摘要：本試驗以七八成熟三華李果實為試材，采用純凈水（對照）和2.0 mmol/L SNP（硝普鈉）溶液（SNP處理）對其進行浸泡處理，研究SNP處理對三華李果實貯藏品質(zhì)、抗氧化酶活性和花青素積累的影響。結(jié)果表明，外源SNP處理能顯著延緩三華李果實軟化，有效抑制果實可滴定酸、可溶性固形物、抗壞血酸含量下降，顯著抑制Fv/Fm（PSⅡ最大光能轉(zhuǎn)化效率）下降和丙二醛積累，提高過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）活性；SNP處理能顯著提高PsCHS和PsANS基因的表達水平，從而促進三華李采后果實進一步積累花青素。綜之，外源SNP處理能有效保持三華李果實采后貯藏品質(zhì)及抗氧化能力，這可為三華李果實的常溫貯藏保鮮提供技術依據(jù)。

關鍵詞：硝普鈉（SNP）；三華李；果實；貯藏品質(zhì)

中圖分類號：S662.3 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2025） 03-0081-07

三華李（Prunus salicina Lindl. cv. Sanhua），又名大蜜李、雞麻李等，為薔薇科李屬植物。三華李因原產(chǎn)于廣東翁源縣三華鎮(zhèn)而得名，至今已有近500年的栽培歷史，是我國華南地區(qū)特色水果。成熟的三華李果實呈紅色或深紫色，富含花青素和多酚等抗氧化活性物質(zhì)。三華李為呼吸躍變型果實，成熟于6月至7月，由于采收時氣溫較高，采后代謝旺盛、貨架期較短，導致三華李貯藏保鮮較為困難。同時，三華李冷藏技術并不成熟，貯藏溫度不當易導致三華李出現(xiàn)“返青”現(xiàn)象。因此，研發(fā)適合三華李果實的采后貯藏保鮮技術具有重要意義。

三華李不耐貯藏，果實后熟衰老過程中容易出現(xiàn)軟化、營養(yǎng)物質(zhì)損耗和風味劣變等突出問題。海金萍等研究發(fā)現(xiàn)，利用復合膜包裹三華李果實能顯著延緩貯藏過程中果實軟化，抑制Vc含量和可溶性固形物（TSS）含量下降，延長其貯藏時間。殼聚糖涂膜處理可提高三華李果實中多酚和黃酮的含量，抑制多酚氧化酶活性，延緩花青素的降解。然而，涂膜保鮮成本較高且操作繁瑣，研發(fā)更易用的保鮮處理技術很有必要。一氧化氮（nitricoxide，NO）是廣泛存在于植物體內(nèi)的一種多功能信號分子，參與植物生長和代謝等生理過程。硝普鈉（sodium nitroprusside，SNP）是NO的載體化合物，有研究表明使用外源SNP處理可以顯著延緩果實的成熟與衰老進程，延長果實貯藏期。以往研究發(fā)現(xiàn)，NO具有延緩成熟和衰老的特性，有效降低果蔬呼吸速率、乙烯生成、采后病害發(fā)生率和花青素降解。外源SNP延緩園藝產(chǎn)品采后品質(zhì)劣變已在香蕉、芒果等躍變型水果以及橘子、草莓等非躍變型水果中得到證實。外源SNP處理哈密瓜和桃等水果可顯著降低O-·2和H2O2的生成，提高過氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、過氧化氫酶（CAT）等抗氧化酶活性，促進抗壞血酸和酚類物質(zhì)的積累。同時，研究發(fā)現(xiàn)，NO可以通過改變果實中PPO活性位點的結(jié)構(gòu)來抑制PPO活性，提高花青素合成途徑中關鍵酶的活性，促進黃酮和花青素的合成與積累。但目前僅有少量關于三華李果實保鮮技術的報道，而有關外源SNP處理對三華李果實貯藏品質(zhì)影響方面尚未有系統(tǒng)研究。

因此，本試驗以七八成熟三華李果實為試材，研究常溫條件下外源SNP對三華李果實貯藏過程中理化性質(zhì)、抗氧化物酶活性、花青素合成關鍵酶基因表達的影響，以期為外源SNP在三華李和其他果蔬保鮮中的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與處理

三華李果實采摘于廣西賀州市賀街鎮(zhèn)三華李驛站果園，于2021年6月1日采樣。選取七八成熟、果形均一、沒有病害和機械損傷的三華李果實立即運回實驗室。前期預試篩選結(jié)果顯示，2.0mmol/L SNP溶液浸泡處理的效果最好，故選擇該濃度SNP進行后續(xù)試驗。三華李果實首先經(jīng)5mg/mL次氯酸鈉溶液浸泡消毒1 min，自然晾干后分為兩組，分別在純凈水（對照）和2.0 mmol/LSNP溶液中浸泡5 min，撈出自然晾干于25℃條件下貯藏。每3d取樣一次，共取6次。取樣當天測定生理指標，并另外取樣用液氮速凍放入-80℃冰箱保存，用于酶活性和基因表達分析。

1.2 測定指標及方法

1.2.1 三華李果實品質(zhì)指標測定

果皮和果肉硬度采用TA.XT.Plus質(zhì)構(gòu)儀穿刺法測定：果肉組織可滴定酸含量采用NaOH滴定法測定：果實可溶性固形物（TSS）含量采用PAL-1型便攜式折射儀測定；果肉組織丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸法測定；抗壞血酸（ASA）含量參考任亞琳等的方法測定：果肉組織花青素含量采用pH示差法測定。

1.2.2 最大光能轉(zhuǎn)化效率（Fv/Fm）測定

三華李果實暗處理10 min，之后用OS-30p+便攜式葉綠素熒光儀測定果皮Fv/Fm值，每個處理測6個重復。

1.2.3 POD和CAT活性測定

三華李果實POD、CAT活性測定參照曹建康等[16]的方法：分別稱取三華李果實5.0 g于50 mL離心管中，加入15 mL提取緩沖液，后在冰上靜置20 min，于4℃下12 000 r/min離心20 min，取上清液用于酶活性測定。

1.2.4 花青素合成關鍵結(jié)構(gòu)基因的測定

利用RT-qPCR分析三華李PsCHS、PsANS基因在貯藏過程中的表達水平變化，特異引物設計參考許薇等‘，’的方法。采用三步法進行RT-qPCR反應：95℃3 min;95 0C 10 s，55℃30 s，72℃40 s，循環(huán)40次；95℃10 s，65℃5s，95℃Ss。根據(jù)2-ΔΔCt法計算三華李PsCHS、PsANS基因在不同貯藏時間的相對表達量，設置3次重復。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 26軟件對數(shù)據(jù)進行顯著性分析，用鄧肯氏法進行多重比較，用Origin 2018軟件分析數(shù)據(jù)和作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源SNP處理對三華李果實硬度的影響

果實硬度直接影響消費者的口感和對新鮮程度的判斷。由圖l可知，三華李果皮硬度和果肉硬度在貯藏過程中均呈下降趨勢。其中，貯藏0～9d內(nèi)，對照組與SNP處理組三華李果皮硬度和果肉硬度下降趨勢較平緩且無顯著性差異：貯藏9d后，果皮硬度和果肉硬度均快速下降，且SNP處理組顯著高于對照組：貯藏15 d時，對照組與SNP處理組果皮硬度和果肉硬度比Od時分別降低58.05%、36.11%和97.72%、62. 04%。表明，外源SNP處理能夠在貯藏后期顯著延緩三華李的軟化，保持較高的果實硬度。

2.2 外源SNP處理對三華李果實可滴定酸含量的影響

有機酸是果實中主要的風味物質(zhì)，也是衡量其貯藏品質(zhì)的重要指標。由圖2可知，三華李果肉可滴定酸含量在貯藏過程中呈下降趨勢。其中，貯藏0-6 d內(nèi)，對照組的可滴定酸含量與SNP處理組無顯著差異：貯藏9d之后，SNP處理組的可滴定酸含量顯著高于對照組，SNP處理組和對照組的可滴定酸含量比0d時分別降低22.22％和32.04％：貯藏15 d時，SNP處理組的可滴定酸含量是對照組的1.32倍。表明，外源SNP處理能夠在貯藏后期顯著延緩三華李果實可滴定酸的消耗。

2.3 外源SNP處理對三華李果實TSS含量的影響

TSS是衡量果實貯藏品質(zhì)的重要指標之一，影響果實的口感和滋味。由圖3可知，三華李果實TSS含量在貯藏過程中呈先上升后下降的趨勢。其中，貯藏0-6 d內(nèi)，對照組的TSS含量高于SNP處理組（P＞0.05），貯藏6d時對照組TSS含量達到最高值，為10.69%；貯藏9d之后，SNP處理組的TSS含量顯著高于對照組：貯藏15 d時，SNP處理組的TSS含量是對照組的1.22倍。表明，外源SNP處理能夠在貯藏后期顯著延緩三華李果實TSS含量的下降。

2.4 外源SNP處理對三華李果實抗壞血酸含量的影響

由圖4可知，在整個貯藏期間，三華李果實抗壞血酸含量呈下降趨勢，且SNP處理組的抗壞血酸含量一直高于對照組。貯藏6d后，SNP處理組三華李果實抗壞血酸含量顯著高于對照組：貯藏15 d時，對照組和SNP處理組果實抗壞血酸含量比Od時分別降低46.14％和29.83％。表明，外源SNP處理能夠抑制三華李采后果實貯藏過程中抗壞血酸含量的下降，保持較好的貯藏品質(zhì)。

2.5 外源SNP處理對三華李果實丙二醛含量的影響

丙二醛是植物衰老過程中膜脂發(fā)生過氧化作用的最終分解產(chǎn)物，其含量越高，表示細胞膜受損越嚴重。由圖5可知，三華李果肉組織丙二醛含量隨著貯藏時間的延長呈上升趨勢。其中，貯藏0-6 d間，SNP處理組和對照組的丙二醛含量上升趨勢平緩且無顯著差異：貯藏6d之后，兩組的丙二醛含量均快速增加，且對照組顯著高于SNP處理組：貯藏15 d時，對照組和SNP處理組果肉組織丙二醛含量比0d時分別增加4.80倍和2.74倍。表明，外源SNP處理能夠在貯藏后期顯著抑制三華李果實丙二醛的積累。

2.6 外源SNP處理對三華李果皮Fv/Fm值的影響

葉綠體熒光參數(shù)Fv/Fm（PSⅡ最大光能轉(zhuǎn)化效率）的大小在一定程度上反映出葉綠體膜結(jié)構(gòu)的完整性和組織的衰老狀態(tài)。由圖6可知，貯藏過程中三華李果皮Fv/Fm值呈下降趨勢，但SNP處理組高于對照組，且在貯藏6d后差異顯著。貯藏6d時，對照組和SNP處理組的果皮Fv/Fm值比0d時分別降低21.52%和11.39%：貯藏15 d時，SNP處理果皮Fv/Fm值下降到0.62，是對照組的1.2倍。表明，外源SNP處理能夠在貯藏后期顯著抑制三華李果皮Fv/Fm值的下降。

2.7 外源SNP處理對三華李果實抗氧化酶活性的影響

由圖7可知，整個貯藏期間，三華李果實POD活性呈先上升后下降的趨勢。其中，貯藏6d時，對照組果實POD活性達到最高，之后快速下降，且自此SNP處理組果實POD活性一直顯著高于對照組，12 d時其POD活性達到最高，為87.7 U/g FW，是對照組的2.3倍。與POD活性變化趨勢相似，整個貯藏期間三華李果實CAT活性也呈先上升后下降的趨勢，且SNP處理組果實CAT活性一直高于對照組。其中，貯藏6d時，對照組果實CAT活性達到最高，之后快速下降：SNP處理組果實CAT活性貯藏9d時達到最高，是對照組的1.39倍，且之后始終顯著高于對照。表明，外源SNP處理能夠在貯藏后期顯著抑制三華李果實POD、CAT活性下降，使其保持較高的抗氧化能力。

2.8 外源SNP處理對三華李果肉花青素含量的影響

花青素是三華李果實主要的呈色物質(zhì)。由圖8可知，在貯藏過程中三華李果肉花青素含量均呈上升趨勢，且SNP處理組果肉花青素含量在貯藏6d后顯著高于對照組。貯藏6d時，SNP處理組果肉花青素含量是對照組的2.25倍：貯藏15 d時，SNP處理組和對照組花青素含量比0d時分別增加4.25倍和1.75倍。表明，外源SNP處理能夠在貯藏過程中顯著提高三華李果肉花青素含量，保持果實較好的色澤。

2.9 外源SNP處理對三華李果實花青素合成關鍵結(jié)構(gòu)基因表達的影響

由圖9可知，三華李果實PsCHS基因相對表達量在整個貯藏期間均呈先上升后下降的趨勢，且SNP處理組顯著高于對照組。貯藏9d時，SNP處理組PsCHS相對表達量最高，是對照組的3倍：貯藏12 d時對照組PsCHS相對表達量達到最高，比Od時增加28倍。三華李PsANS基因相對表達量在整個貯藏期間均呈上升趨勢。貯藏6d之后，SNP處理組PsANS相對表達量顯著高于對照組：貯藏15 d時，SNP處理組和對照組PsANS相對表達量均最高，比0d時分別增加21倍和12倍。表明，外源SNP處理能夠顯著提高三華李果實貯藏過程中PsCHS和PsANS基因的表達水平，促進果實中花青素的合成與積累。

3 討論與結(jié)論

三華李果實采后常溫保鮮期短，低溫貯藏則易出現(xiàn)“返青”現(xiàn)象，研發(fā)更有針對性的保鮮處理技術非常必要。NO作為一種植物體內(nèi)的信號分子，在植物生長發(fā)育、成熟衰老、生物和非生物脅迫過程中均起到重要作用。外源NO供體SNP已應用在多種園藝產(chǎn)品的保鮮研究中，但其對三華李的保鮮效果尚不清楚。本研究結(jié)果表明，外源SNP處理可有效延緩貯藏期間三華李果皮硬度和果肉硬度的下降，降低可滴定酸、TSS和抗壞血酸含量的消耗，這與利用SNP處理草莓和李等果實的研究結(jié)果一致。任艷芳等發(fā)現(xiàn)，0.25 mmol/L SNP處理有效延緩枇杷果實硬度的下降，維持果實較好的營養(yǎng)品質(zhì)。MDA含量和Fv/Fm值均可用于表征植物細胞膜結(jié)構(gòu)的完整性，是衡量果蔬衰老的重要指標。本研究發(fā)現(xiàn)外源SNP處理能顯著抑制三華李果實丙二醛的積累和Fv/Fm值的下降，表明其具有顯著延緩三華李果實衰老的作用。

植物成熟衰老中發(fā)生代謝失衡可能導致活性氧（ROS）的積累增加，POD和CAT等抗氧化酶在植物酶促抗氧化系統(tǒng)中清除ROS發(fā)揮著重要作用。以往研究發(fā)現(xiàn)，NO作為信號分子，可通過增加抗氧化物含量和抗氧化酶活性來維持細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)并調(diào)節(jié)ROS的平衡。本研究發(fā)現(xiàn)，SNP處理可顯著提高三華李果實采后貯藏過程中的POD和CAT活性，這與SNP處理哈密瓜和藍莓等果實的研究結(jié)果一致。在植物液泡中，花青素作為酚類化合物，在非酶促抗氧化系統(tǒng)中清除ROS能力比抗壞血酸及其他多酚化合物更強。一氧化氮（NO）、過氧化氫（H2O2）和乙烯（ETH）等代謝產(chǎn)物作為植物中的信號分子，通過復雜的信號通路網(wǎng)絡傳遞到細胞核中，調(diào)控防御基因的轉(zhuǎn)錄水平。本研究中，外源SNP處理顯著上調(diào)了花青素合成途徑的PsCHS和PsANS基因的表達水平，從而促進花青素的合成與積累。以往研究發(fā)現(xiàn)，SNP處理可以通過上調(diào)CHI、F3'H和ANS的表達來抑制紅毛丹果實花青素的降解，以延緩果實的褐變速率。同時，王俊文研究發(fā)現(xiàn)NO處理同時增強樹莓果實中苯丙烷代謝相關酶（PAL、C4H、4CL）活性和花青素代謝相關酶（DFR、ANS、UFGT）活性，提高樹莓花青素的積累速度。因此，外源SNP作為信號分子傳導到細胞核中，激活花青素合成關鍵結(jié)構(gòu)基因的表達，促進三華李果實花青素的合成與積累，然而調(diào)控結(jié)構(gòu)基因上游的轉(zhuǎn)錄因子能否響應SNP信號分子還需進一步研究。

綜上所述，外源SNP處理有效延緩了貯藏過程中三華李果實的軟化，維持較高的可滴定酸、TSS和抗壞血酸含量，抑制丙二醛含量的積累，同時保持較高的POD、CAT活性，上調(diào)PsCHS和PsANS基因表達水平，從而促進花青素的合成與積累。因此，外源SNP處理能較好地保持三華李采后果實的貯藏品質(zhì)和抗氧化活性，在三華李保鮮方面有較好的應用潛力。

基金項目：國家自然科學基金項目（32360785）；廣西自然科學基金項目（2023JJA130423）；賀州學院博士教授科研啟動基金項目（2023JSQD03， HZUBS202106）