摘要以豐富的植物博落回為原料，提取其活性成分博落回生物堿后，通過改進(jìn)生產(chǎn)工藝與添加助溶劑和穩(wěn)定劑等制成博落回口服液，用以治療仔豬大腸桿菌性腹瀉。選擇22～30日齡的梅山仔豬140頭，隨機(jī)分為5組，除健康對(duì)照組10頭仔豬外，其他仔豬人工接種致病性大腸桿菌O149∶K88ac，20h后用藥物博落回口服液實(shí)施治療。藥物試驗(yàn)組分為低、中、高劑量組各30頭仔豬，分別按每頭仔豬2.5、5.0、10.0mL的劑量灌服博落回口服液，藥物對(duì)照組30頭仔豬，用硫酸安普霉素可溶性粉溶于水中灌服，劑量為12.5mg/kg。感染對(duì)照組與健康對(duì)照組各10頭仔豬，不用藥。各組均1d給藥2次，連用3d，于停藥3d后統(tǒng)計(jì)療效。結(jié)果表明：博落回口服液中劑量組和藥物對(duì)照組的治愈率在90.0％以上，博落回口服液中、高劑量組的總有效率均為96.7％，高于藥物對(duì)照組（93.3%），但差異不顯著（P＞0.05）。急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明：博落回口服液對(duì)大鼠經(jīng)口染毒LD50大于5g/kg，是非常安全的。試驗(yàn)結(jié)果表明：中、高劑量的博落回口服液對(duì)仔豬腹瀉有較好療效，通過改進(jìn)生產(chǎn)工藝和添加助溶劑和穩(wěn)定劑等在2年期內(nèi)保持博落回口服液有效成分不變。

關(guān)鍵詞博落回口服液；大腸桿菌??；仔豬腹瀉；療效觀察

中圖分類號(hào)S858.28"文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A"文章編號(hào)0517-6611（2025）02-0090-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.02.020

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

ObservationontheCurativeEffectofMacleayacordataLiquidonColibacillosisDiarrheaofPiglets

YU Jian-sheng HU Mei-zhong ²

（1.TongrenVocationalandTechnicalCollege，Tongren，Guizhou554300;2.NationalLocalJointEngineeringResearchCenterfortheSeparationandPurificationTechnologyofNationalVeterinaryDrugs，Tongren，Guizhou554300）

AbstractWetakethelocalextremelyrichplantMacleayacordataastherawmaterial，extractitsactiveingredientMacleayacordata，andthenmakeMacleayacordataliquidtotreatpigletcoliformdiarrhea."140Meishanweanedpigletsaged22-30dayswererandomlydividedinto5groups.Except10pigletsinthehealthycontrolgroup，otherpigletswereartificiallyinoculatedwithpathogenicEscherichiacoliO149∶K88ac，andweretreatedwithdrugs20hourslater.""Intheexperiment，30pigletsinthelow，middleandhighdosegroupsweregivenMacleayacordataliquidatadoseof2.5，5.0and10.0mLforeachpiglet，and30pigletsinthedrugcontrolgroupweregivenMacleayacordataliquidatadoseof12.5mg/kgbodyweightdissolvedinwaterwithapramycinsulfatesolublepowder.10pigletsinthecontrolgroupwereinfectedwithoutdrugs.Eachgroupwasadministeredtwiceadayfor3consecutivedays，andtheefficacywascounted3daysafterdrugwithdrawal.Theresultsshowedthatthecurerateofthemiddledosagegroupandthedrugcontrolgroupwas90.0%，andthetotaleffectiverateofthemiddledosagegroupandthehighdosagegroupwas96.7%，higherthanthatofthedrugcontrolgroup（93.3%），butthedifferencewasnotsignificant（Pgt;0.05）.TheacutetoxicitytestshowedthattheoralLD50ofMacleayacordataliquidtoratswasgreaterthan5g/kg，whichisverysafe.TheresultsshowedthatthemediumandhighdosesofMacleayacordataliquidhadagoodeffectonpigletdiarrhea.

KeywordsMacleayacordataliquid;Colibacillosis;Pigletdiarrhea;Observationofcurativeeffect

仔豬大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的一種急性敗血性傳染病，在我國(guó)各地豬場(chǎng)均有發(fā)生，是目前嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一。在臨床上可表現(xiàn)為仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病3種類型^［1-3］。仔豬黃痢多見于1～7日齡仔豬發(fā)病，仔豬白痢多見于10～30日齡仔豬發(fā)病，仔豬水腫病多見于斷奶仔豬，都具有較高的發(fā)病率和死亡率，特別是以仔豬黃痢嚴(yán)重。為了解決長(zhǎng)期使用抗生素、化學(xué)合成藥物對(duì)仔豬大腸桿菌病進(jìn)行治療帶來的治療效果降低，藥物用量增大，產(chǎn)生耐藥性，藥物殘留超標(biāo)，影響人類大健康等諸多不良反應(yīng)，筆者以當(dāng)?shù)貥O豐富的天然植物博落回為原料，提取其活性成分博落回生物堿并將其制成博落回口服液，用以治療仔豬大腸桿菌性腹瀉，尋求研發(fā)一種新的純天然“替抗”產(chǎn)品用于防治仔豬大腸桿菌病。

博落回，又名號(hào)筒桿、山號(hào)筒、勃勒回、三錢三、山梧桐等，系罌粟科植物博落回［Macleaya cordata（Willd）R.B］的帶根全草入藥，廣泛分布于長(zhǎng)江流域以南各省，特別是云、貴、川較多見，在銅仁地區(qū)遍生于荒山野坡，隨處可見，并可人工種植^［4-7］。博落回辛、苦、溫，有大毒，有驅(qū)風(fēng)解毒，散淤消腫及殺蟲驅(qū)蟲之功用。民間用其治療癰腫疔毒，惡瘡潰瘍，燙傷頑癬、風(fēng)濕痹癥、跌打損傷、疥瘡等體表疾患，因其大毒，不作內(nèi)用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，博落回的有效藥用成分為生物堿，也提取分離出血根堿（Sanguinarine）、白屈菜紅堿（Chelerythrine）、博落回堿（Bocconoline）、原阿片堿（Protopine）、小檗堿（Berberine）等^［4-7］。

目前，博落回作為中獸藥產(chǎn)品上市的有博落回注射液、博落回散。但博落回注射液使用要固定豬一頭一頭注射，不但工作量大，而且對(duì)豬的刺激性大；而散劑多為混飼給藥，腸道吸收慢且不完全，通過混飼給藥過程中又易存在拌料不均等問題。同時(shí)大多數(shù)仔豬在患大腸桿菌病后會(huì)出現(xiàn)食欲下降甚至食欲廢絕而僅僅只飲水，導(dǎo)致仔豬采食藥量不均或不能采食藥量，很難發(fā)揮藥物效果。因此，將其制成口服液飲水飼喂不但使用方便，且吸收快、生物利用度高。由于博落回提取物難溶于水，且水溶液不穩(wěn)定，致口服液制取難度大，目前研究較少，也缺乏產(chǎn)品上市投入使用。為探討博落回口服液穩(wěn)定性，及其對(duì)仔豬大腸桿菌病腹瀉的療效，筆者以人工感染大腸桿菌仔豬為病理模型，用有效期2年的博落回口服液實(shí)施治療。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)藥物。

博落回口服液，由貴州銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院民族中獸藥分離純化技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心提供，主要成分為博落回提取物（生物堿），規(guī)格為100mL（100mL：500mg）/瓶，批號(hào)20180618。

硫酸安普霉素可溶性粉，由江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物藥學(xué)院提供，規(guī)格為1000g∶100g，批號(hào)：A201904006。

1.1.2標(biāo)準(zhǔn)菌種及診斷試劑。

豬大腸桿菌O149∶K88ac（以下簡(jiǎn)稱E.coliK88菌株），大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O型血清，均購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。

1.1.3接種菌液的配制。

E.coli K88ac菌株取回后在37 ℃迅速解凍，接種于普通肉湯培養(yǎng)基和瓊脂板上，于37 ℃培養(yǎng)18 h，調(diào)整菌液，使細(xì)菌計(jì)數(shù)活菌數(shù)不少于5×108 個(gè)/mL，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?sup>［1^］。

1.1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

1.1.4.1臨床實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

興化市裕順牧業(yè)有限公司提供的22～30日齡體重相當(dāng)?shù)慕】得飞阶胸i140頭，隨機(jī)分為5組，藥物試驗(yàn)組3組，每組30頭，其他健康對(duì)照組和感染對(duì)照組各10頭，未經(jīng)豬大腸桿菌免疫，飼養(yǎng)條件一致。

1.1.4.2急性毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

清潔級(jí)健康Wistar大鼠20只，體重18～20g，雄、雌各半，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可合格證號(hào)：SCXK（蘇）2017—0007。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1臨床試驗(yàn)分組及處理方法。

試驗(yàn)仔豬分組及處理情況見表1。

1.2.2人工感染。

除健康對(duì)照組外，其他每組每頭仔豬分別內(nèi)服配制好的E.coliK88菌液1mL（表1）。

1.2.3病因確定。

依據(jù)臨床癥狀、病理剖檢變化以及實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)發(fā)病仔豬的病因進(jìn)行確診。

1.2.3.1分離培養(yǎng)。

采取發(fā)病仔豬糞便或剖檢的仔豬小腸前段內(nèi)容物，接種于麥康凱和鮮血瓊脂平板上，37℃連續(xù)培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。

1.2.3.2血清型鑒定。

大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)抗O型血清凝集試驗(yàn)按照使用說明書操作。

1.2.4治療。

感染大腸桿菌約20 h后，各感染組陸續(xù)發(fā)病，病仔豬食欲不振，精神萎靡，排黃色或灰白色稀糞便，腹瀉嚴(yán)重。按各試驗(yàn)組、對(duì)照組設(shè)計(jì)好的用藥劑量、給藥方法進(jìn)行給藥，所有仔豬連續(xù)用藥3 d，停藥后繼續(xù)觀察3 d。用藥期間每天觀察各組臨床癥狀，做好記錄，通過臨床癥狀、病理剖檢變化以及細(xì)菌培養(yǎng)鑒定等確定死因^{［ 8］}。

1.2.5療效判定標(biāo)準(zhǔn)。

痊愈：治療后癥狀消失，體溫、食欲、運(yùn)動(dòng)、二便、精神活動(dòng)等恢復(fù)正常^{［5，9］}。

有效：治療后癥狀明顯減輕，糞便、精神、飲食欲等均有好轉(zhuǎn)，但在 1個(gè)療程（3 d）內(nèi)癥狀未全部消失，繼續(xù)治療可進(jìn)一步好轉(zhuǎn)、痊愈或使用其他藥物輔助治愈^［5，9］。

無效：1個(gè)療程（3 d）后癥狀無明顯改變，出現(xiàn)大腸桿菌典型腹瀉癥狀，或癥狀加劇甚至死亡，可判為無效或死亡^{［5，9］}。

1.2.6數(shù)據(jù)處理。

用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件比較分析各組治愈率和總有效率的差異。

1.2.7急性毒性試驗(yàn)。

20只清潔級(jí)健康Wistar大鼠，雌、雄各半，分開飼養(yǎng)（每籠5只），禁食12 h后分別稱重、編號(hào)、經(jīng)口給藥，按最大染毒劑量5 g/kg進(jìn)行染毒，共灌服1次（約2 mL）。染毒結(jié)束后持續(xù)觀察30 min，并分別于染毒后2 h和4 h各觀察1次，之后每天觀察1次。連續(xù)觀察14 d。觀察期間動(dòng)物自由采食和飲水。觀察期結(jié)束后處死所有存活大鼠，進(jìn)行眼觀病理學(xué)檢查^［10］。

2結(jié)果與分析

2.1病因的確定

2.1.1臨床表現(xiàn)。

藥物試驗(yàn)組、藥物對(duì)照組、感染對(duì)照組仔豬口服配制好的E.coliK88菌液1mL（細(xì)菌計(jì)數(shù)活菌數(shù)不少于5×108個(gè)/mL）約20h后發(fā)病，發(fā)病仔豬出現(xiàn)腹瀉，排灰白色稀糞便，有的仔豬排黃色漿狀糞便，部分仔豬糞便混有氣泡，有腥臭味，發(fā)熱，精神不振，食欲降低，病仔豬消痩有脫水現(xiàn)象。

2.1.2剖檢變化。

剖檢可見仔豬胃擴(kuò)張，胃黏膜紅腫有出血，腸壁薄，腸內(nèi)充滿氣體，腸黏膜卡他性出血性炎癥，少數(shù)有壞死潰瘍斑點(diǎn)，其中以十二指腸最為嚴(yán)重。

2.1.3實(shí)驗(yàn)室診斷。

2.1.3.1分離培養(yǎng)及鏡檢。

待檢菌在血瓊脂平板上產(chǎn)生β溶血環(huán)；在麥康凱培養(yǎng)基上形成中等大小，圓形，表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊的粉紅色小菌落。挑取單個(gè)紅色菌落涂片，革蘭氏染色，鏡檢，可見兩端鈍圓的中等大腸桿菌，有時(shí)近似球形，單獨(dú)散在，不形成長(zhǎng)鏈條，革蘭氏陰性。

2.1.3.2血清型鑒定。

血清型鑒定結(jié)果表明，該待檢菌株為O149。

經(jīng)以上試驗(yàn)證明，發(fā)病仔豬是由感染E.coliK88引起。

2.2治療結(jié)果

人工感染大腸桿菌仔豬20h左右出現(xiàn)臨床癥狀，對(duì)3個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)藥物對(duì)照組按試驗(yàn)設(shè)計(jì)給藥（表1），用藥后第2～3天，4個(gè)給藥組仔豬病情好轉(zhuǎn)，腹瀉次數(shù)減少，糞便顏色逐漸恢復(fù)正常，大部分仔豬食欲開始回升，精神狀況好轉(zhuǎn)，活動(dòng)增加，病情逐漸痊愈。而感染對(duì)照組病情惡化，病情嚴(yán)重仔豬出現(xiàn)脫水死亡，死亡率20%，其他組無死亡。治療結(jié)果見表2。

博落回口服液中劑量組和藥物對(duì)照組的治愈率均為90.0％，博落回口服液高、中劑量組的總有效率均為96.7％，高于藥物對(duì)照組，但二者間差異不顯著（P＞0.05）。博落回口服液低劑量組的效果較差，治愈率為70.0％，總有效率為80.0％，兩者均顯著低于其余各組（P＜0.05）。結(jié)果表明，高、中劑量的博落回口服液對(duì)仔豬腹瀉有較好療效（表2）。

2.3急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

大鼠經(jīng)口染毒劑量達(dá)到5g/kg時(shí)，觀察期內(nèi)所有大鼠精神狀況、活動(dòng)、食欲等正常，無明顯神經(jīng)癥狀，外觀無異常，至觀察期結(jié)束時(shí)20只均存活（表3），且采食、飲水和排便等都正常，未發(fā)現(xiàn)中毒等不良反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)束后剖檢存活大鼠，眼觀病理學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)明顯可見的病理變化。結(jié)果表明，博落回口服液對(duì)大鼠的經(jīng)口染毒LD50大于5g/kg。

3討論與結(jié)論

通過上述試驗(yàn)證明，中劑量的博落回口服液對(duì)仔豬大腸桿菌感染的治愈率在90.0％，中、高劑量組總有效率均為96.7％，高于藥物對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05），且治愈后不復(fù)發(fā)。該研究結(jié)果進(jìn)一步證明了博落回口服液對(duì)仔豬大腸桿菌性腹瀉的有效性優(yōu)于硫酸安普霉素可溶性粉。筆者前期針對(duì)仔豬大腸桿菌感染引起自然發(fā)病的仔豬白痢開展了博落回注射液和博落回口服液對(duì)禽霍亂、仔豬白痢的對(duì)比治療試驗(yàn)，證明博落回口服給藥對(duì)某些消化道疾病的治療效果等于或優(yōu)于注射給藥，且飲水給藥操作簡(jiǎn)便，藥物直接進(jìn)入消化道，吸收更快、更完全，生物利用度高，呈現(xiàn)治療效果也更好，在提取有效成分后制成口服液使用更能發(fā)揮出中草藥治病作用的多效性、雙向性、調(diào)節(jié)性的整體效應(yīng)的特色優(yōu)勢(shì)^［5］。為了更進(jìn)一步研究博落回口服液對(duì)仔豬大腸桿菌性腹瀉的治療效果，該試驗(yàn)對(duì)仔豬采取人工感染致病性大腸桿菌引起發(fā)病后使用博落回口服液進(jìn)行臨床治療試驗(yàn)，其治療結(jié)果再次證明博落回口服液對(duì)仔豬大腸桿菌性腹瀉有較好的效果。

由于博落回辛、苦、溫、有大毒，不作內(nèi)用^［4］。該研究對(duì)博落回口服液開展了急性毒性試驗(yàn)，研究結(jié)果表明，博落回口服液對(duì)大鼠的經(jīng)口染毒LD50大于5 g/kg，內(nèi)服是十分安全的。這應(yīng)與博落回口服液加工制作過程有關(guān)，在提純博落回生物堿過程中一些不良有害成分被分離掉而去除其毒性。

該試驗(yàn)所用博落回口服液主要有效成分為博落回提取物（生物堿），由于博落回提取物難溶于水，且水容液質(zhì)量不穩(wěn)定，易水解失效，從而影響了博落回口服液的治療效果。筆者通過改進(jìn)博落回口服液生產(chǎn)工藝，增加助溶劑和穩(wěn)定劑等，較好地解決了博落回提取物難溶于水和水溶液穩(wěn)定性差的問題。通過以上試驗(yàn)表明，博落回口服液用于治療仔豬大腸桿菌性腹瀉的效果優(yōu)于硫酸安普霉素可溶性粉，使用后是安全可靠的，可用于仔豬大腸桿菌性腹瀉的治療，能獲得較好的治療效果。

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