摘要 細菌是引發(fā)感染的關(guān)鍵因素，定量檢測對臨床監(jiān)測和治療指導(dǎo)至關(guān)重要。 通過二液相成膜法，將金納米棒（Gold nanorods， Au NRs）自組裝成致密的金屬薄膜，并成功轉(zhuǎn)移到超薄熱塑性聚氨酯表面，形成了均勻且穩(wěn)定的柔性表面增強拉曼散射（Surface-enhanced Raman scattering， SERS）活性基底。 該基底經(jīng)過4-巰基苯硼酸（4-Mercaptophenylboric acid， MPBA）修飾，能夠有效固定細菌并提供參比信號。 同時，該基底對修飾的MPBA分子的檢測限能夠達到1×10-9 mol/L。 制備了金銀核殼結(jié)構(gòu)的SERS標簽，利用夾層中的5，5′-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（5，5′-Dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）， DTNB）作為目標信號，制備的基底能夠?qū)ERS標簽的信號增強約54倍。 將SERS標簽與核酸適配體結(jié)合，實現(xiàn)了對大腸桿菌（Escherichia coli， E. coli）的特異性識別。 通過分析目標信號與參比信號的拉曼特征峰強度比（I1337/I1078），在水和唾液樣本中，細菌濃度在1×102～1×107 CFU/mL 范圍內(nèi)與I1337/I1078 呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，決定系數(shù)（R2）為0. 97126，優(yōu)于僅分析目標信號的R2（0. 87046），顯示比率型分析擬合效果更佳。 這種策略在細菌檢測方面具有潛在的應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞 二液相成膜法；金納米棒；表面增強拉曼散射；4-巰基苯硼酸；比率型分析

中圖分類號：O657. 3 文獻標識碼：A 文章編號：1000-0518（2025）02-0182-10

細菌在自然界中無處不在，是生態(tài)系統(tǒng)中不可或缺的一部分，然而，當細菌侵入人體或其他生物體時，可能成為感染的關(guān)鍵因素，導(dǎo)致一系列健康問題［1-3］。 大腸桿菌（Escherichia coli， E. coli）是一種常見的革蘭氏陰性菌，是與人類和動物腸道微生物群相關(guān)的最豐富的兼性厭氧微生物，常與腸道感染、尿路感染和腦膜炎有關(guān)［4-5］。 同時，E. coli 與外科手術(shù)后感染、壓瘡和褥瘡感染、外傷后感染等癥狀密切相關(guān)，能夠在傷口表面形成生物膜，增加抗生素治療的難度。 并且E. coli 是造成抗生素耐藥性的主要病原體之一，隨著抗生素的廣泛使用，耐藥菌株的出現(xiàn)使得細菌感染的檢測和清除變得更加緊迫［6］。 目前，大多數(shù)臨床細菌檢測技術(shù)，如培養(yǎng)法、生化實驗、分子生物學(xué)方法和免疫學(xué)方法，通常需要穩(wěn)定的儲備條件、豐富的專業(yè)知識、高昂的成本及較長的處理時間，這些要求使得實現(xiàn)無培養(yǎng)和無提取的細菌檢測變得尤為困難。 因此，開發(fā)快速、靈敏的細菌檢測技術(shù)對公共衛(wèi)生和醫(yī)療保健至關(guān)重要［7-9］，不僅可以提高公共衛(wèi)生應(yīng)對疾病傳播的能力，還能夠幫助醫(yī)生做出更快的臨床決策，從而改善患者的治療效果和預(yù)后［4］。

在眾多新型檢測技術(shù)中，表面增強拉曼散射（Surface-enhanced Raman scattering， SERS）技術(shù)因其高靈敏度和特異性而備受關(guān)注［10-14］。 通過利用貴金屬納米結(jié)構(gòu)（如金、銀）的局域表面等離子體共振（Local surface plasmon resonance， LSPR）效應(yīng)［15-17］，能夠顯著增強拉曼散射強度，使得基于SERS技術(shù)的生物傳感器在痕量樣品檢測中被廣泛應(yīng)用［18-20］。 金納米棒（Gold nanorods， Au NRs）的兩端具有高曲率區(qū)域，能夠產(chǎn)生強烈的局域電磁場。 這種強烈的局部增強電磁場，主要由LSPR效應(yīng)產(chǎn)生，其位置通常被稱為“熱點”。 在合成過程中，Au NRs長徑比可調(diào)的特點能夠使其LSPR峰位匹配不同的激發(fā)光波長［21］。 同時Au NRs也便于通過Au—S鍵進行多種表面功能化修飾。 但是，Au NRs在膠體狀態(tài)下穩(wěn)定性較差，很容易發(fā)生聚集或沉淀，使其SERS性能產(chǎn)生不可控的變化［22-23］。 為了可靠穩(wěn)定地利用Au NRs的SERS性能，通過二液相自組裝法將Au NRs組裝為密集、均勻的薄膜是一種有效的方法［24-25］。 在水-正己烷二液相體系中，納米粒子由于疏水性和親水性之間的相互作用，借助水和正己烷的表面張力差異在界面處穩(wěn)定排列，形成均勻的薄膜，隨著上層溶劑的揮發(fā)，納米粒子在界面上的數(shù)量增加，促進更緊密和有序的排列。 這種自組裝膜使得Au NRs緊密排列，形成了大量距離1 nm左右的粒子間縫隙，這些縫隙結(jié)構(gòu)中，“熱點”的強度會進一步增強［26-29］，密集且均一分布的SERS“熱點”顯著提高了基底的SERS性能，同時還改善了信號的一致性和可重復(fù)性［30］。 這種陣列制備方式無需復(fù)雜設(shè)備或嚴格的條件控制，操作相對簡單，降低了材料和設(shè)備成本，適用于大面積薄膜的制備，便于規(guī)?；a(chǎn)，并且通過調(diào)整納米粒子表面配體和溶液條件，可以靈活控制膜的厚度和結(jié)構(gòu)。

比率型傳感器與傳統(tǒng)的信號強度檢測策略不同，通過比較2個或多個信號的比率，能夠有效抵消環(huán)境因素、激光強度波動和基底不均勻性對檢測結(jié)果的影響，提高結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性，能更好地排除背景信號的干擾，尤其在復(fù)雜樣品中表現(xiàn)突出［31］。 本研究利用水-正己烷二液相體系，將Au NRs自組裝成致密薄膜，然后將其成功組裝至超薄熱塑性聚氨酯（Thermoplastic polyurethane， TPU）柔性薄膜表面，形成穩(wěn)定的SERS活性基底（圖1）。 采用4-巰基苯硼酸（4-Mercaptophenylboric acid， MPBA）對其進行功能性修飾，硼酸基團能夠與細菌表面的糖類形成共價連接，使SERS基底具有了細菌捕獲能力［32-34］，同時其苯環(huán)結(jié)構(gòu)具有較強的拉曼活性，能夠提供清晰穩(wěn)定的參比信號，提高了檢測的穩(wěn)定性和準確性。 合成了Au@DTNB@Ag核殼結(jié)構(gòu)SERS標簽，通過比率型分析來實現(xiàn)對E. coli 的高靈敏度檢測，線性關(guān)系優(yōu)于傳統(tǒng)方法。 在細菌檢測方面具有重要的應(yīng)用價值。

1 實驗部分

1. 1 儀器和試劑

Talos F200X G2型透射電子顯微鏡和能量色散X射線光譜儀（TEM和EDX，美國賽默飛世爾科技公司）；UV-1800型紫外-可見分光光度計（UV-Vis，日本島津公司）；Zetasizer Nano ZS型Zeta電位儀（英國馬爾文公司）；LabRAM HREvolution型激光共聚焦拉曼光譜系統(tǒng)（Raman，法國霍瑞斯喬布公司）。

四氯金酸三水合物（HAuCl4·3H2O，≥99. 9%）、硼氫化鈉（NaBH4，≥98%）、硝酸銀（AgNO3，≥99. 8%）、濃鹽酸（HCl，質(zhì)量分數(shù)為37%）、檸檬酸鈉（＞37%）和5，5′-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（ DTNB，≥98%）購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；十六烷基三甲基溴化銨（CTAB，≥99%）和油酸鈉（C17H33CO2Na，化學(xué)純）購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；L-抗壞血酸（ L-Ascorbic acid， AA，≥99. 99%）、正己烷（≥99%）乙醇（≥99. 7%）和MPBA（90%）購自上海麥克林生化有限公司；半透明彈力TPU（厚0. 03 mm，熔點在120～140 ℃）購自上海星霞分子制品有限公司；E. coli 特異性識別核酸適配體序列（E. coli-aptamer，HSGCAATGGTACGGTACTTCCCCATGAGTGTTGTGAAATGTTGGGACACTAGGTGGCATAGAGCCGCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA）［35］由上海生物工程有限公司負責(zé)合成；BL531A TE緩沖液（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA，pH=8. 0）購自北京蘭杰柯科技有限公司；LB液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基粉末購自青島海博生物科技有限公司；配制胰蛋白胨大豆肉湯（Tryptic soy broth， TSB）培養(yǎng)基所需TSB粉末、酵母粉、L-半胱氨酸鹽酸鹽、氯化血紅素和維生素K購自德國默克集團；去離子水由吉林大學(xué)后勤提供；E. col（i ATCC 47076菌株）購自北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司；金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus， S. aureus，ATCC 29213菌株）購自湖南豐暉生物科技有限公司；具核梭桿菌（Fusobacterium nucleatum， F. nucleatum，ATCC 10953菌株）和牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis， P. gingivalis，ATCC 33277菌株）購自美國ATCC菌種保藏中心。 使用細菌的實驗獲得吉林大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院實驗倫理委員會的批準。

1. 2 Au NRs 的制備

采用CTAB和油酸鈉雙配體合成Au NRs。 首先，準備主反應(yīng)體系A(chǔ) 液，將7. 0 g CTAB和1. 234 gC17H33CO2Na溶于250 mL水中，加入18 mL 4 mmol/L AgNO3后，在30 ℃下攪拌。 15 min后，倒入250 mL1 mmol/L HAuCl4，攪拌90 min。 上述步驟結(jié)束前25 min，準備合成金種子液B 液，在5 mL 0. 2 mol/LCTAB 中加入5 mL 0. 5 mmol/L HAuCl4，隨后加入1 mL 6 mmol/L NaBH4 后，劇烈攪拌2 min，室溫靜置30 min。 B 液反應(yīng)結(jié)束前20 min，在A 液中加入1. 5 mL 37%（質(zhì)量分數(shù)）HCl，低速攪拌15 min后，加入1. 25 mL 64 mmol/L AA。 快速攪拌30 s后，加入0. 4 mL B 液。 快速攪拌30 s后，保持30 ℃下低速攪拌12 h。 反應(yīng)結(jié)束后，7500 r/min，離心13 min 2次，收集于 45 mL 水中，室溫保存。

1. 3 Au 膜的制備

參考水-正己烷二液相成膜方法，將0. 5 mL Au NRs分散于直徑為6 cm的玻璃培養(yǎng)皿中的8 mL水中。 逐滴加入5 mL正己烷，直至完全覆蓋水面。 然后，以10 μL/s的速度逐滴加入乙醇，總共加入8 mL乙醇后，底部的金屬納米粒子溶液顏色逐漸變淺直至無色，并且在水與正己烷液面中形成一張致密且具有金屬光澤的薄膜。 對TPU薄膜進行30 min紫外臭氧處理以提高其親水性，將其置于膜下方并緩慢抬起以撈取界面處形成的金屬膜，待其干燥后，便得到了Au膜。

1. 4 Au 膜的拉曼靈敏度、均一性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性

拉曼光譜的采集使用了633 nm的激發(fā)波長和0. 28 mW的激光功率，所用光柵的密度為600 l/mm，通過20倍物鏡進行采集，積分時間設(shè)置為5 s，重復(fù)采集2次，光譜測量范圍為900～1800 cm-1。 1）分別將尺寸為1 cm×1 cm的Au膜浸泡在1 mL不同濃度（1×10-3～1×10-9 mol/L）的MPBA水溶液中，得到搭載不同量MPBA膜，在各個膜上隨機選取5個點進行拉曼檢測； 2）在經(jīng)1×10-4 mol/L MPBA水溶液處理的Au 膜（Au Film@MPBA）上隨機選取25 個點進行拉曼光譜采集驗證其均一性； 3）制備5 個批次的Au Film@MPBA，檢測其重現(xiàn)性； 4）Au Film@MPBA在室溫、干燥且密閉無避光處理條件下儲存7 d、3個月和6個月后，檢測其穩(wěn)定性。

1. 5 Au@DTNB@Ag 核殼納米粒子探針的合成

1. 5. 1 金納米球制備

將50 mL 25 mmol/L HAuCl4加熱攪拌至沸騰，快速加入500 μL質(zhì)量分數(shù)5%檸檬酸鈉溶液。 溶液逐漸變?yōu)榫萍t色，保持沸騰20 min，冷卻至室溫，得到金納米球溶液。

1. 5. 2 Au@DTNB 合成

取10 mL金納米球溶液，加入10 μL 10 mmol/L DTNB，以600 r/min攪拌4 h。 離心洗滌3次，得到Au@DTNB溶液。

1. 5. 3 Au@DTNB@Ag 制備

將10 mL Au@DTNB 溶液稀釋至40 mL，加熱至沸騰，加入500 μL 1% 檸檬酸鈉。緩慢滴加5 mL1 mmol/L AgNO3溶液，溶液由酒紅色變?yōu)槌壬?15 min后停止加熱，冷卻，離心洗滌3次，溶于4 mL去離子水中，得到Au@DTNB@Ag，4 ℃保存。

1. 5. 4 Au@DTNB@Ag@Apt 核殼納米粒子探針制備

將60 μL Au@DTNB@Ag與E. coli-aptamer在4 ℃搖勻過夜。 8000 r/min離心8 min，得到Au@DTNB@Ag@Apt。 沉淀溶于60 μL TE緩沖液中，4 ℃保存。

1. 6 細菌的培養(yǎng)

E. coli 和S. aureus 分別在LB液體培養(yǎng)基中，于37 ℃、200 r/min的搖床中培養(yǎng)12 h。 隨后，通過以5000 r/min離心5 min收集，并用PBS緩沖液洗滌2次，根據(jù)細菌標準計數(shù)法調(diào)節(jié)細菌懸液為1×108 CFU/mL以便后期稀釋至所需濃度。 F. nucleatum 和P. gingivalis 分別在TSB條件培養(yǎng)基中，于乏氧環(huán)境37 ℃培養(yǎng)96 h。 隨后，離心收集，生物濃度調(diào)至1×108 CFU/mL。

1. 7 細菌檢測實驗

1. 7. 1 水中細菌含量檢測

制備的Au Film@MPBA在4 ℃下與1 mL含有E. coli 的懸液孵育2 h，取出后用無菌去離子水沖洗3次。 隨后，浸入1 mL Au@DTNB@Ag@Apt溶液，在4 ℃下處理2 h。 最后，沖洗以去除未結(jié)合的標記，干燥后用于拉曼檢測。

1. 7. 2 人工唾液樣品檢測

為評估方法應(yīng)用，人工唾液用無菌PBS 緩沖液稀釋2 倍后，加入E. coli 懸液至濃度為1×102～1×107 CFU/mL，并在Au Film@MPBA 平臺上檢測。

2 結(jié)果與討論

2. 1 Au Film@MPBA 的制備與表征

首先，采用種子介導(dǎo)法合成小的金種子，然后在CTAB 和油酸鈉的共同作用下進行生長，形成Au NRs。 CTAB作為陽離子表面活性劑，在金納米顆粒表面形成雙分子層，促進顆粒在特定方向上生長。 油酸鈉作為輔助表面活性劑，與CTAB協(xié)同作用，調(diào)控金納米顆粒的生長動力學(xué)，幫助控制最終的棒狀形貌。 如圖2A和2B所示，通過TEM及統(tǒng)計學(xué)分析，得到Au NRs的寬度為（23. 86±2. 14） nm，長度為（79. 58±6. 3） nm，長徑比為3. 33。 圖2C中，膠體Au NRs溶液的Zeta電勢為+42. 3 mV，這是由于表面CTAB帶正電。 MPBA通過Au—S強共價鍵連接在Au NRs表面，暴露的硼酸基團具有負電的羥基。

在水-正己烷二液相體系中，通過加入乙醇，可以促進水溶液中的Au NRs在水油界面自組裝形成致密金屬膜。 乙醇的加入降低了水和正己烷之間的界面張力，使得Au NRs更易于移動到界面處。Au NRs表面通常帶有合成殘留的CTAB，是親水的修飾劑，在界面上，這些分子會自發(fā)地重新排列，降低系統(tǒng)的自由能。 在圖2D中，Au NRs能夠呈大面積單層膜均一排布。 Au膜可以撈制在面積為4 cm2（2 cm×2 cm），厚度為0. 03 mm，柔軟且透明的TPU上，如圖2E和2F所示，薄膜表面呈現(xiàn)金屬光澤。 在圖2G中，Au NRs在水環(huán)境中的UV-Vis光譜顯示Au NRs的2個明顯的LSPR峰，橫向LSPR峰值位于513 nm和縱向LSPR峰值位于852 nm，而Au膜的LSPR峰從500 nm到900 nm呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，并且由于陣列結(jié)構(gòu)能夠產(chǎn)生集體耦合效應(yīng)，Au膜的LSPR信號得到明顯增強，相較于Au NRs，Au膜具有更加高效的光吸收特性。 在圖2H中，拉曼信號檢測發(fā)現(xiàn)Au膜沒有顯著特征峰，經(jīng)MPBA修飾后，可見位于1078和1590 cm-1的尖峰，分別代表苯環(huán)的C—H彎曲振動和C—C伸縮振動，以及位于1190 cm-1處代表B—OH振動的小峰。 C—C鍵的伸縮振動涉及整個苯環(huán)結(jié)構(gòu)，容易受到分子間相互作用和表面吸附的影響。MPBA與多元醇、糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、金屬離子和聚合物等結(jié)合，溶劑的極性、pH值以及與其他分子的相互作用，如配位或氫鍵，均可能影響B(tài)—OH振動的頻率和強度。 而C—H振動通常較為局部化，受環(huán)境影響較小，更適合作為參比信號。 撈制單層膜后表面的親水性能夠支持后期多層膜撈制，在圖2I中，對不同層數(shù)Au膜的SERS性能進行了對比，雙層膜比單層膜信號增強了3倍，而再逐層增加并未達到更加顯著的信號增強，考慮到制備難度和材料的生物相容性，故選用雙層膜進行后續(xù)研究。

2. 2 Au 膜的拉曼靈敏度、均一性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性

在圖3A和3B中，測試了Au膜對偶聯(lián)在表面的MPBA分子的檢測靈敏度，當MPBA濃度為1×10?4 mol/L時信號達到飽和。 在1×10?9～1×10?5 mol/L范圍內(nèi)，信號與MPBA濃度呈線性關(guān)系，Au膜的實際檢測下限為1×10?9 mol/L，證明了其具有優(yōu)良的SERS性能。 在圖3C和3D中，隨機采集Au Film@MPBA表面25個點的拉曼信號，得到信號的相對標準偏差（RSD）為5. 33%。 此外，針對5個不同批次Au Film@MPBA的拉曼強度測試，RSD為2. 63%。 這些結(jié)果表明，Au膜具備出色的均一性和重現(xiàn)性。 由于Au膜制備在透明柔性基底上，分別從薄膜正面與背面采集了拉曼信號，如圖3E所示，從薄膜背面采集到的拉曼信號強度僅有微弱的下降，證明了在機器學(xué)習(xí)等手段的輔助下，這種基底具有貼附在創(chuàng)口表面對細菌實時進行無標簽監(jiān)測的應(yīng)用潛力。 此外，Au Film@MPBA的制備無需精細且昂貴的設(shè)備，保存時對環(huán)境要求不高，如圖3F所示，在室溫條件下保存6個月后，其拉曼性能依然能夠保持穩(wěn)定，證明了其具有良好的環(huán)境穩(wěn)定性。

2. 3 細菌檢測應(yīng)用

對制備的SERS標簽進行TEM（圖4A）及EDX（圖4C）表征，結(jié)果表明銀殼成功包被在金核外周。如圖4D所示，與金核位于525 nm的LSPR峰相比，Au@DTNB@Ag的LSPR峰位出現(xiàn)在409 nm，位于較短波長范圍內(nèi)，這與銀在納米尺度下的特征吸收峰相符，從而驗證了銀殼的成功包覆。 DTNB的特征峰位于1337 cm-1，與硝基振動伸縮有關(guān)。 如圖4E所示，Au@DTNB@Ag能夠?qū)u@DTNB的信號增強5倍。 這種增強效果主要歸因于金核和銀殼之間的納米間隙，該間隙可以產(chǎn)生強烈的電磁場增強效應(yīng)，顯著提高拉曼信號的強度。 此外，外部的銀殼層還能隔離DTNB分子，避免納米粒子間形成不可控的強熱點，從而提高標簽信號的穩(wěn)定性。 在圖4F中，Au@DTNB@Ag標簽被滴加到TPU基底或Au膜上。 與TPU空白基底上的Au@DTNB@Ag信號相比，Au膜上Au@DTNB@Ag的拉曼信號增強了54倍左右，這證明了Au膜對金銀核殼結(jié)構(gòu)具有優(yōu)秀的SERS增強效果。

利用Au Film@MPBA捕獲和固定E. coli，后用Au@DTNB@Ag@Apt標簽識別并定量檢測捕獲到的E. coli。 硼酸基團能夠與細菌細胞壁上的多羥基化合物（如糖類）形成共價酯鍵，圖4G中，在共聚焦顯微鏡下可見Au Film@MPBA成功固定E. coli。 當待測物中含有細菌時，Au@DTNB@Ag@Apt借助具有特異性識別E. coli 的核酸適配體與E. coli 結(jié)合，從而引入目標信號。 核酸適配體是經(jīng)過體外篩選（SELEX）獲得的，具有特定的核苷酸序列，能夠識別并結(jié)合目標分子。 適配體可能通過形成特定的三維結(jié)構(gòu)與E. coli 表面的多糖、表面蛋白或鞭毛結(jié)合［36］。

如圖5A和5B所示，利用Au Film@MPBA基底和Au@DTNB@Ag@Apt標簽檢測在水環(huán)境中進行檢測時，細菌濃度在1×102～1×107 CFU/mL范圍內(nèi)與I1337/I1078呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，決定系數(shù)R2=0. 97126。 在圖5C中，當僅對DTNB的信號強度I1337進行分析時，目標信號的R2=0. 87046，顯示比率型分析擬合效果更佳。 檢測下限（LOD）通過以下公式確定： LOD=3σ/S（其中，σ 為空白對照組多次測量的標準偏差，S 為校準曲線的斜率），計算得出該檢測系統(tǒng)在水中的LOD為1. 437 CFU/mL。 接下來，在圖5D和5F中，在人工唾液環(huán)境中對相同濃度的細菌樣品進行了再次檢測，人工唾液包含電解質(zhì)（如鈉、鉀、鈣）、酶（如淀粉酶）、蛋白質(zhì)和有機化合物，以模擬自然唾液的化學(xué)特性，有利于評估傳感器材料在唾液環(huán)境中的穩(wěn)定性和耐用性。 該傳感系統(tǒng)在人工唾液中進行檢測時，信號比值與細菌濃度在1×102～1×107 CFU/mL范圍內(nèi)仍然保持良好的線性響應(yīng)，LOD為152 CFU/mL，證明了其在人工唾液環(huán)境中也具有高靈敏度和可靠性，能夠快速檢測細菌濃度，具有應(yīng)用于臨床檢測的潛力。 在圖5F中，選擇了S. aureus、F. nucleatum 和P. gingivalis 對設(shè)計的檢測系統(tǒng)進行了檢測特異性驗證，S. aureus 和E. coli 是2種造成創(chuàng)口感染的主要病原菌，F(xiàn). nucleatum 和P. gingivalis 是2種常見牙周病致病菌。 經(jīng)驗證，該檢測能夠有效區(qū)分E. coli、S.aureus、F. nucleatum 和P. gingivalis，具有強特異性。

3 結(jié) 論

利用水油二液相自組裝Au NRs 形成具有強SERS 性能的雙層膜結(jié)構(gòu)Au 膜，該基底具有優(yōu)良的SERS性能，對于偶聯(lián)在表面的4-巰基苯硼酸（4-Mercaptophenylboric acid， MPBA）分子的檢測限能夠達到1×10-9 mol/L，同時具有優(yōu)秀的信號重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。 在基底表面修飾MPBA對基底進行功能化，使其具有細菌捕獲能力并提供比率傳感器中的參比信號。 同時，制備SERS標簽用于特異性識別大腸桿菌（Escherichia coli， E. coli）并提供目標信號。 制備的Au膜對核殼結(jié)構(gòu)SERS標簽同樣具有優(yōu)秀的增強效果，能夠?qū)ERS標簽的信號增強約54倍。 利用Au Film@MPBA與SERS標簽協(xié)同構(gòu)建比率型E. coli檢測平臺，在1×102～1×107 CFU/mL范圍內(nèi)具有良好線性響應(yīng)，LOD低至1. 437 CFU/mL，同時在人工唾液環(huán)境中也表現(xiàn)出了良好的檢測性能。 展示了其在生物醫(yī)學(xué)檢測中的應(yīng)用前景。

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