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        青花菜自交不親和相關(guān)內(nèi)參基因篩選與應(yīng)用

        2025-03-30 00:00:00李維歡吳小媚武志健陳芳珍王軍偉黃科
        江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2025年2期

        摘要:為研究青花菜自交不親和反應(yīng)過程中最適內(nèi)參基因與自交不親和相關(guān)基因的表達(dá),以青花菜自交不親和系BOP04-28-16開花期分別取不同器官、花的不同組織部位、不同發(fā)育時期的花蕾和不同授粉時期柱頭4個組合為試驗材料,利用實時熒光定量PCR技術(shù)及3個RT-qPCR分析軟件GeNorm、NormFinder和BestKeeper檢測了17個候選內(nèi)參基因分別在4個組合中的表達(dá)水平。結(jié)果表明,在不同組織部位中的穩(wěn)定內(nèi)參基因為UBC7、Actin-1、UBC9;在花的不同部位中穩(wěn)定的內(nèi)參基因為DNAJ、Tubα-3;在不同發(fā)育時期花蕾中穩(wěn)定的內(nèi)參基因為Actin-7、UBC7、Actin-3;在4個不同授粉時期柱頭中穩(wěn)定的內(nèi)參基因為Actin-7、His。綜合分析認(rèn)為,UBC7和Actin-7為青花菜SI中最適合的內(nèi)參基因組合,并以其分別分析青花菜柱頭S位點受體激酶基因(SRK)在花的不同組織部位和不同授粉時期柱頭的表達(dá)水平進(jìn)行驗證篩選的可靠性,結(jié)果顯示SRK基因在柱頭中特異表達(dá),并且與柱頭的發(fā)育成熟性成正相關(guān)。研究結(jié)果為開展青花菜自交不親和相關(guān)基因的表達(dá)特征分析提供了穩(wěn)定的內(nèi)參基因,為后續(xù)開展關(guān)鍵基因的挖掘、利用以及自交不親和分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)解析奠定了基礎(chǔ)。

        關(guān)鍵詞:青花菜;自交不親和;內(nèi)參基因;SRK

        中圖分類號:S635.301文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

        文章編號:1002-1302(2025)02-0034-10

        青花菜(Brassica oleracea var. italica)別稱西藍(lán)花,是十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的變種,原產(chǎn)于地中海東部沿岸地區(qū),營養(yǎng)價值十分豐富,被譽(yù)為“蔬菜皇冠”[1-2]。隨著人們生活水平的日益提高,對青花菜產(chǎn)品的需求逐年增加。近10年來,我國青花菜播種面積已超過10萬hm2,年產(chǎn)量約400萬t,這在保持我國蔬菜周年供應(yīng)和出口創(chuàng)匯方面起著關(guān)鍵作用[3]。雜種優(yōu)勢是提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)的重要途徑,開展青花菜雜種優(yōu)勢利用的研究,選育優(yōu)質(zhì)雜交種,是當(dāng)前青花菜育種的主攻方向,其中利用自交不親和系來生產(chǎn)雜種1代則是青花菜等十字花科作物雜種優(yōu)勢利用的重中之重[4-5]。

        自交不親和性(self-incompatibility,SI)是指植物能產(chǎn)生功能正常的有生育能力的雌雄配子,但是自花授粉后不能結(jié)籽的現(xiàn)象[6-8]。青花菜屬于嚴(yán)重自交不親和作物,在青花菜親本繁種過程中需要人工剝蕾授粉,極大地增加了種子生產(chǎn)的成本和勞動強(qiáng)度[4-6]。隨著我國對青花菜自主品種選育的日益重視,自交不親和造成的青花菜親本繁育問題越發(fā)制約青花菜育種進(jìn)程,開展青花菜SI的相關(guān)分子機(jī)制研究尤為重要[4-7]。蕓薹屬植物自交不親和方面的研究發(fā)現(xiàn),自交不親和反應(yīng)的發(fā)生與雌蕊柱頭組織的生長發(fā)育水平有著極為密切的關(guān)系[8-11]。現(xiàn)有關(guān)于自交不親和反應(yīng)的報道中重要基因主要包括2個方面:一方面是雌性識別因子S位點受體激酶(S-locus receptor kinase,SRK)基因[12],另一方面是雄性識別因子S位點富半胱氨酸蛋白(S-locus cysteine-rich protein,SCR)基因和S位點蛋白11(S-locus protein 11,SP11)基因[13]。有報道表明,S位點糖蛋白(S-locus glycoprotein,SLG)基因和SRK等基因在柱頭組織特異性表達(dá),并且隨著柱頭組織的發(fā)育成熟表達(dá)量會顯著上調(diào)[13-18]。因此準(zhǔn)確分析青花菜自交不親和相關(guān)基因在不同組織及柱頭不同發(fā)育階段的表達(dá)模式,對闡述相關(guān)基因在青花菜自交不親和及柱頭發(fā)育方面的功能是十分重要的。

        實時熒光定量PCR(RT-qPCR)是一種用于評估基因表達(dá)量的通用技術(shù),具有高重復(fù)性和高通量性[19-20]。大量研究表明,內(nèi)參基因的選擇不是固定不變的,在試驗材料及試驗條件不同的情況下研究者所選擇的內(nèi)參基因也是有所不同的,選擇的內(nèi)參基因是否適合可極大程度地影響RT-qPCR分析結(jié)果的準(zhǔn)確性[21-24]。具體則需要根據(jù)不同物種、不同試驗條件、不同組織器官和不同生長發(fā)育階段等因素分別進(jìn)行篩選和驗證內(nèi)參基因的可行性[20]。已有研究結(jié)果揭示了TUB4、DNAJ、UBQ和GAPDH等內(nèi)參基因涉及生物體的基本生化反應(yīng)過程(如中間代謝、蛋白翻譯等),并且被普遍應(yīng)用于各種植物之間的基因表達(dá)研究[25-28]。然而多數(shù)報道指出內(nèi)參基因的選擇具有相對性和非穩(wěn)定性[24-28]。在十字花科蔬菜中,已有的研究顯示甘藍(lán)中適用的內(nèi)參基因為Actin、Tip41和Tub-α6等,花椰菜中為SKIP16、ACT等[29-33]。但是,筆者所在課題組前期的研究顯示,適用于甘藍(lán)的內(nèi)參基因不適用于青花菜自交不親和相關(guān)基因的定量表達(dá)分析,因此推測青花菜自交不親和相關(guān)內(nèi)參基因的選擇與物種或基因型密切相關(guān)[29-34]?;诖耍狙芯吭谇嗷ú俗越徊挥H和識別反應(yīng)中系統(tǒng)地對候選內(nèi)參基因進(jìn)行篩選和驗證。

        本研究根據(jù)已報道的內(nèi)參基因和筆者所在課題組已建立的青花菜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,選取17個常見候選內(nèi)參基因[21-34],使用GeNorm、NormFinder和BestKeeper等3個內(nèi)參基因篩選軟件進(jìn)行分析,比較了17個候選內(nèi)參基因在4個組合(青花菜不同器官、不同時期花蕾、花不同組織部位、不同授粉時期柱頭)中的表達(dá)情況[35-37]。利用篩選得到的內(nèi)參基因分析了青花菜自交不親和反應(yīng)中關(guān)鍵基因SRK的表達(dá)模式,驗證了最佳內(nèi)參基因的可靠性。研究結(jié)果以期為闡明SI相關(guān)基因的表達(dá)模式以及揭示SI的分子機(jī)制研究提供參考,同時為自交不親和的利用與克服提供理論基礎(chǔ)。

        1材料與方法

        1.1試驗材料

        試驗材料為筆者所在課題組保存的青花菜高代自交系BOP04-28-16,材料于2022年10月定植于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)金山基地。在次年4月青花菜開花期,分別取不同器官(根、莖、葉),花的不同組織部位(花梗、花托、萼片、花瓣、花藥、花絲、花期柱頭、子房),不同發(fā)育時期的花蕾(小于5 mm、大于 5 mm、完全花),不同授粉時期柱頭(蕾期柱頭、花期柱頭、自花授粉10 min柱頭、自花授粉30 min柱頭)為樣品。

        1.2試驗方法

        1.2.1試驗材料總RNA的提取和cDNA的合成

        所有樣品的總RNA提取參照湖南艾科瑞公司提供的RNA提取試劑盒的說明書進(jìn)行。使用微量分光光度計對RNA的濃度與純度進(jìn)行檢測,最后使用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA的完整性。cDNA的合成參照湖南艾科瑞公司的Evo M-MLV RT Premix for qPCR反轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明書進(jìn)行。

        1.2.2候選內(nèi)參基因引物設(shè)計

        在OligoArchitectTM Pyimer and probe Design網(wǎng)頁分別設(shè)計用于RT-qPCR的Actin-1、Actin-2、Actin-3、Actin-7、Tubα-6、TUBβ-4、UBC7、UBC9、UBQ、UKN1、CYP、DNAJ、EFα、EFβ、GAPDH、His、Tubα-3共17個候選內(nèi)參基因及SRK基因引物。引物相關(guān)信息見表1。

        1.2.3候選內(nèi)參基因片段的PCR擴(kuò)增

        以cDNA為模版, 利用所設(shè)計的候選內(nèi)參基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件參照試劑盒MegaFi Fidelity 2×PCR MasterMix說明書進(jìn)行,PCR產(chǎn)物最后使用1.5%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,并分析產(chǎn)物大小,確定引物特異性。

        1.2.4RT-qPCR分析

        RT-qPCR分析包括候選內(nèi)參基因和SRK基因2個部分,SRK基因的RT-qPCR分析基于篩選獲得的內(nèi)參基因進(jìn)行開展。RT-qPCR 分析操作參照湖南艾科瑞公司的 SYBR Green Pro Taq HS預(yù)混型qPCR試劑盒說明書進(jìn)行。每個樣品進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。

        1.2.5數(shù)據(jù)分析

        候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper等3款軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析[35-37]。GeNorm和NormFinder軟件需要輸入2-ΔΔCT值,即將Cq值轉(zhuǎn)換為相對表達(dá)量進(jìn)行分析;BestKeeper軟件則是以輸入原始數(shù)據(jù)(Cq值)分析[38]。3款軟件最后都是根據(jù)分析結(jié)果對各候選基因的穩(wěn)定性進(jìn)行排名,篩選出最適內(nèi)參基因。分析結(jié)果使用LightCycler"96 SW 1.1軟件、Minitab Statistical Software軟件、Microsoft Excel軟件、Photoshop CS5 Portable 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及作圖。

        2結(jié)果與分析

        2.1青花菜花蕾、柱頭及不同組織部位總RNA提取

        分別提取不同器官(根、莖、葉),花的不同組織部位(花梗、花托、萼片、花瓣、花藥、花絲、花期柱頭、子房),不同發(fā)育時期的花蕾(小于5 mm、大于 5 mm、完全花),不同授粉時期柱頭(蕾期柱頭、花期柱頭、自花授粉10 min柱頭、自花授粉30 min柱頭)的總RNA。如圖1瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果顯示,所提取柱頭總RNA的18S條帶及28S條帶清晰,未發(fā)現(xiàn)明顯降解現(xiàn)象,適用于后續(xù)試驗。

        2.2候選內(nèi)參基因的PCR擴(kuò)增分析

        采用所提取葉片總RNA通過反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后,以葉片cDNA為模板對所設(shè)計的17對候選內(nèi)參基因引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增,最后利用1.5%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,結(jié)果(圖2)顯示所設(shè)計候選內(nèi)參基因引物擴(kuò)增出的條帶清晰可見,并且單一無雜帶,適用于RT-qPCR的分析。

        2.3候選內(nèi)參基因的RT-qPCR表達(dá)分析

        分別對17個候選內(nèi)參基因進(jìn)行RT-qPCR檢測,結(jié)果顯示在所有樣品中,17個候選內(nèi)參基因的熔解曲線峰值明顯且單一,且擴(kuò)增曲線良好,可以滿足RT-qPCR的要求。候選內(nèi)參基因的表達(dá)量用Cq值表示,Cq值與基因的表達(dá)量成負(fù)相關(guān),即Cq值越大,表達(dá)量越小。如圖3所示,內(nèi)參基因的Cq值在13~27之間,整體上UBC9的表達(dá)量較低(高Cq值),而EFα表達(dá)量較高(低Cq值)。大多數(shù)候選內(nèi)參基因的表達(dá)量Cq值分布比較集中,特別是Actin-1、Actin-7、UBC7等,說明其表達(dá)較為穩(wěn)定。

        2.4候選內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性的統(tǒng)計分析

        2.4.1GeNorm軟件分析

        GeNorm軟件判斷標(biāo)準(zhǔn):表達(dá)相對穩(wěn)定的內(nèi)參基因其平均表達(dá)穩(wěn)定指數(shù)M值小于1.5,且M值越小,表達(dá)越穩(wěn)定,反之則表達(dá)不穩(wěn)定[38]。圖4-a中的結(jié)果表明,在青花菜不同器官中Actin-1、Actin-2是表達(dá)較為穩(wěn)定的內(nèi)參基因;在花的不同組織部位中EFα和EFβ是表達(dá)較為穩(wěn)定的內(nèi)參基因;在不同發(fā)育時期花蕾中Actin-7和UBC7是表達(dá)較為穩(wěn)定的內(nèi)參基因;在不同授粉時期柱頭中Actin-7和UKN1是表達(dá)較為穩(wěn)定的內(nèi)參基因。GeNorm軟件可以通過計算出的配對變異值Vn/Vn+1來選擇最適內(nèi)參基因數(shù)目,判定標(biāo)準(zhǔn)為當(dāng)Vn/Vn+1lt;0.15時,則最合適內(nèi)參基因的數(shù)量是n個,反之則需要n+1個[38]。圖5中結(jié)果顯示,花的不同組織部位組合的V2/V3比值小于0.15,表明該組合最適內(nèi)參基因的數(shù)目為2個。

        2.4.2NormFinder軟件分析

        NormFinder軟件計算原理與GeNorm軟件相似,但該軟件只能篩選出一個最合適的內(nèi)參基因[38]。由表2可知,NormFinder軟件得出在不同組織部位中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因是UBC9;在花的不同部位中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因是Actin-1;在不同發(fā)育時期花蕾中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因為Actin-7;在不同授粉時期柱頭中最穩(wěn)定的內(nèi)參基因為UBC7。

        2.4.3BestKeeper軟件分析

        BestKeeper軟件分析判定原則為相關(guān)系數(shù)越大、標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)越小、內(nèi)參基因穩(wěn)定性越好,反之,穩(wěn)定性越差;當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)偏差>1時,則該內(nèi)參基因表達(dá)不穩(wěn)定[38]。此軟件分析17個候選基因穩(wěn)定性結(jié)果為在不同組織部位中表達(dá)較為穩(wěn)定的是Actin-3和UBC9(表3);在花的不同部位中表達(dá)較為穩(wěn)定的是Actin-3和DNAJ(表4),有7個基因: UKN1、UBC9、UBQ、EFβ、TUBβ-4、Tubα-6、GAPDH,不符合內(nèi)參基因穩(wěn)定性要求,即標(biāo)準(zhǔn)偏差大于1;在不同發(fā)育時期的花蕾中表達(dá)較為穩(wěn)定的是His和UBQ(表5);在不同授粉時期柱頭中表達(dá)較為穩(wěn)定的是DNAJ和Tubα-6(表6),有2個基因GAPDH和UBQ不符合內(nèi)參基因穩(wěn)定性要求。

        綜合分析顯示,GeNorm軟件和NormFinder軟件分析結(jié)果相近,最穩(wěn)定的基因組合為UBC7和Actin-7。BestKeeper軟件分析結(jié)果稍有不同,表達(dá)穩(wěn)定的內(nèi)參基因為Actin-3和DNAJ,但UBC7排名也僅次于最優(yōu)選。3款軟件中也得到一致的最差結(jié)果:GAPDH和Actin-2,說明其最不適合作為青花菜SI的內(nèi)參基因。綜合3款軟件的分析結(jié)果,認(rèn)為UBC7和Actin-7為青花菜SI中最適合內(nèi)參基因組合。

        2.5SRK在不同組織和不同發(fā)育時期柱頭的表達(dá)分析

        SRK等基因在柱頭組織特異性表達(dá),并且會隨著柱頭組織的發(fā)育成熟表達(dá)量顯著上調(diào)[39-41]。因此為驗證篩選到的內(nèi)參基因的可行性, 筆者所在課題組對SRK基因在不同組織和不同發(fā)育時期柱頭中的表達(dá)進(jìn)行了分析。當(dāng)以穩(wěn)定內(nèi)參基因Actin-7分析SRK的表達(dá)時,結(jié)果顯示SRK在柱頭組織中特異表達(dá),且表達(dá)量與柱頭熟性成正相關(guān),當(dāng)以UBC7作為內(nèi)參基因時,SRK表現(xiàn)出相似的表達(dá)模式(圖6)。但是當(dāng)以最不穩(wěn)定的Actin-2和GAPDH作為內(nèi)參基因時,SRK在蕾期柱頭高表達(dá),顯著高于花期柱頭,與柱頭熟性成負(fù)相關(guān)(圖7),與已報道SRK基因的表達(dá)模式不吻合。上述結(jié)果說明,在青花菜自交不親和相關(guān)基因的熒光定量PCR研究中,采用Actin-7和UBC7作為內(nèi)參基因進(jìn)行分析是可靠的。

        3討論與結(jié)論

        青花菜自交不親和相關(guān)基因表達(dá)模式分析中,選擇合適的內(nèi)參基因是得到準(zhǔn)確的定量分析結(jié)果的重要前提[31-37]。有報道顯示,內(nèi)參基因的選擇會隨著物種或組織的變化而有著不同的選擇,如青花菜花蕾發(fā)育過程中穩(wěn)定的內(nèi)參基因是XLOC_000400/XLOC_008536和XLOC_039609/XLOC_021473,抵御逆境脅迫中的穩(wěn)定內(nèi)參基因是XLOC_010342和XLOC_007980[42-43];甘藍(lán)柱頭發(fā)育過程中穩(wěn)定的內(nèi)參基因是Tubα-6、Actin,非生物脅迫試驗條件下適應(yīng)的內(nèi)參基因是EF1a、GAPC2和SAND[32,44-45]。然而,上述內(nèi)參基因不適用筆者所在課題組前期青花菜SI相關(guān)基因的熒光定量,具體表現(xiàn)為不同SI基因的表達(dá)模式分析結(jié)果顯示其在不同組織的表達(dá)特異性不顯著以及在SI識別反應(yīng)前后表達(dá)量無明顯差異等。因此本研究系統(tǒng)地在青花菜中對相關(guān)候選內(nèi)參基因進(jìn)行了統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示,在近緣物種相關(guān)研究中穩(wěn)定的內(nèi)參基因?qū)τ谇嗷ú硕圆⒉皇亲顑?yōu)選,如Actin-1、Actin-2、DNAJ、UKN1、Actin-3及Tubα-6等,其中Actin-2驗證為不穩(wěn)定。因此在開展具有組織特異性基因表達(dá)特征分析時應(yīng)基于本物種或組織預(yù)先開發(fā)適用的內(nèi)參基因,而簡單地引用其他物種的已有報道具有潛在的試驗誤差。本研究以青花菜自交不親和系為材料,利用實時熒光定量PCR技術(shù)及3個RT-qPCR分析軟件GeNorm、NormFinder和BestKeeper檢測了17個候選內(nèi)參基因分別在4個組合中的表達(dá)水平,篩選獲得了適用于青花菜自交不親和相關(guān)基因的內(nèi)參基因。

        綜合GeNorm、NormFinder及BestKeeper分析結(jié)果,認(rèn)為在不同組織部位中的穩(wěn)定內(nèi)參基因為UBC7、Actin-1、UBC9,不穩(wěn)定內(nèi)參基因為GAPDH、UKN1、His;在花的不同部位中穩(wěn)定的內(nèi)參基因為DNAJ、Tubα-3,不穩(wěn)定的內(nèi)參基因為GAPDH、Tubα-6、 TUBβ-4; 在不同發(fā)育時期花蕾中穩(wěn)定的內(nèi)參基因為Actin-7、UBC7、Actin-3,不穩(wěn)定的內(nèi)參基因為Actin-2、Tubα-6、UBC9;在不同授粉時期柱頭中穩(wěn)定的內(nèi)參基因為Actin-7、His,不穩(wěn)定的內(nèi)參基因為UBQ、GAPDH、Actin-2。在數(shù)據(jù)分析過程中,發(fā)現(xiàn)依據(jù)3個內(nèi)參基因篩選軟件直接得出的結(jié)果,無法直接選擇出最穩(wěn)定的內(nèi)參基因。有研究顯示GeNorm軟件和NormFinder軟件有時可以得到大體一致的結(jié)果,有時也會得到差別很大的結(jié)果[46-48]。在本研究中,GeNorm軟件和NormFinder軟件篩選出穩(wěn)定內(nèi)參基因基本一致(Actin-7和UBC7)。BestKeeper軟件得出了不同結(jié)果(表達(dá)穩(wěn)定的內(nèi)參基因為 Actin-3 和DNAJ),但UBC7的排名也僅次于 Actin-3 和DNAJ。值得注意的是3款軟件一致認(rèn)為不穩(wěn)定內(nèi)參基因是GAPDH和Actin-2。因此本研究綜合考慮了3個軟件中的結(jié)果,最終選出在青花菜中穩(wěn)定的內(nèi)參基因是Actin-7和UBC7,不穩(wěn)定的內(nèi)參基因是GAPDH和Actin-2。對于3款軟件所得的結(jié)論存在的一些差異,這可能是軟件對于內(nèi)參基因穩(wěn)定性的算法不同造成的[24,35-38]。

        此外,通過篩選到的內(nèi)參基因分析青花菜自交不親和反應(yīng)中扮演著重要角色的基因SRK的表達(dá)情況可以驗證所篩選到的內(nèi)參基因的可行性,使用Actin-7和UBC7的分析結(jié)果顯示SRK在柱頭組織中特異表達(dá),表達(dá)量與柱頭熟性成正相關(guān),這個驗證結(jié)果與預(yù)期的已報道的SRK基因表達(dá)模式較為一致,也表明了在SI反應(yīng)中SRK作為雌性識別因子的重要性[39-41];而不穩(wěn)定的內(nèi)參基因GAPDH和Actin-2的使用導(dǎo)致了SRK表達(dá)模式相反的結(jié)果。基于以上信息,不建議在青花菜SI中使用這2個基因。

        本研究基于17個候選內(nèi)參基因的表達(dá)特性,系統(tǒng)地評估了其在青花菜SI相關(guān)基因定量表達(dá)研究的適用性,篩選獲得了2個適用的內(nèi)參基因Actin-7和UBC7,并通過驗證已報道的SRK的表達(dá)分析來說明本研究篩選結(jié)果的可行性。研究結(jié)果為開展青花菜自交不親和相關(guān)基因的表達(dá)特征分析提供了穩(wěn)定的內(nèi)參基因,為后續(xù)開展關(guān)鍵基因的挖掘、利用以及自交不親和分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)解析奠定了基礎(chǔ)。

        參考文獻(xiàn):

        [1]林俊城,吳秋云,高燦紅,等. 青花菜硫、硒代謝競爭及其對保健功能的影響研究進(jìn)展[J]. 中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報,2011,33(4):422-432.

        [2]解鴻蕾,車文靜,蘇越, 等. 十字花科蔬菜的抗癌作用[J]. 食品安全導(dǎo)刊,2022(34):172-175.

        [3]李占省,戚如詩,劉玉梅,等. 我國青花菜生產(chǎn)布局、價格變化及趨勢[J]. 長江蔬菜,2021(4):1-5.

        [4]吳名. 利用分子標(biāo)記輔助選育甘藍(lán)型油菜自交不親和系[D]. 武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

        [5]寇小培. 分子標(biāo)記輔助選育甘藍(lán)型油菜自交不親和系[D]. 武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

        [6]鄭敏,朱陳曾,劉夢慈,等. 基于SRK基因序列分析的甘藍(lán)自交不親和系單倍型鑒定及驗證[J]. 中國蔬菜,2018(3):32-39.

        [7]許明超,黃倩,張康妮,等. 甘藍(lán)型油菜隱性細(xì)胞核雄性不育系LY31AB的選育及利用[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版),2023,49(4):507-515.

        [8]Takasaki T,Hatakeyama K,Suzuki G,et al. The S receptor kinase determines self-incompatibility in Brassica stigma[J]. Nature,2000,403(6772):913-916.

        [9]Murase K,Shiba H,Iwano M,et al. A membrane-anchored protein kinase involved in Brassica self-incompatibility signaling[J]. Science,2004,303(5663):1516-1519.

        [10]Horisaki A,Niikura S. Developmental and environmental factors affecting level of self-incompatibility response in Brassica rapa L.[J]. Sexual Plant Reproduction,2008,21(2):123-132.

        [11]藍(lán)興國,楊佳,趙昕,等. 羽衣甘藍(lán)ARC1的基因分離、表達(dá)及與SRK相互作用的分析[J]. 園藝學(xué)報,2011,38(12):2342-2348.

        [12]Kusaba M,Matsushita M,Okazaki K,et al. Sequence and structural diversity of the S locus genes [JP3]from different lines with the same self-recognition specificities in Brassica oleracea[J]. Genetics,2000,154(1):413-420.

        [13]Schopfer C R,Nasrallah M E,Nasrallah J B,et al. The male determinant of self-incompatibility in Brassica[J]. Science,1999,286(5445):1697-1700.

        [14]魏小春,姚秋菊,原玉香,等. 大白菜高代自交系S單元型的分布[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,44(11):109-113,119.

        [15]Die J V,Román B,Nadal S,et al. Evaluation of candidate reference genes for expression studies in Pisum sativum under different experimental conditions[J]. Planta,2010,232(1):145-53.

        [16]Fu J X,Wang Y,Huang H,et al. Reference gene selection for RT-qPCR analysis of Chrysanthemum lavandulifolium during its flowering stages[J]. Molecular Breeding,2013,31(1):205-215.

        [17]王成. 不結(jié)球白菜自交不親和相關(guān)基因及轉(zhuǎn)錄組分析[D]. 南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2017.

        [18]江漢民,劉莉莉,徐嘉藝,等. 青花菜高代自交系S單元型的鑒定及SRK基因表達(dá)分析[J]. 南開大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2018,51(3):60-65.

        [19]Gachon C,Mingam A,Charrier B. Real-time PCR:what relevance to plant studies?[J]. Journal of Experimental Botany,2004,55(402):1445-1454.

        [20]袁偉,萬紅建,楊悅儉. 植物實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的特點及選擇[J]. 植物學(xué)報,2012,47(4):427-436.

        [21]Albuquerque G M R,F(xiàn)onseca F C A,Boiteux L S,et al. Stability analysis of reference genes for RT-qPCR assays involving compatible and incompatible Ralstonia solanacearum-tomato ‘Hawaii 7996’ interactions[J]. Scientific Reports,2021,11(1):18719.

        [22]孫靜. 鐵皮石斛qPCR內(nèi)參基因的篩選及開花相關(guān)基因的表達(dá)分析[D]. 南京:南京師范大學(xué),2017.

        [23]Song J H,Yang J,Pan F,et al. Differential expression of micro RNAs may regulate pollen development in Brassica oleracea[J]. Genetics and Molecular Research,2015,14(4):15024-15034.

        [24]de Spiegelaere W,Dern-Wieloch J,Weigel R,et al. Reference gene validation for RT-qPCR,a note on different available software packages[J]. PLoS One,2017,10(3):e0122515.

        [25]Leelatanawit R,Saetung T,Phuengwas S,et al. Selection of reference genes for quantitative real-time PCR in postharvest tomatoes(Lycopersicon esculentum)treated by continuous low-voltage direct current electricity to increase secondary metabolites[J]. International Journal of Food Science amp; Technology,2017,52(9):1942-1950.

        [26]張穎,陳婉婷,陳冉紅,等. 杉木實時熒光定量PCR分析中內(nèi)參基因的選擇[J]. 林業(yè)科學(xué)研究,2019,32(2):65-72.

        [27]Xiao" X L,Ma J B,Wang J R,et al. Validation of suitable reference genes for gene expression analysis in the halophyte Salicornia europaea by real-time quantitative PCR[J]. Frontiers in Plant Science,2015,5(1):788.

        [28]Delporte M,Legrand G,Hilbert J L,et al. Selection and validation of reference genes for quantitative real-time PCR analysis of gene expression in Cichorium intybus[J]. Frontiers in Plant Science,2015,6(1):651.

        [29]左同鴻.甘藍(lán)SI相關(guān)基因BoPUB3L和BoGSTL21的克隆與分析[D]. 重慶:西南大學(xué),2020.

        [30]張彤. 甘藍(lán)型油菜自交不親和反應(yīng)候選基因的功能研究及挖掘[D]. 湖北:華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2018.

        [31]郭怡婷,孫世英,趙文菊,等. 球莖甘藍(lán)qRT-PCR內(nèi)參基因的篩選及穩(wěn)定性驗證[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2024,59(1):144-152.

        [32]李晗,李治龍,李曉嶼,等. 羽衣甘藍(lán)不同組織及柱頭發(fā)育實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選[J]. 植物研究,2016,36(4):565-572.

        [33]張冠,楊迎霞,陸國清,等. 花椰菜花球中花青素合成相關(guān)基因qRT-PCR內(nèi)參基因的篩選[J]. 分子植物育種,2024,22(9):2938-2946.

        [34]Yan X,Zhang Q L,Zou J,et al. Selection of optimized reference genes for qRT-PCR normalization in Xanthomonas campestris pv. campestris cultured in different media[J]. Current Microbiology,2019,76(5):613-619.

        [35]Vandesompele J,de Preter K,Pattyn F,et al. Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes[J]. Genome Biology,2002,3(7):RESEARCH0034.

        [36]Andersen C L,Jensen J L,rntoft T F. Normalization of real-time quantitative reverse transcription-PCR data:a model-based variance estimation approach to identify genes suited for normalization,applied to bladder and colon cancer data sets[J]. Cancer Research,2004,64(15):5245-5250.

        [37]Pfaffl M W,Tichopad A,Prgomet C,et al. Determination of stable housekeeping genes,differentially regulated target genes and sample integrity:BestKeeper-Excel-based tool using pair-wise correlations[J]. Biotechnology Letters,2004,26(6):509-515.

        [38]吳建陽,何冰,杜玉潔,等. 利用geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件進(jìn)行內(nèi)參基因穩(wěn)定性分析的方法[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2017(5):278-281.

        [39]楊琳. 受體激酶SRK與FERONIA調(diào)控大白菜遠(yuǎn)緣雜交生殖隔離的分子機(jī)制[D]. 山東:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2023.

        [40]張以忠,曾文藝,鄧琳瓊,等. 甘藍(lán)S-位點基因SRK、SLG和SP11/SCR密碼子偏好性分析[J]. 作物學(xué)報,2022,48(5):1152-1168.

        [41]Chen W D,Zhang B,Ren W J,et al. An identification system targeting the SRK gene for selecting S-haplotypes and self-compatible lines in cabbage[J]. Plants,2022,11(10):1372-1372.

        [42]裴徐梨,馮鵬宇,唐征,等. 青花菜花蕾發(fā)育LncRNAs內(nèi)參基因篩選[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2023,52(1):125-133.

        [43]裴徐梨,焦鵬,荊贊革,等. 非生物脅迫下青花菜LncRNA內(nèi)參基因的篩選[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報,2023,32(4):593-599.

        [44]Zeng A S,Xu Y Y,Song L X,et al. Validation of suitable reference genes for qRT-PCR in cabbage(Brassica oleracea L.)under different abiotic stress experimental conditions[J]. Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology,2021,30(1):184-195.

        [45]李浩霞,黃穩(wěn)娥,柳西寧,等. 枸杞實時熒光定量RT-qPCR內(nèi)參基因篩選與驗證[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2023,51(9):41-51.

        [46]穆德添,萬凌云,章瑤,等. 鉤藤管家基因篩選及生物堿合成相關(guān)基因的表達(dá)分析[J]. 生物技術(shù)通報,2023,39(2):126-138.

        [47]Lee J M,Roche J R,Donaghy D J,et al. Validation of reference genes for quantitative RT-qPCR studies of gene expression in perennial ryegrass(Lolium perenne L.)[J]. BMC Molecular Biology,2010,11(1):8.

        [48]Li H,Qin Y,Xiao X,et al. Screening of valid reference genes for real-time RT-qPCR data normalization in Hevea brasiliensis and expression validation of a sucrose transporter gene HbSUT3[J]. Plant Science,2011,181(2):132-139.

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