奶牛乳房炎是嚴重制約奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的全球性問題，從經(jīng)濟層面看，乳房炎致使奶牛產(chǎn)奶量顯著下降，研究統(tǒng)計表明，患乳房炎的奶牛單日產(chǎn)奶量平均下降幅度可達 20%～50% ，同時，牛奶品質(zhì)惡化，體細胞數(shù)大幅上升，乳蛋白、乳脂肪含量降低，提升了乳制品企業(yè)的生產(chǎn)成本和質(zhì)量風險，治療患病奶牛需投入大量獸藥和人工成本，病死淘汰奶牛更是造成直接經(jīng)濟損失[]。從奶牛健康角度而言，乳房炎引發(fā)奶牛乳房紅腫、疼痛、發(fā)熱等癥狀，嚴重影響其正常生理機能和生活質(zhì)量，長期患病還會降低奶牛免疫力，增加其他疾病感染風險，縮短使用壽命[2。武威市將奶產(chǎn)業(yè)作為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)“首位產(chǎn)業(yè)”，奶牛存欄量、鮮奶日加工能力全省第一，2024年奶產(chǎn)量同比增長 18% ，其憑借優(yōu)越自然條件與良好產(chǎn)業(yè)基礎，獲得政策上的大力支持，通過建設奶源基地、提升加工能力、推動科技創(chuàng)新發(fā)展，目標2025年建成甘肅乳都與百億級奶源基地[3-4。在武威市某規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖的快速發(fā)展中，奶牛乳房炎的頻繁發(fā)生成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的阻礙，據(jù)估算，武威市每年因奶牛乳房炎導致的經(jīng)濟損失達數(shù)千萬元。因此，深入探究武威市某規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場奶牛乳房炎病原菌的種類、分布及耐藥特性，制定有效防控措施，對降低發(fā)病率、保障奶牛健康、提升牛奶質(zhì)量和促進養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展意義重大。

1材料與方法

1.1試驗奶牛選擇

該養(yǎng)殖場奶牛存欄量達8000頭，采用現(xiàn)代化養(yǎng)殖模式，管理水平在當?shù)靥幱谥械绕?，通過仔細的臨床觀察，挑選出100頭具有典型奶牛乳房炎癥狀的奶牛，癥狀涵蓋乳房局部紅腫、發(fā)熱、質(zhì)地變硬，乳汁呈現(xiàn)絮狀物、凝塊、變色或水樣化等，保證所選奶牛能較好反映該養(yǎng)殖場乳房炎發(fā)病狀況。

1.2病原菌分離鑒定試驗

對采集的奶樣逐一進行詳細編號記錄，以保證樣品的可追溯性，在嚴格的無菌實驗室環(huán)境中，使用無菌涂布棒將奶樣均勻涂布于血瓊脂培養(yǎng)基表面，將涂布后的培養(yǎng)基置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24～48h ，期間定時觀察菌落生長情況。待菌落長出后，挑取形態(tài)各異的單個菌落進行純化培養(yǎng)，反復劃線接種于新的血瓊脂培養(yǎng)基，直至獲得純培養(yǎng)物。

1.3藥物敏感性試驗

基于病原菌分離鑒定結(jié)果，篩選出感染同一種病原菌的奶牛，按照隨機分組原則分為4個實驗組，每組奶牛數(shù)量均衡，采用藥敏紙片瓊脂擴散法（K-B法）進行藥敏試驗，將分離得到的病原菌用無菌生理鹽水制備成0.5麥氏濁度的菌懸液，相當于 1.5×10⁸ CFU/mL，用無菌棉簽蘸取菌懸液，均勻涂布于M-H瓊脂平板表面，確保菌液分布均勻，待平板表面稍干后，用無菌鑷子將藥敏紙片輕輕貼于平板表面，各藥敏紙片之間的距離不小于 ：24mm ，紙片距平板邊緣不小于 15mm ，將貼好藥敏紙片的平板置于37 C 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 16～18h 培養(yǎng)結(jié)束后，使用游標卡尺精確測量抑菌圈直徑，根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會（CLSI）制定的標準判斷細菌對各種抗生素的敏感性，分為敏感（S）中介（I）和耐藥（R）三個等級，從而總結(jié)出針對該規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛乳房炎最有效的藥物。

1.4防控措施實施

在該規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場實施綜合防控措施，在環(huán)境衛(wèi)生管理方面，建立嚴格的清掃消毒制度，每天定時對牛舍進行全面清掃，清除糞便、雜物和污水，采用干清糞工藝，避免污水和糞便長時間堆積；每周至少進行3次徹底消毒，交替使用過氧乙酸、戊二醛等消毒劑，防止病原菌產(chǎn)生耐藥性；加強通風換氣設施的維護和管理，確保牛舍內(nèi)空氣清新，控制牛舍內(nèi)溫度在 10～25°C ，相對濕度在50%～70% ，為奶牛創(chuàng)造良好的生活環(huán)境。

在擠奶操作規(guī)范方面，對擠奶員進行專業(yè)培訓，要求持健康證上崗，擠奶前，先用40＼～45 C 溫水清洗奶牛乳房，再用干凈毛巾擦干，然后用碘伏或?qū)Ｓ萌轭^消毒劑進行乳頭藥浴，待干燥后進行擠奶；采用機械化擠奶設備，定期對擠奶設備進行清洗、消毒和維護，確保設備運行正常，擠奶真空度控制在 35～40kPa ，脈動頻率為60＼～70次/min；擠奶結(jié)束后，再次對乳頭進行藥浴，防止病原菌侵入。

對于乳房炎的監(jiān)測與治療，建立完善的監(jiān)測體系，每周對奶牛進行一次隱性乳房炎檢測，采用加州乳房炎檢測法（CMT）或其他快速檢測方法，及時發(fā)現(xiàn)潛在感染奶牛；每月進行一次臨床型乳房炎排查，一旦發(fā)現(xiàn)感染奶牛，立即進行隔離治療，根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選擇敏感抗生素進行治療，治療期間密切觀察奶牛病情變化，記錄治療效果，對于病情嚴重或久治不愈的奶牛，及時進行淘汰處理，防止疾病傳播擴散。

2實驗結(jié)果

2.1病原菌分離鑒定結(jié)果

通過分離鑒定，從100份奶樣中成功分離鑒定出多種病原菌。其中，金黃色葡萄球菌35株，占比 35% ，其在血瓊脂培養(yǎng)基上形成圓形、隆起、濕潤、金黃色且具有 β -溶血環(huán)的菌落，革蘭氏染色鏡檢可見革蘭氏陽性球菌呈葡萄串狀排列（圖1）。大腸埃希菌28株，占比 28% ，在血瓊脂培養(yǎng)基上菌落呈灰白色，在麥康凱培養(yǎng)基上形成紅色菌落，革蘭氏染色為陰性桿菌（圖2）。鏈球菌20株，占比 20% ，在血瓊脂培養(yǎng)基上形成灰白色、半透明、表面光滑的小菌落，部分有 ∝ -溶血環(huán)，革蘭氏染色陽性球菌呈鏈狀排列（圖3）。其他病原菌17株，占比 17% ，包括大腸埃希菌屬、葡萄球菌屬其他種等。

2.2藥物敏感性試驗結(jié)果

針對金黃色葡萄球菌，頭孢噻呋的敏感率最高，達到75% ，抑菌圈直徑平均為 125mm ；對青霉素的耐藥率高達80% ，抑菌圈直徑多數(shù)小于 10mm 。大腸埃希菌對恩諾沙星敏感率為 70% ，平均抑菌圈直徑 23mm ；對鏈霉素耐藥率 75% 。鏈球菌對頭孢噻呋敏感率 80% ，平均抑菌圈直徑26mm ；對四環(huán)素耐藥率 60% ，具體數(shù)據(jù)詳見表1。

2.3防控效果評估

實施綜合防控措施前，該養(yǎng)殖場奶牛乳房炎發(fā)病率為10% （800/8000），實施防控措施后，第一個月發(fā)病率下降至 8.75% （700/8000），下降幅度相對較小，主要是因為部分慢性感染病例難以在短時間內(nèi)得到有效控制，且牛舍環(huán)境中病原菌的清除需要一定時間。隨著防控措施的持續(xù)實施，第二個月發(fā)病率下降至 6.25% （500/8000），到第三個月及以后，發(fā)病率穩(wěn)定在 5% （400/8000）左右，表明綜合防控措施在降低奶牛乳房炎發(fā)病率方面取得了顯著成效，同時，牛奶質(zhì)量得到明顯改善，體細胞數(shù)從實施前的50萬個/mL下降至30萬個/mL以下，乳蛋白和乳脂肪含量有所提高，分別達到 3.2% 和 13.8% 以上，提高了牛奶的商品價值和加工性能。

3分析討論

本研究中，該規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛乳房炎病原菌以金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和鏈球菌為主，與國內(nèi)其他地區(qū)的相關研究結(jié)果基本一致[57。金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生多種毒素和酶，如 ∝ -毒素、β-毒素、凝固酶等， ∝ -毒素和β-毒素可破壞乳腺上皮細胞的細胞膜，導致細胞溶解和壞死，凝固酶則使血漿凝固，形成纖維蛋白屏障，有利于細菌在乳腺組織內(nèi)定植和繁殖，逃避機體的免疫防御機制，是引發(fā)臨床型乳房炎的重要病原菌[。如鄧波等研究發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)患乳房炎奶牛乳樣中，金黃色葡萄球菌的全年檢出率為 13.33% ，且菌株多重耐藥情況普遍，這與本研究一致。大腸埃希菌細胞壁上的脂多糖（LPS）具有內(nèi)毒素活性，當細菌侵入乳腺組織后，LPS釋放可引發(fā)機體強烈的炎癥反應，導致乳房組織水腫、充血和白細胞浸潤，當養(yǎng)殖場環(huán)境衛(wèi)生條件差，如牛舍糞便清理不及時、污水積聚等，會增加奶牛接觸大腸埃希菌的機會，通過乳頭管逆行感染乳腺，引發(fā)乳房炎。鏈球菌通過黏附素與乳腺上皮細胞表面受體結(jié)合，侵人細胞內(nèi)生長繁殖，引發(fā)炎癥，不同種類的鏈球菌致病機制有所差異，如無乳鏈球菌主要通過黏附素與乳腺上皮細胞表面受體結(jié)合，侵入細胞內(nèi)生長繁殖，引發(fā)炎癥；停乳鏈球菌則可產(chǎn)生多種酶類，降解乳腺組織中的蛋白質(zhì)和多糖，破壞乳腺結(jié)構(gòu)。

藥敏試驗結(jié)果顯示出病原菌對多種常用抗生素存在較高耐藥率，這一現(xiàn)象令人擔憂，金黃色葡萄球菌對青霉素、四環(huán)素等具有高耐藥率，主要是由于長期大量不合理使用抗生素，誘導細菌產(chǎn)生耐藥基因，如金黃色葡萄球菌攜帶的mecA基因可編碼是一種特殊的青霉素結(jié)合蛋白（PBP2a），該蛋白與青霉素的親和力極低，從而使細菌對青霉素產(chǎn)生耐藥性[10]。大腸埃希菌對鏈霉素、青霉素等耐藥嚴重，其耐藥機制包括產(chǎn)生氨基糖苷類修飾酶，使鏈霉素失去抗菌活性；通過外排泵系統(tǒng)地將青霉素等抗生素排出細胞外，降低細胞內(nèi)藥物濃度[11]。這種嚴重的耐藥情況給奶牛乳房炎的臨床治療帶來極大挑戰(zhàn)，盲目使用抗生素不僅無法有效治療疾病，還會導致耐藥菌株的傳播和擴散，進一步惡化耐藥形勢。因此，在臨床治療中，必須嚴格依據(jù)藥敏試驗結(jié)果，精準選擇敏感抗生素，避免濫用抗生素，同時，應研發(fā)新型抗菌藥物和治療方法，如噬菌體療法、抗菌肽等，成為解決耐藥問題的重要研究方向。

綜合防控措施實施后，奶牛乳房炎發(fā)病率顯著降低，充分證明了該措施的有效性和可行性，加強環(huán)境衛(wèi)生管理，能夠從源頭上減少病原菌的滋生和繁殖；定期徹底清掃牛舍、合理通風換氣以及科學消毒，有效降低了牛舍內(nèi)病原菌的數(shù)量，減少了奶牛感染的機會；規(guī)范擠奶操作流程是預防乳房炎的關鍵環(huán)節(jié)，擠奶前的乳房清洗、乳頭藥浴以及擠奶設備的定期維護與消毒，避免了擠奶過程中病原菌的侵入和傳播，嚴格的擠奶操作規(guī)范，如控制擠奶真空度和脈動頻率，能夠減少乳頭損傷，降低乳房炎的發(fā)生風險；對奶牛乳房炎的定期監(jiān)測與及時隔離治療，實現(xiàn)了對疾病的早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療；通過每周的隱性乳房炎檢測和每月的臨床型乳房炎排查，能夠及時發(fā)現(xiàn)感染奶牛，將其隔離并根據(jù)藥敏結(jié)果進行精準治療，防止疾病在牛群中傳播擴散；這不僅提高了治療效果，還降低了整體發(fā)病率。

本研究也存在一定的局限性，如在采樣方面，僅選取了一家規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場，對于武威市其他養(yǎng)殖場的情況代表性不足，無法全面反映該地區(qū)奶牛乳房炎病原菌的分布和耐藥情況；在病原菌研究方面，僅進行了常規(guī)的分離鑒定和藥敏試驗，未對病原菌的耐藥基因進行深入檢測和分析，無法全面揭示耐藥機制。此外，防控措施的研究時間相對較短，對于長期防控效果以及防控措施實施成本一效益分析不夠完善。未來的研究可以進一步擴大采樣范圍，涵蓋不同規(guī)模和養(yǎng)殖模式的奶牛養(yǎng)殖場，全面了解武威市奶牛乳房炎病原菌的分布情況，深入開展病原菌耐藥基因檢測和分析，明確耐藥機制，為開發(fā)新型抗菌藥物和治療方法提供理論依據(jù)。同時，開展長期的防控效果跟蹤研究，優(yōu)化防控措施，并進行詳細的成本一效益分析，為養(yǎng)殖場提供更具操作性和經(jīng)濟性的防控方案。

結(jié)語

本研究系統(tǒng)地對武威市某規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛乳房炎病原菌進行了分離鑒定，并評估了綜合防控措施的效果。明確了金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和鏈球菌是主要病原菌，且這些病原菌對常用抗生素存在不同程度的耐藥性。通過實施加強環(huán)境衛(wèi)生管理、規(guī)范擠奶操作流程、定期監(jiān)測與及時治療等綜合防控措施，奶牛乳房炎發(fā)病率顯著降低，牛奶質(zhì)量得到明顯改善。在實際生產(chǎn)中，養(yǎng)殖場應高度重視病原菌監(jiān)測，嚴格根據(jù)藥敏結(jié)果合理用藥，持續(xù)強化綜合防控措施的落實，以切實保障奶牛健康，有效提高養(yǎng)殖效益和牛奶質(zhì)量安全，促進武威市奶牛養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)、健康發(fā)展。同時，針對本研究的局限性，后續(xù)研究需進一步深入探索，為奶牛乳房炎防控提供更全面、深入的理論與實踐支持。

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收稿日期：2025-04-18

作者簡介：苗承霞（1990—），女，漢族，本科，獸醫(yī)師。研究方向：畜牧獸醫(yī)。*通訊作者：張延浩（1990—），男，漢族，本科，獸醫(yī)師。研究方向：畜牧獸醫(yī)。