋巴細(xì)胞的FasL與表達(dá)Fas的甲狀腺細(xì)胞結(jié)合，引起甲狀腺細(xì)胞凋亡和組織破壞，導(dǎo)致甲狀腺功能低下。其二，也有研究發(fā)現(xiàn)人和小鼠的正常甲狀腺細(xì)胞低水平表達(dá)Fas，一般情況下不表達(dá)FasL^[2]，但在多種甲狀腺疾病中，特別是HT和GD在自身免疫狀態(tài)下，其甲狀腺細(xì)胞可同時(shí)表達(dá)Fas/FasL，認(rèn)為HT患者的甲狀腺細(xì)胞凋亡是甲狀腺細(xì)胞自身通過Fas/FasL相互結(jié)合，誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞死亡，甲狀腺組織Fas/FasL表達(dá)水平的改變可能是引起AITD的關(guān)健因素。

2.Ｂcl2/Ｂcx系統(tǒng)B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因2和Ｂcx同屬Ｂcl家族。根據(jù)它們?cè)诩?xì)胞凋亡中的作用，分為促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因(Ｂax、Ｂad、Ｂclxs 等) 和抑制細(xì)胞凋亡的基因(Ｂcl２、Ｂclxl 等)。有研究觀察到在ＨＴ患者甲狀腺中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的附近區(qū)域Bcl2低表達(dá)， 而遠(yuǎn)離淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的區(qū)域 Bcl2表達(dá)增多，其 Bax 的表達(dá)情況與之相反。認(rèn)為 Bcl2和Bax之間表達(dá)的高低，調(diào)控HT患者的甲狀腺細(xì)胞凋亡。Giordano等^[3]發(fā)現(xiàn) GD患者甲狀腺細(xì)胞中的Fas／FasL表達(dá)較少，抗凋亡分子 Bcl2的表達(dá)較高，而甲狀腺浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TILs)中的Fas／FasL的表達(dá)水平增高，Bcl2呈低水平表達(dá)。Bcl2／Bax 和Fas／FasL在甲狀腺細(xì)胞與甲狀腺浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞呈特征性區(qū)域的高表達(dá)，決定了GD和HT患者甲狀腺組織細(xì)胞凋亡的不同病變特征。

3.可溶性Fas／FasL （sFas／FasL）系統(tǒng)sFas是Fas基因的變異產(chǎn)物，sFas能與Fas競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合FasL，但由于其跨膜蛋白的丟失而不能將凋亡信號(hào)傳入細(xì)胞內(nèi)，其結(jié)果抑制了由Fas/sFasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，故sFas被認(rèn)為是凋亡抑制因子。Feldkamp等^[4]等研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺毒性GD患者血清中的sFas水平較正常對(duì)照組明顯增加，認(rèn)為是選擇性剪接的sFas表達(dá)增加，細(xì)胞表面 Fas表達(dá)減少。GD 患者血清中sFas水平增加，可使甲狀腺細(xì)胞和自身反應(yīng)性Ｂ細(xì)胞免遭凋亡，誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞生長(zhǎng)和TSH 受體抗體產(chǎn)生。Wang等^[5]發(fā)現(xiàn)GD患者sFasL水平和TSH受體抗體的活性有顯著的相關(guān)性。HT 患者血清中sFas水平低下，表明Fas mRNA變異體的產(chǎn)生較少，全長(zhǎng)Fas mRNA的表達(dá)增加， 促進(jìn)甲狀腺細(xì)胞凋亡引起甲狀腺細(xì)胞的破壞。

二、AITD中細(xì)胞凋亡的途徑

1.甲狀腺內(nèi)的凋亡路徑FasFasL路徑是首先被征用存在于甲狀腺中的。Fas是一種跨膜糖蛋白，通過與其配體FasL形成復(fù)合體而介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，已經(jīng)證明 Fas在胸腺、肝、脾、卵巢和心臟中，F(xiàn)asL廣泛表達(dá)于機(jī)體和心臟中， FasL廣泛表達(dá)于機(jī)體免疫豁免部位如睪丸、眼、大腦和胎盤，在活化的T細(xì)胞、脾細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上表達(dá)上調(diào)。但是有關(guān)FasL在正常和患病的甲狀腺上的表達(dá)水平一直有爭(zhēng)議。Stassi和Mitsiades 等分別在HT和Graves病甲腺細(xì)胞上有FasL的高水平表達(dá)，而在正常甲狀腺細(xì)胞和甲狀腺內(nèi)淋巴細(xì)胞上無(wú)或很少表達(dá)^[6，7]。除了所用抗體和實(shí)驗(yàn)手段不同外，上述有關(guān)FasL在甲狀腺細(xì)胞上表達(dá)的爭(zhēng)議可能是由于FasL在甲狀腺細(xì)胞上表達(dá)短暫或由于未知機(jī)制調(diào)節(jié)造成。與正常人相比，HT病人Fas的表達(dá)增加，F(xiàn)as表達(dá)增加的甲狀腺濾泡多數(shù)與浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞毗鄰^[4]。也發(fā)現(xiàn)HT病人甲狀腺細(xì)胞表達(dá)Fas，并提出甲狀腺細(xì)胞同時(shí)表達(dá)Fas和FasL是導(dǎo)致HT病人腺體破壞的原因。

TRAIL和其受體DR4，DR5也以與Fas/Fas路徑相同的方式在甲狀腺內(nèi)起作用。研究表明，TRAIL能直接殺傷正常人原代甲狀腺線細(xì)胞。雖然在正常甲狀腺細(xì)胞內(nèi)，TRAIL路徑由于受易變蛋白抑制劑抑制，不能誘發(fā)凋亡，但是IFNγ 與INFFasα或IL1β能使正常人甲狀腺細(xì)胞TRAIL mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，活化的T細(xì)胞對(duì)TRAIL誘導(dǎo)的凋亡敏感^[7，8]，INFγ 處理的甲狀腺細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用有抵抗，提示細(xì)胞因子誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞表達(dá)TRAIL，殺傷入侵的淋巴細(xì)胞，逃離免疫攻擊。進(jìn)一步研究TRAIL路徑在甲狀腺內(nèi)的功能和調(diào)節(jié)機(jī)制，包括不定期內(nèi)源性的蛋白合成抑制劑，將使我們更深入了解參與AITD的因子。

2.甲狀腺內(nèi)凋亡路徑的調(diào)節(jié)Fas 相關(guān)蛋白1（FAP1）已經(jīng)證明存在于甲狀腺中，是一種蛋白酷氨酸轉(zhuǎn)移酶，通過與Fas羧基末端結(jié)合，阻止 Fas路徑指信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制 Fas誘導(dǎo)的凋亡，另一種抑制凋亡蛋白Bcl2和 Bclx表達(dá)減少，Bcl2表達(dá)減少的甲狀腺細(xì)胞多與侵入的淋巴細(xì)胞比鄰，體外研究證實(shí)活化的T淋巴腺細(xì)胞中表達(dá)，減少抗凋亡能力，促進(jìn)甲狀腺細(xì)胞凋亡^[9]。

三、影響AITD細(xì)胞凋亡的因素

近期報(bào)道認(rèn)為，多種細(xì)胞因子和其他因素等可調(diào)節(jié)Fas/FasL的表達(dá)，影響甲狀腺細(xì)胞的凋亡和甲狀腺組織的損壞。

1.Ｔh1/Th2細(xì)胞因子研究發(fā)現(xiàn) GD 和HT 患者甲狀腺產(chǎn)生的細(xì)胞因子不同。GD 患者甲狀腺中以激活的Th2細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)，產(chǎn)生Th2型細(xì)胞因子。 HT患者甲狀腺中所激活的Ｔ細(xì)胞以Ｔh1細(xì)胞為主并產(chǎn)生ＩＦＮγ等Ｔh1型細(xì)胞因子，ＩＦＮγ等細(xì)胞因子與炎癥和細(xì)胞免疫應(yīng)答有關(guān)。Th2細(xì)胞釋放的ＩＬ4、ＩＬ5、ＩＬ10等細(xì)胞因子促進(jìn)抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，并抑制Ｔh1細(xì)胞的增殖。HT 患者甲狀腺中產(chǎn)生的ＩＦＮγ可促進(jìn) Fas誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，破壞甲狀腺組織。GD 患者甲狀腺中產(chǎn)生的ＩＬ4、ＩＬ10可上調(diào)細(xì)胞FLICE抑制蛋白和 Bclxl，阻止Fas誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞凋亡，保護(hù)GD 患者的甲狀腺細(xì)胞^[8，9]。 通過產(chǎn)生不同水平的Ｔh1/Th2細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白，控制甲狀腺自身免疫反應(yīng)中甲狀腺細(xì)胞的存活或死亡。

2.垂體－甲狀腺激素Ｋawakami等^[10]認(rèn)為TSH可激活蛋白激酶A抑制甲狀腺細(xì)胞Fas分子的表達(dá)，拮抗Fas/FasL介導(dǎo)的甲狀腺細(xì)胞凋亡，促進(jìn)甲狀腺細(xì)胞生長(zhǎng)。還觀察到TSH對(duì)IL1β 或ＩＦＮγ誘導(dǎo)甲狀腺細(xì)胞Fas表達(dá)有抑制作用。 考慮 TRAb 與TSH的功能相似，因此推測(cè)GD患者的TRAb可能也具有抑制甲狀腺細(xì)胞Fas表達(dá)的作用，減少甲狀腺細(xì)胞凋亡。GD患者的TSH水平升高，致使Bcl2分子表達(dá)減少，外周淋巴細(xì)胞減少，表明甲狀腺激素可誘導(dǎo)體外或GD患者的淋巴細(xì)胞凋亡^[11]。

3.碘Ｆeldkamb 等^[12]觀察到低濃度的碘對(duì)Fas介導(dǎo)的凋亡影響微弱，高濃度的碘會(huì)增加Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率，適當(dāng)?shù)牡鉂舛瓤擅黠@抑制Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率。相反，Tamura等^[13]觀察到低碘飲食的大鼠Fas誘導(dǎo)的甲狀腺細(xì)胞凋亡率很高，缺碘大鼠TGFβ的表達(dá)也較高。碘可能會(huì)改變甲狀腺組織Fas/FasL的表達(dá)水平，在調(diào)節(jié)甲狀腺細(xì)胞凋亡中亦有重要的作用。

四、細(xì)胞凋亡在AITD的發(fā)生發(fā)展起重要作用

細(xì)胞凋亡是維持甲狀腺功能和形態(tài)正常所必需的，細(xì)胞凋亡的異常改變與AITD的發(fā)生密切相關(guān)，免疫介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的增加被認(rèn)為是HT中甲狀腺破壞的主要機(jī)制之一，HT主要是HTB+T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷，HTB+T細(xì)胞通過釋放穿孔素和顆粒酶B，激活CASPASE3，從而引發(fā)凋亡^[13，14]，甲狀腺細(xì)胞互殺，也被認(rèn)為是HT病人甲狀腺細(xì)胞破壞的機(jī)制。越來(lái)越多的證據(jù)表明凋亡的改變也與Graves病密切相關(guān)，TSH和Graves病人的IgG可以減少正常甲狀腺細(xì)胞表在Fas，甲狀腺激素可以誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞通過主動(dòng)殺傷侵潤(rùn)的淋巴細(xì)胞而維持自己的生存和增殖^[11]?？扇苄訤as（sFa）是Fas基因的變異產(chǎn)物，其mRNA較正常減少63個(gè)核酸序列，F(xiàn)as蛋白跨膜區(qū)減少16個(gè)氨基酸殘基，胞外區(qū)減少5個(gè)氨基酸殘基，但與FasL的結(jié)合位點(diǎn)正常，通過競(jìng)爭(zhēng)與FasL結(jié)合抑制Fas介導(dǎo)的凋亡，從而改變淋巴細(xì)胞對(duì)自身抗原產(chǎn)生反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展過程，Yuji Hiromatsu等研究表明血清sFas水平在GD甲亢期明顯增加，緩解期明顯減少，sFas水平與TSHRAb明顯相關(guān)。用RTPCR的方法在ＧD甲狀腺組織中，培養(yǎng)的甲狀腺細(xì)胞和甲狀腺內(nèi)淋巴細(xì)胞中都能測(cè)出sFas mRNA，并受TNFα和IL1β調(diào)節(jié)^[15]，說(shuō)明sFas在GD的致病中起重要的作用。

五、研究細(xì)胞凋亡在AITD中的意義

Batteux^[16]等對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫甲狀腺炎進(jìn)行了體內(nèi)轉(zhuǎn)染編碼FasL質(zhì)粒DNA的基因治療研究，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染FasL基因的動(dòng)物甲狀腺中連連續(xù)15d有FasL的表達(dá)，而且甲狀腺內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)得到迅速緩解，說(shuō)明FasL的表達(dá)可誘使自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的凋亡，從而可以達(dá)到治療TITD的目的，對(duì)他巴唑的免疫抑制作用已經(jīng)有了新認(rèn)識(shí)，他巴唑能誘導(dǎo)甲狀腺表達(dá)FasL，與T細(xì)胞上的Fas受體結(jié)合后，誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，使淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，從而保護(hù)甲狀腺細(xì)胞免疫淋巴細(xì)胞的攻擊。

綜上所述，深入研究細(xì)胞凋亡及其調(diào)節(jié)因素在 AITD發(fā)病中的作用，對(duì)闡明AITD的發(fā)病機(jī)制和提出臨床治療方法 都將具有一定的意義。

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(收稿日期：2006-02-10修回日期：2006-05-15)

(編輯：潘明志)

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