中圖分類號(hào)：S917.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

滑頂薄殼鳥蛤（Fulviamutica）和加州扁鳥蛤（Clinocardiumcaliforniense）同屬于軟體動(dòng)物門（Mol-lusca）、雙殼綱（Bivalvia）、簾蛤目（Veneroida）、鳥尾蛤科（Cardiidae）[1]

滑頂薄殼鳥蛤的貝殼薄脆，近似圓形，殼表有46＼～49條放射肋，肋上生有豎立的皮質(zhì)膜，殼頂光滑；前閉殼肌肌痕大，卵圓形，后閉殼肌肌痕較小，圓形。生活于潮間帶至數(shù)十米深的淺海。日本、朝鮮均有分布，在中國(guó)只分布于黃海以北的海域[2]。

加州扁鳥蛤近圓形，殼膨脹，殼面放射肋粗平，有38條左右，年輪狀生長(zhǎng)線明顯。前閉殼肌肌痕腎形，后閉殼肌肌痕圓形[2]，是中國(guó)黃渤海區(qū)域底棲生物中的優(yōu)勢(shì)種，其多生活在水深 20m～70m 之間[3]。從美洲西岸的加利福尼亞，經(jīng)白令海、鄂霍次克海、日本海、日本的北海道、本州北部、朝鮮海峽，到黃渤海，都有分布[4]

近年來，隨著中國(guó)海洋貝類增養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展和人民群眾對(duì)貝類的需求量日益增大，自然采捕難以滿足市場(chǎng)需求。而鳥蛤生長(zhǎng)速度快，營(yíng)養(yǎng)豐富，逐漸成為人工養(yǎng)殖的開發(fā)對(duì)象，國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)其繁殖和資源開發(fā)利用作出相應(yīng)研究[5-6]。藤田真吾、劉舜斌等研究了上升流裝置在苗種生產(chǎn)中的應(yīng)用，推廣上升流裝置在薄殼鳥蛤中的使用[7]；李世英等對(duì)滑頂薄殼鳥蛤各個(gè)發(fā)育階段進(jìn)行了系統(tǒng)描述[8]，并就溫度和鹽度對(duì)其面盤幼蟲存活和生長(zhǎng)的影響進(jìn)行了研究[9]。田永軍等[10]利用殼長(zhǎng)頻率性分析滑頂薄殼鳥蛤的生長(zhǎng)、成熟和產(chǎn)卵季節(jié)，Inoue 也對(duì)其產(chǎn)卵季節(jié)進(jìn)行相關(guān)生態(tài)學(xué)研究。季紅梅等[12]對(duì)加州扁鳥蛤微觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行了系統(tǒng)觀察，并利用分形分析方法對(duì)其微觀結(jié)構(gòu)與壓痕韌性的關(guān)系進(jìn)行了定量表征，曹學(xué)順等[13]對(duì)其體尺性狀與質(zhì)量性狀進(jìn)行了相關(guān)分析[15]，國(guó)外也有學(xué)者對(duì)其殼的生長(zhǎng)[14]和熱耐受性[15]進(jìn)行相關(guān)研究。但是，有關(guān)二者分子遺傳方面的研究卻很少。

簾蛤目為雙殼貝類中最大且最為多樣化的一個(gè)類群，目前已知2500種以上。由于種類特別繁多，僅僅依據(jù)殼型、小月面、放射肋等外部形態(tài)特征進(jìn)行種屬水平間形態(tài)學(xué)分類鑒定難度很大。因此需要以基因序列和核型為基礎(chǔ)的系統(tǒng)分類的方法。核型是動(dòng)物、植物、真菌在染色體水平上的表型，核型的研究和比較有助于對(duì)各個(gè)種、屬、科的親緣關(guān)系作出判斷，揭示核型的進(jìn)化過程和機(jī)制，孫振興等[16]以簾蛤目中的大竹蟶（Solen grandis）、紫石房蛤（Saxidomuspurpuratus）和中國(guó)蛤蜊（Mactrachinensis）的鰓組織為材料，注射植物血球凝集素（phytohaemagglutinin，PHA）和秋水仙素（Colchi-cine）處理，低滲作用后，利用滴片法和壓片法制片，對(duì)3種貝的染色體組進(jìn)行了研究，以期為貝類育種提供依據(jù)。其中，大竹蟶和紫石房蛤的染色體數(shù)目及核型均為國(guó)內(nèi)外首次報(bào)道；闕永華等[17]以四角蛤蜊（Mactra veneriformis）、文蛤（Meretrix meretrix）、日本鏡蛤（Dosinia japonica）和中國(guó)紫蛤（Sanguinolariachinensis）成體的鰓組織為材料，采用滴片空氣干燥法制作染色體標(biāo)本，吉姆薩染色，對(duì)四者染色體數(shù)目及核型進(jìn)行了探討。目前，中國(guó)對(duì)于雙殼類分子研究主要集中在經(jīng)濟(jì)種類上，為遺傳育種提供了理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)，但是核型研究方面的資料仍相對(duì)匱乏，很難從屬、科甚至目的層次上探討它們的系統(tǒng)演化關(guān)系[18]。而近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，基于基因序列測(cè)定的分子數(shù)據(jù)已被廣泛應(yīng)用在海洋貝類學(xué)、魚類學(xué)等領(lǐng)域中[19-23]。因?yàn)閺睦碚撋险f，兩個(gè)物種各自獨(dú)立地產(chǎn)生相同DNA序列是不可能的[22-23]。雖然兩者均屬于鳥蛤（Cardiumspp.），但兩者形態(tài)差異較大且目前的市場(chǎng)價(jià)值差異較大，滑頂薄殼鳥蛤生長(zhǎng)極快，營(yíng)養(yǎng)與經(jīng)濟(jì)價(jià)值最高，具有極大的增養(yǎng)殖發(fā)展?jié)摿?，而加州扁鳥蛤殼厚且不具有明顯的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，經(jīng)濟(jì)價(jià)值較低[24]。通過對(duì)DNA序列的精確測(cè)定，可以準(zhǔn)確地識(shí)別不同物種之間的親緣關(guān)系。若兩個(gè)物種的親緣關(guān)系極為接近，在理論上，它們之間存在雜交的可能性。若技術(shù)上可行，那么對(duì)于滑頂薄殼鳥蛤也可以考慮實(shí)施大規(guī)模的人工培育。

該實(shí)驗(yàn)通過對(duì)滑頂薄殼鳥蛤和加州扁鳥蛤形態(tài)測(cè)量與分析，提取16SrDNA序列對(duì)比，分別進(jìn)行堿基組成統(tǒng)計(jì)、同源性檢測(cè)，通過MEGA5.05采用NJ鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，所得數(shù)據(jù)為二者的分類系統(tǒng)發(fā)育和增養(yǎng)殖提供了數(shù)據(jù)和資料。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤樣品于大連灣 采集（見圖1），每種樣品各30個(gè)個(gè)體，均為鮮活貝類，用清水沖洗，備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

用游標(biāo)卡尺 測(cè)定殼長(zhǎng)（shelllength）、殼寬（shellwidth）和殼高（shellheight），用手術(shù)刀和手術(shù)剪解剖并分離閉殼肌后分別使用電子天平 稱量濕重（wet weight）、軟體部重（ediblepartweight）。將各數(shù)量性狀測(cè)定結(jié)果經(jīng)過統(tǒng)計(jì)整理計(jì)算平均值，獲得各個(gè)性狀的表現(xiàn)型統(tǒng)計(jì)量。

提取滑頂薄殼鳥蛤和加州扁鳥蛤的DNA，PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物送往生工生物工程公司（上海）進(jìn)行測(cè)序。利用DNAstar對(duì)比二者16S基因堿基組成，并采用MEGA5.05軟件，將二者的16S序列與從NCBI（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）檢索到的其他18種鳥蛤的16S序列進(jìn)行比對(duì)，使用NJ（Neigh-bor-Joining）鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，上述20種鳥蛤在NCBI登錄號(hào)見表1。

2結(jié)果與分析

2.1數(shù)量性狀結(jié)果與分析

滑頂薄殼鳥蛤的殼長(zhǎng)平均值為 68.61mm ，殼寬平均值為 44.63mm ，殼高平均值為 60.38mm ，濕重平均值為 55.02g ，軟體部重平均值為 34.58g ，出肉率為 62.85% （如表2所示）；加州扁鳥蛤的殼長(zhǎng)平均值為 47.00mm ，殼寬平均值為 27.36mm ，殼高平均值為 42.27mm ，濕重平均值為 20.98g ，軟體部重平均值為 11.52g ，出肉率為 54.99% 。加州扁鳥蛤的各數(shù)量性狀（殼寬、殼長(zhǎng)、殼高、濕重和軟體部重）均低于滑頂薄殼鳥蛤，出肉率也低于滑頂薄殼鳥蛤。

2.2 堿基對(duì)比

通過DNAstar軟件分析加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤的16S的堿基組成，結(jié)果如表2。從表中可以看出，加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤的16S片段長(zhǎng)度相近，分別為 482bp 和 490bp ，各堿基組成的百分比也近似；加州扁鳥蛤的堿基T和堿基G所占百分比高于滑頂薄殼鳥蛤，而堿基A和堿基C所占百分比低于滑頂薄殼鳥蛤，但兩者 A+T 所占百分比近似，分別為 57.89% 和 59.60% C+G 所占百分比近似，分別為 42.13% 和 40.41% （見表3）。

2.3 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

利用MEGA5.05軟件對(duì)加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤的16S序列以及從NCBI（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）上下載下來的其他18種鳥蛤的16S序列采用NJ（Neighbor-Joining）鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（其中Bootstrap 設(shè)為1000）。結(jié)果表明，加州扁鳥蛤和大籃鳥蛤互為姐妹分支，遺傳關(guān)系最近，并且兩者分類學(xué)同歸為扁鳥蛤?qū)?，此外加州扁鳥蛤和大籃鳥蛤與方舟尾鳥蛤（滑鳥蛤?qū)伲┚墼谕淮蠓种希哂休^近的親緣關(guān)系。相較而言，滑頂薄殼鳥蛤處于另一單獨(dú)的分支上，與薄殼鳥蛤（Fuluiaspp.）澳洲薄殼鳥蛤（Fuluiaaustralis）和波紋薄殼鳥蛤（Fulviaundatopicta）等薄殼鳥蛤?qū)俚奈锓N同源性較高外，還與黃邊糙鳥蛤（Acanthocardiaechinata）（糙鳥蛤?qū)伲┯H緣關(guān)系較近，與加州扁鳥蛤親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

Fig.2Construction of phylogenetic tree of Cardiidae based on neighbor-joining method

3討論

該研究中，對(duì)加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤的數(shù)量性狀進(jìn)行了測(cè)量分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，滑頂薄殼鳥蛤的各數(shù)量性狀（殼寬、殼長(zhǎng)、殼高、濕重和軟體部重）均大于加州扁鳥蛤。經(jīng)計(jì)算，滑頂薄殼鳥蛤的出肉率為 62.85% ，高于加州扁鳥蛤的出肉率 54.99% 。雖然據(jù)文獻(xiàn)記載兩者同屬于鳥蛤?qū)?，但兩者形態(tài)差異較大且目前的市場(chǎng)價(jià)值差異較大，滑頂薄殼鳥蛤生長(zhǎng)極快，營(yíng)養(yǎng)與經(jīng)濟(jì)價(jià)值最高，具有極大的增養(yǎng)殖發(fā)展?jié)摿?，而加州扁鳥蛤殼厚且不具有明顯的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，經(jīng)濟(jì)價(jià)值較低。

通過PCR擴(kuò)增DNA目的片段來鑒別物種已逐漸成為分類的重要方法，目前已廣泛使用于海洋貝類學(xué)、魚類學(xué)等領(lǐng)域。一般經(jīng)過序列比對(duì)后同源性高的可以認(rèn)為是同一個(gè)物種或同一個(gè)物種下的兩個(gè)亞種。該次實(shí)驗(yàn)證明，在鳥尾蛤科的16S序列上，加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤的親緣性較遠(yuǎn)，且分類學(xué)上，加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤并不是同一屬。加州扁鳥蛤與同屬的大籃鳥蛤非同屬的方舟尾鳥蛤親緣關(guān)系較近；滑頂薄殼鳥蛤則與同屬的薄殼鳥蛤、澳洲薄殼鳥蛤、波紋薄殼鳥蛤等關(guān)系更近。該研究為加州扁鳥蛤和滑頂薄殼鳥蛤的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系以及增養(yǎng)殖提供一定的理論依據(jù)。

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Genetic relationship between Fulvia mutica and Clinocardium californiense on 16S rDNA gene sequences

XIE Yaoyu1，JIA Menghao’，CAI Linxuan1，TIAN Ying1，2 （1.KeyLaboratoryofMaricultureamp;tockEancementinNorthhinaSea，MinistryofAgricutureanduralAfirs，DaliaOcean Universityn，ongn；efsheahsiute，nellean，on

Abstract：This study measured the morphological and weight traits（shell length，shell width，shell height，wet weight，and softtissue weight）ofFulvia muticaand Clinocardium californiense，and investigatedtherelationships amongtheir quantitative traits.The 16S rDNA gene sequences ofboth species were obtained using PCR amplificationtechnology．Additionally，16SrDNA sequencesof17other species inthe familyCardiidae were retrieved from NCBI.A phylogenetic treeof these 19 cockle species was constructed using the Neighbor-Joining（NJ）method in MEGA7.O.Theresultsshowed thatallquantitative traits（shellwidth，shellength，shellheight，wet weight，and soft tissue weight）of Clinocardiumcaliforniense were lowerthanthoseofFulviamutica，and itsmeat yield rate was also lower.The16S fragmentlengths of ClinocardiumcalifornienseandFulvia mutica were similar（482bp and 490 bp，respectively），with comparablenucleotide composition percentages：Clinocardium californiensehad A（29.05%） ，T（ 28.84% ），C（15. 56% ），and G （26.57% ），while Fulvia mutica had A （29. 80% ）， 1 Γ（29.80% ）， C（15.31%） ，and G（25.10%） .The phylogenetic tree based on 16S sequences revealed a distant genetic relationship between Clinocardium californiense and Fulvia mutica.Clinocardium californiense was closely relatedto Clinocardium nuttaliiandLaevicardiumoblongum，whereas Fulvia mutica clustered closely with Fulvia aperta，F(xiàn)ulvia australis，and Fulvia undatopicta.

Keywords：Fulvia mutica；Clinocardium californiense；morphometry；16S rDNA gene