【摘要】 目的：探討二磷酸腺苷核糖化因子鳥苷酸激酶1（ASAP1）與P53在卵巢高級別漿液性癌（HGSOC）中的表達及臨床病理意義。方法：收集2020年5月—2024年5月江西省婦幼保健院的108例卵巢漿液性腫瘤組織蠟塊標本，根據病理類型分為四組，其中40例HGSOC為A組、28例卵巢低級別漿液性癌為B組、20例卵巢交界性漿液性腫瘤為C組、20例卵巢漿液性囊腺瘤為D組，運用免疫組化Elivision兩步法檢測所有組別中ASAP1和P53的表達，比較不同組別中ASAP1及P53的表達差異；并重點分析A組中ASAP1、P53表達與臨床FIGO分期、淋巴結轉移等臨床病理特征的關系。結果：（1）A組ASAP1及P53陽性率均明顯高于B組、C組及D組，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），B組中ASAP1陽性率明顯高于C組及D組，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）；（2）A組中淋巴結轉移者ASAP1陽性率明顯高于淋巴結無轉移者，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），FIGO Ⅲ、Ⅳ期者ASAP1陽性率明顯高于FIGOⅠ、Ⅱ者，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）；（3）A組中ASAP1與P53表達呈正相關（Plt;0.01）。結論：ASAP1與P53在HGSOC的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用，ASAP1表達與HGSOC的臨床FIGO分期、淋巴結轉移有關，提示ASAP1可能是預測HGSOC生物學行為及預后的潛在指標。

【關鍵詞】 卵巢高級別漿液性癌 二磷酸腺苷核糖化因子鳥苷酸激酶1 P53

Expression and Significance of ASAP1 and P53 in High-grade Serous Ovarian Carcinoma/ZOU Liang， JIE Youkun， GUO Qi. //Medical Innovation of China， 2024， 21（36）： -161

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinicopathological significance of adenosine diphosphate ribosylation factor guanylate kinase 1 （ASAP1） and P53 in high-grade serous ovarian carcinoma （HGSOC）. Method： A total of 108 cases of ovarian serous tumor tissue wax samples from May 2020 to May 2024 in Jiangxi Maternal and Child Health Hospital were collected and divided into four groups according to pathological types， including 40 cases of HGSOC as group A， 28 cases of low-grade ovarian serous cancer as group B， 20 cases of borderline ovarian serous tumor as group C， and 20 cases of ovarian serous cystadenoma as group D. The expression of ASAP1 and P53 in all groups was detected by immunohistochemical Elivision two-step method， and the expression differences of ASAP1 and P53 in different groups were compared. The relationship between the expression of ASAP1， P53 in group A and clinical FIGO stage， lymph node metastasis and other clinicopathological features was analyzed. Result： （1） The positive rates of ASAP1 and P53 in group A were significantly higher than those in group B， group C， and group D， the differences were statistically significant （Plt;0.05）， the positive rate of ASAP1 in group B was significantly higher than that in group C and group D， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. （2） The positive rate of ASAP1 in patients with lymph node metastasis in group A was significantly higher than that in patients without lymph node metastasis， the difference was statistically significant （Plt;0.05）. The positive rate of ASAP1 in patients with FIGO stage Ⅲ， Ⅳ was significantly higher than that in patients with FIGO stage Ⅰ， Ⅱ， the difference was statistically significant （Plt;0.05）. （3） There is a positive correlation between ASAP1 and P53 expression in group A （Plt;0.01）. Conclusion： ASAP1 and P53 play a synergistic role in the occurrence and development of HGSOC， the expression of ASAP1 is related to FIGO staging and lymph node metastasis of HGSOC， suggesting that ASAP1 may be a potential indicator for predicting the biological behavior and prognosis of HGSOC.

[Key words] High-grade serous ovarian carcinoma Adenosine diphosphate ribosylation factor guanylate kinase1 P53

First-author's address： Department of Pathology， Jiangxi Maternal and Child Health Hospital， Nanchang 330038， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.36.037

卵巢癌是常見婦科惡性腫瘤，死亡率居婦科惡性腫瘤第一位[1]，卵巢高級別漿液性癌（high-grade serous ovarian carcinoma，HGSOC）是最主要的組織學類型[2]，因缺乏早期篩查指標，臨床癥狀不明顯，多數患者就診時已到晚期，出現淋巴結及遠處轉移，因此HGSOC早期有效診治是改善預后的重要前提和基礎，但目前尚缺乏有效的早期診斷手段。HGSOC中存在復雜、多樣的驅動基因改變，所以針對HGSOC關鍵驅動基因是研究的重點，P53突變可能是HGSOC主要驅動因素之一[3]。HGSOC是多基因變異導致的腫瘤，只有P53突變不足以導致癌變，還需其他因子協(xié)同作用，二磷酸腺苷核糖化因子鳥苷酸激酶1（adenosine diphosphate ribosylation factor guanylate kinase 1，ASAP1）是一種三磷酸鳥苷酶活化蛋白，主要功能調節(jié)細胞運動和細胞骨架的重構，與腫瘤的轉移密切相關[4-5]。劉亞南等[6]認為，ASAP1高表達致上皮生長因子受體增多，與卵巢癌的進展有關，但目前國內外尚無ASAP1在HGSOC中的研究報道，本研究通過免疫組化法檢測ASAP1及P53在HGSOC蠟塊組織中的表達，分析兩者與HGSOC臨床參數的關系，初步探討ASAP1與P53在HGSOC進展以及預后判斷中的作用。

1 材料與方法

1.1 標本來源和分組

收集2020年5月—2024年5月江西省婦幼保健院住院患者手術切除的108例卵巢漿液性腫瘤組織蠟塊標本，根據病理類型分為四組，包括40例HGSOC（A組）、28例卵巢低級別漿液性癌（B組）、20例卵巢交界性漿液性腫瘤（C組）、20例卵巢漿液性囊腺瘤（D組）。納入標準：A組為HGSOC，B組為卵巢低級別漿液性癌，C組為卵巢交界性漿液性腫瘤，D組為卵巢漿液性囊腺瘤，病理類型均由江西省婦幼保健院兩位婦科病理學專家確診；術前未接受任何治療；A組早期行卵巢癌全面分期手術，晚期行卵巢癌細胞減滅術。排除標準：臨床資料不完整。本研究經江西省婦幼保健院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 方法

標本均經4%的中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，選擇具有代表性的組織蠟塊進行4 μm連續(xù)切片3張，分別用于HE染色、ASAP1及P53免疫組化染色，免疫組化采用Elivision兩步法，所用抗體ASAP1購自美國Abcam公司，P53購自福州邁新公司，每組抗體均設立陽性和陰性對照，免疫組化染色使用LEICA全自動免疫組化染色儀。

1.3 結果判讀標準

ASAP1結果判讀參照文獻[4]。（1）陽性細胞數評分：ASAP1陽性為細胞漿棕色著色，選擇每張切片中任意５個視野中的100個腫瘤細胞，陽性細胞數占比≤5%為0分，陽性占比gt;5%且≤25%為1分，gt;25%且≤50%為2分，gt;50%且≤75%為3分，gt;75%為4分。（2）細胞染色強度評分：染色強度分為4級：細胞漿沒有任何著色為0分，較淺棕色為１分，中等程度棕色為2分，深棕色為3分。兩者乘積作為最終的免疫組化分數，4～9分為陽性。

P53結果判讀參照文獻[7]。P53陽性為棕黃色細胞核染色，檢測結果可出現三種表達模式，（1）錯義突變：P53彌漫一致強陽性細胞核著色（gt;75%腫瘤細胞）；（2）無義突變：P53完全陰性表達或少于5%陽性細胞核著色；（3）野生型：P53強弱不等陽性細胞核著色。其中錯義突變與無義突變納入陽性，野生型納入陰性。

1.4 統(tǒng)計學處理

本研究采用SPSS 27.0統(tǒng)計學軟件，計數資料的表示方式為率（%），進行字2檢驗或Fisher確切概率法進行比較分析，相關性分析采用Spearman等級相關分析，以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 基線資料

A組年齡39～66歲，平均（51.5±6.44）歲；B組年齡29～69歲，平均（51.0±11.08）歲；C組年齡40～67歲，平均（51.7±7.57）歲；D組年齡40～67歲，平均（51.2±7.61）歲；四組的年齡基線資料相比較，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05），具有可比性。A組gt;50歲24例，≤50歲16例；腫瘤單側21例，雙側19例；腫瘤最大直徑：gt;5 cm 27例，≤5 cm 13例；淋巴結轉移22例，淋巴結無轉移18例；FIGOⅠ、Ⅱ期15例，FIGO Ⅲ、Ⅳ期25例。

2.2 ASAP1及P53蛋白表達情況

A組40例中ASAP1陽性者31例（77.50%），見圖1；P53陽性者33例（82.50%），見圖2，B組28例中ASAP1陽性者10例（35.71%），P53陽性者1例（3.57%），C組20例中ASAP1陽性者2例

（10.00%），P53陽性者0例（0），D組20例中ASAP1陽性者1例（5.00%），P53陽性者0例（0）。A組ASAP1及P53陽性率均明顯高于B組、C組、D組，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），B組中ASAP1陽性率明顯高于C組、D組，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。見表1。

2.3 HGSOC中ASAP1、P53蛋白表達與臨床病理參數的關系

HGSOC中淋巴結轉移者ASAP1陽性率明顯高于淋巴結無轉移者，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），FIGO Ⅲ、Ⅳ期者ASAP1陽性率明顯高于FIGO Ⅰ、Ⅱ期者，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），而不同年齡、腫瘤部位、腫瘤最大直徑者中ASAP1陽性率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）。 HGSOC中不同年齡、腫瘤部位、腫瘤最大直徑、FIGO分期、淋巴結是否轉移者中P53陽性率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）。見表2。

2.4 HGSOC中ASAP1及P53蛋白表達相關性

31例ASAP1陽性的HGSOC病例中，P53陽性者29例，而9例ASAP1陰性的HGSOC病例中，P53陰性者5例，Spearman相關性分析發(fā)現，兩者呈正相關（rs=0.855，Plt;0.01）。

3 討論

卵巢癌是目前死亡率最高的婦科惡性腫瘤，5年生存率僅為39%[8]，HGSOC是最常見的病理類型，發(fā)現時多為晚期，大多數患者生存期不足2年，并且易產生耐藥，預后差[3]，因此HGSOC的早診斷和靶向治療的研究顯得尤為重要。由于驅動基因改變是腫瘤的主要致病因素，以驅動基因為靶點殺傷腫瘤細胞更易獲得成功，腫瘤基因組圖譜數據顯示，HGSOC中存在復雜、多樣的驅動基因改變，包括基因突變、缺失、擴增等，HGSOC驅動基因的分子功能、促癌機制、診斷、靶向治療是近年來研究的熱點[3，9]。

P53突變（即正常P53功能的喪失）在所有類型腫瘤中的發(fā)生率為50%，P53突變不僅影響細胞周期進程，細胞生長和存活，還促進癌細胞的侵襲，P53突變在HGSOC中比率高達96%，可能是HGSOC主要驅動因素之一[3]。突變的P53蛋白具有抗原性，可成為免疫治療的靶點，但不同突變類型P53蛋白表達水平不同，不同突變的免疫原性也不同，成為免疫治療的難點[10]，而且只有P53突變不足以導致癌變，還需要其他因子協(xié)同作用，因此急需探索新的分子生物診斷指標和治療靶點。

我們前期通過癌癥基因組圖譜（the cancer genome atlas，TCGA）數據庫檢索發(fā)現：ASAP1在人類多種惡性腫瘤中有不同程度的擴增，在卵巢癌中有31.8%的擴增。ASAP1是ADP-核糖基化因子GTP 酶活化蛋白，其基因位于8q24，含有PH、SH3、Ank重復的結構域，主要調節(jié)細胞的運動和細胞骨架的重構，ASAP1過表達促進細胞黏附和遷移，表達缺失則抑制細胞偽足形成和遷移[11]。一些信號通路已被證實參與了ASAP1介導的腫瘤侵襲，Zhang等[12]研究發(fā)現ASAP1在非小細胞肺癌中通過調控PTEN/AKT信號通路促進癌細胞的增殖、侵襲和轉移。Jiang等[13]研究證實敲除ASAP1可通過抑制mTOR信號通路誘導甲狀腺乳頭狀癌的自噬。近幾年研究表明ASAP1在肺癌、乳腺癌、胃癌等多種惡性腫瘤中高表達，并與腫瘤侵襲轉移密切相關，可作為腫瘤的標記物和治療靶點[12，14-17]。Zhang等[18]研究表明ASAP1的過表達能夠促進卵巢癌細胞存活和增殖，并能夠抑制化療藥物紫杉醇誘導的癌細胞凋亡，通過促進癌細胞的上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）過程，促進癌細胞遷移和侵襲。Hou等[19]研究認為，ASAP1高表達在卵巢癌的進展和轉移中起重要作用，可用作預測卵巢癌患者預后的腫瘤標志物，HGSOC作為卵巢癌中的高度惡性腫瘤之一，目前尚未見ASAP1在HGSOC中的獨立研究報道。

卵巢漿液性癌包含了HGSOC和低級別漿液性癌，它們具有各自的組織學形態(tài)、分子基因改變和臨床生物學行為，低級別漿液性癌由良性漿液性囊腺瘤和交界性漿液性腫瘤發(fā)展而來，預后較好，而HGSOC除了極少數由伴P53突變的低級別漿液性癌轉化而來，大多來源于輸卵管傘端的漿液性上皮內癌，惡性程度高，進展較快，發(fā)現時多為臨床Ⅲ～Ⅳ期，預后較差。本研究結果顯示，HGSOC中ASAP1陽性率明顯高于卵巢低級別漿液性癌、交界性漿液性腫瘤及漿液性囊腺瘤，而卵巢低級別漿液性癌中ASAP1陽性率明顯高于卵巢交界性漿液性腫瘤和卵巢漿液性囊腺瘤，表明ASAP1的表達與卵巢漿液性腫瘤惡性程度密切相關，ASAP1過表達在HGSOC的發(fā)生發(fā)展起著重要作用。HGSOC中P53表達顯著高于其余三組，而其余三組所有病例中僅低級別漿液性癌組中1例顯示P53陽性，提示P53是HGSOC發(fā)生發(fā)展的主要驅動基因之一，而且這1例同時表達ASAP1，提示可能會向HGSOC轉化，我們會對這例患者進行長期隨訪觀察。

最新研究表明P53突變可通過激活ARF6-ASAP1途徑上調ASAP1水平，促進惡性腫瘤的侵襲和轉移，而正常P53可抑制癌細胞和正常上皮細胞中的ASAP1mRNA[20-21]。值得關注的是，我們的研究表明ASAP1和P53在HGSOC均呈高表達，且表達呈正相關，提示兩者在HGSOC的侵襲和轉移中發(fā)揮著重要的協(xié)同作用。

本研究還證實HGSOC中ASAP1表達與臨床FIOG分期及淋巴結轉移密切相關，提示ASAP1過表達可能增強HGSOC侵襲轉移的能力，而P53表達與臨床FIOG分期及淋巴結轉移無明顯相關性，提示ASAP1對預測HGSOC的侵襲轉移及預后評估的價值可能優(yōu)于P53，綜上所述，ASAP1對于評估HGSOC的惡性程度、預測淋巴結轉移及臨床分期有重要意義，聯合ASAP1與P53檢測對HGSOC早期診斷篩查及預后評估有重要的參考價值，后續(xù)的研究中我們將收集更多的HGSOC病例并進行持續(xù)隨訪，探討ASAP1及P53表達與患者臨床表現、對化療的敏感性及預后的關系，為更好地進行HGSOC診斷、預測和靶向藥物提供新的研究方向。

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（收稿日期：2024-11-01） （本文編輯：田婧）