Analysis ofProficient Verification Results for Detection of Staphylococcus aureus in Food

ZHANG Mingxin， WANG Lijie， WANG Hanqing， WANG Yunxia （Henan Zhongce Technology Testing Service Co.，Ltd.， Zhengzhou 45ooo0， China）

Abstract： Objective： To participate in the proficiency testing experiment for the qualitative detection of Salmonel，Staphylococcus aureus and Cronobacter （Enterobacter sakazakii） in milk powder numbered CNCA24-01，and to verify the ability of the testing institution to detect Staphylococcus aureus.Method： According to the test instruction manual for proficiency testing and referring to the first method in GB 4789.10—2016 to detect the proficiency testing samples of Staphylococcus aureus，for the isolated suspicious colonies，microscopic examination and the identification stripof Haibo HB4l17-4 freeze-dried rabbit plasma were used for identification. Meanwhile，the suspicious colonies were determined by using the fully automatic microbial biochemical identification system （VITEK2）. Result： Staphylococcus aureus was detected in sample 24-Q199，but not in sample 24-K168.The test results were consistent with the national standard method. Conclusion： The proficiency test result ofthis laboratory is“satisfactory”，verifying the testing capability of the inspection and testing institution for Staphylococcus aureus.

Keywords： Staphylococcus aureus; profitability testing; full automatic microbial biochemical identification system （VITEK2）

金黃色葡萄球菌是一種常見(jiàn)的食源性致病菌，屬于葡萄球菌屬中的一種，通常寄生于人和動(dòng)物的皮膚、鼻腔、咽喉等部位，在環(huán)境中也多有存在。其生存能力強(qiáng)，可在干燥的環(huán)境中存活數(shù)月。其中，蛋白質(zhì)或淀粉含量豐富的食品容易被金黃色葡萄球菌污染，常見(jiàn)的有奶、肉、蛋類及其制品等。剩飯中常含有較高濃度的金黃色葡萄球菌，被其污染的食物通常在 20～30^°C 下放置 3～5h ，就開(kāi)始產(chǎn)生足以引起中毒的腸毒素。一旦人體攝人這種腸毒素，通常在 2～5h 就會(huì)出現(xiàn)嘔吐、腹痛、腹瀉等中毒癥狀。

能力驗(yàn)證是利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)來(lái)確定實(shí)驗(yàn)檢測(cè)能力的活動(dòng)，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的重要方式[，可用于確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和提高檢測(cè)水平。為驗(yàn)證自身對(duì)金黃色葡萄球菌的檢測(cè)能力，提高微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和檢驗(yàn)人員技術(shù)水平，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室競(jìng)爭(zhēng)力，2024年河南中測(cè)技術(shù)檢測(cè)服務(wù)有限公司參加了由中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心組織的CNCA-24-01乳粉中沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）的定性檢測(cè)能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，采用《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB4789.10—2016）[2]進(jìn)行檢測(cè)，同步借助全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)（VITEK2）對(duì)可疑菌落進(jìn)行輔助鑒定。

1材料與方法

1.1材料與試劑

本次能力驗(yàn)證樣品來(lái)自中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心，樣品編號(hào)為24-Q199、24-K168；金黃色葡萄球菌（ATCC6538），美國(guó)菌種保藏中心;表皮葡萄球菌（CMCC26069），中國(guó)微生物菌種保藏中心。

7.5% 氯化鈉肉湯培養(yǎng)基、Baird-Parker平Ⅲ、血平Ⅲ、BHI肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、革蘭氏染色試劑盒、凍干兔血漿（青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

YXQ-70A立式壓力蒸汽滅菌鍋、SPX-250B-Z生化培養(yǎng)箱，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；BSC-1500IIA2-X生物安全柜，濟(jì)南鑫貝西生物；全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)（VITEK2），法國(guó)生物梅里埃公司。

1.3 試驗(yàn)檢測(cè)方法

1.3.1 樣品處理與增菌

使用 60mL 無(wú)菌生理鹽水對(duì)樣品進(jìn)行再水化。在生物安全柜中打開(kāi)西林瓶，加入 5mL 無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行水化溶解，觀察西林瓶中樣品，待樣品溶解后，使用移液器將樣液轉(zhuǎn)移至 250mL 無(wú)菌三角瓶中，再用剩余的 55mL 的無(wú)菌生理鹽水清洗西林瓶?jī)?nèi)壁，回收的清洗液同樣加入上述 250mL 三角瓶中，此時(shí)瓶中的 60mL 溶液即為待測(cè)樣品原液（ 10^° ）。按照GB4789.10—2016中第一法進(jìn)行檢測(cè)。吸取25mL 檢測(cè)樣品轉(zhuǎn)移至 225mL 的含有 7.5% 氯化鈉肉湯培養(yǎng)基的無(wú)菌袋中，拍打均質(zhì)混勻，在 36°C 培養(yǎng) 18～24h 。

1.3.2 分離

增菌后的培養(yǎng)物需要進(jìn)行分離劃線，將其分別接種到Baird-Parker平皿與血平皿上，血平皿需要在（ 36±1 ） °C 的溫度下培養(yǎng) 18～24h Baird-Parker平板需要在（ 36±1 ） C 的溫度下培養(yǎng) 24～48h_?

1.3.3 初步鑒定和確證實(shí)驗(yàn)

觀察兩種平板菌落生長(zhǎng)形態(tài)。挑取可疑的菌落進(jìn)行染色鏡檢以及血漿凝固酶試驗(yàn)。血漿凝固酶試驗(yàn)步驟如下：從Baird-Parker平板與血平板上挑取5個(gè)可疑菌落分別接種在 5mL BHI肉湯中和營(yíng)養(yǎng)瓊脂小斜面培養(yǎng)基上，在（ 36±1）^eC 的溫度下培養(yǎng) 18～24h 按照順序接種凍干兔血漿，按照凍干兔血漿說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；搖勻，將其置于（ 36±1 ） °C 的培養(yǎng)箱內(nèi)，每隔 30min 觀察一次，總共觀察培養(yǎng) 6n ，如果呈現(xiàn)凝固（將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，則被判定為陽(yáng)性結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌落的形態(tài)特征

將增菌后的培養(yǎng)物，分別接種劃線到Baird-Parker平板和血平板上，培養(yǎng)后菌落形態(tài)特征如表1所示。

2.2 可疑菌落的確證

對(duì)可疑菌落分別進(jìn)行染色鏡檢和血漿凝固酶試驗(yàn)，結(jié)果如表2所示。同時(shí)，使用全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)（VITEK2）進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果見(jiàn)表3。分析結(jié)果可知，24-Q199的典型菌落鑒定為金黃色葡萄球菌，24-K168的典型菌落不是金黃色葡萄球菌。此外，常規(guī)鑒定所需時(shí)間為 24～30h ，VITEK2鑒定所需時(shí)間為 5～8h ，明顯縮短了所需時(shí)間。結(jié)合確證實(shí)驗(yàn)和VITEK2的結(jié)果，對(duì)24-Q199，24-K168兩個(gè)能力驗(yàn)證樣品分別報(bào)送為檢出 125mL 和未檢出 /25mL 。

3結(jié)論與討論

能力驗(yàn)證結(jié)果反映了各實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和水平，是提高微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和檢驗(yàn)人員技術(shù)水平，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室競(jìng)爭(zhēng)力和確保檢測(cè)質(zhì)量的重要手段[3-9]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，檢測(cè)機(jī)構(gòu)參加的CNCA-24-01乳粉中沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）的定性檢測(cè)能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了機(jī)構(gòu)檢測(cè)金黃色葡萄球菌的能力。能力驗(yàn)證樣品24-Q199檢出金黃色葡萄球菌，樣品24-K168未檢出金黃色葡萄球菌，取得“滿意”結(jié)果，可為后續(xù)工作提供強(qiáng)有力技術(shù)支撐。而VITEK2與GB4789.10—2016中第一法鑒定結(jié)果一致，且VITEK2能準(zhǔn)確地鑒定出金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，所需的鑒定時(shí)間更短，在日常檢測(cè)中可以借助VITEK2對(duì)可疑菌落進(jìn)行鑒定，以最大限度地縮短檢驗(yàn)時(shí)間，提高工作效率。

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