摘要：綿羊和山羊均易感染羊口瘡，羊口瘡在羔羊中通常呈現(xiàn)群體性發(fā)病。感染該病主要特征為唇、外陰等部位皮膚及黏膜出現(xiàn)丘疹、潰瘍、膿皰，病程較長(zhǎng)者形成疣狀結(jié)痂。2023年春季，在臨床發(fā)現(xiàn)一例山羊口唇、乳房皮膚膿皰、結(jié)痂，嚴(yán)重的融合成大面積的黑色凸起斑塊，經(jīng)過(guò)采集結(jié)痂病料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診為羊口瘡。

關(guān)鍵詞：山羊；羊口瘡；傳染；防治

1 羊口瘡病毒特性

羊口瘡病毒屬于痘病毒科副痘病毒屬，有囊膜。自然環(huán)境中該病毒非常穩(wěn)定，能夠在羊舍長(zhǎng)期存在，干痂中病毒可以存活幾個(gè)月甚至幾年，冰箱中保存3年仍具有傳染性；散落于地面的病毒在寒冷冬季仍能存活，次年春天仍可感染宿主。

病毒不耐高溫，60 ℃ 30 min、65 ℃ 2 min均可將其殺死，羊口瘡病毒對(duì)含氯消毒劑和苯酚等敏感，紫外線處理可以滅活該病毒。

2 流行特點(diǎn)

羔羊較成年羊更加容易受到羊口瘡病毒感染且多群發(fā)，而成年羊多零星發(fā)病。本病多發(fā)生于春秋季節(jié)。病羊、帶毒羊?yàn)橹饕獋魅驹?，受損的皮膚或黏膜為其主要感染途徑，發(fā)病的羔羊通過(guò)吸吮乳汁可以傳染給母羊。

3 臨床癥狀

2023年2月初到5月底，在正定縣南崗鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)一例山羊口瘡病例，共有20多只母羊和約30只羔羊發(fā)病，體溫40.2～40.7 ℃，精神沉郁，少食或不食，離群呆立。

羔羊首先在口腔、齒齦、上下眼瞼、鼻腔的皮膚上出現(xiàn)小米粒至黃豆粒大的水皰，繼而變成黑色結(jié)痂，發(fā)病嚴(yán)重的羊只口腔流涎、眼瞼粘連；嚴(yán)重的2只羔羊因無(wú)法進(jìn)食和飲水而脫水死亡。母羊也是首先在口腔（圖1）、鼻部皮膚出現(xiàn)黃豆粒大水皰，發(fā)病嚴(yán)重的羊只口腔流涎；乳房皮膚上出現(xiàn)小紅點(diǎn)，繼而變成膿皰，再而融合成較大的黑色片狀結(jié)痂（圖2）。

經(jīng)詢問(wèn)，發(fā)病羊場(chǎng)現(xiàn)存欄波爾山羊53只、奶山羊30只，奶山羊和波爾山羊混合圈養(yǎng)，自2018年至今一直自繁自養(yǎng)。冬春季節(jié)主要飼喂干樹(shù)葉、干花生秧、干紅薯秧、干胡蘿卜秧，搭配飼喂胡蘿卜、玉米、麩皮；夏秋季節(jié)主要飼喂新鮮青草、樹(shù)葉和玉米、麩皮；礦物質(zhì)和微量元素?cái)z入以羊只舔食鹽磚方式提供。春秋兩季使用阿苯達(dá)唑、伊維菌素各驅(qū)蟲(chóng)1次；每7天消毒1次，消毒藥品定期輪換；口蹄疫、山羊痘、小反芻獸疫、羊三聯(lián)四防滅活疫苗和布魯氏菌病、羊敗血性鏈球菌病菌苗均按照獸醫(yī)推薦免疫程序（見(jiàn)表1）正常接種，未接種羊口瘡疫苗。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 材料與方法

1）試劑盒。96孔病毒DNA試劑盒購(gòu)自長(zhǎng)沙海揚(yáng)生物科技有限公司。

2）引物設(shè)計(jì)。依據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的ORFV基因序列設(shè)計(jì)引物，具體見(jiàn)表2。

3）病毒核酸提取。根據(jù)病毒DNA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。具體步驟如下：

①取100 mg病料，加入1 mL緩沖PBS，用玻璃勻漿器勻漿；14 000×g

離心3 min，轉(zhuǎn)移250 μL上清液至1.5 mL離心管中。

②加入20 μL蛋白酶、3 μL Carrier RNA和250 μL Buffer ACL，渦旋混勻15 s，55 ℃水浴10 min。

③加入250 μL無(wú)水乙醇，渦旋混勻15 s。

④把DNA柱裝入收集管，轉(zhuǎn)移混合液至柱子中，13 000×g離心1 min，倒棄流出液。

⑤倒棄流出液，把柱子裝回收集管中，加入500 μL用乙醇稀釋的Buffer GW1至柱子中，13 000×g離心1 min。

⑥倒棄濾液，把柱子重新裝回收集管中，加入600 μL用乙醇稀釋的Buffer GW2至柱子中，13 000×g離心1 min；重復(fù)操作1次。

⑦倒棄濾液，把柱子重新裝回收集管中，13 000×g離心空柱3 min以徹底去除柱子中殘留的乙醇。

⑧將柱子轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中，加入50 μL預(yù)熱至56 ℃洗脫緩沖液至柱子的膜中央，靜置3 min，13 000×g離心1 min，將洗脫下的DNA -20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4）PCR檢測(cè)。在25 μL體系里，按照比例加入DNA，2×TaqPCR Mix，引物（10 uM）和dd H2O；94 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性1 min、36 ℃復(fù)性1 min、72 ℃延伸1.5 min，執(zhí)行30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min。同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照。反應(yīng)完成后，取5 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳。

4.2 結(jié)果

按照上述條件進(jìn)行ORFV擴(kuò)增，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增產(chǎn)物條帶大小為1 137 bp（圖3）。回收PCR產(chǎn)物，經(jīng)連接轉(zhuǎn)化后測(cè)序證實(shí)，擴(kuò)增產(chǎn)物均為ORFV特異性核酸片段。

5 確診

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室PCR檢測(cè)確診為羊口瘡。

6 綜合防制措施

6.1 預(yù)防措施

1）勿從發(fā)病地區(qū)引進(jìn)羊只或購(gòu)進(jìn)飼料，新引進(jìn)的羊需要隔離觀察14～21 d，證明無(wú)病后才可以混進(jìn)大群飼養(yǎng)。

2）因羊口瘡病毒具有嗜上皮特性，所以要盡量避免羊的皮膚、黏膜損傷：羊舍墻壁和飼養(yǎng)用器具光滑、無(wú)毛刺；飼料中不含鐵絲、芒刺等尖銳物質(zhì)，并加入礦物質(zhì)、微量元素以免羊異嗜咬傷；飼料中加入富含維生素A、維生素E、維生素C的復(fù)合維生素、黃芪多糖等提高免疫力，尤其是增強(qiáng)黏膜免疫力，以減少感染機(jī)會(huì)。

6.2 疫苗接種

頻繁發(fā)生感染的地區(qū)和羊場(chǎng)，使用羊口瘡活疫苗免疫接種，在健康羊的股內(nèi)側(cè)劃痕免疫，通常接種10 d后便可形成有效的免疫保護(hù)，保護(hù)期為3個(gè)月，要及時(shí)加強(qiáng)免疫。

6.3 消毒隔離

平時(shí)要做好養(yǎng)殖者與羊舍的消毒工作，減少病毒感染機(jī)會(huì)。

因羊口瘡為接觸傳播的傳染病，如果發(fā)現(xiàn)羊口瘡感染或者疑似感染，需要迅速做好隔離工作，高度接觸的畜主或者獸醫(yī)工作者不能繼續(xù)工作，以免傳染其他羊只；由于病毒抵抗力較強(qiáng)，對(duì)確診羊口瘡病例的圈舍、器具、車輛、排泄物要選擇高效消毒劑徹底消毒。

6.4 藥物治療

對(duì)發(fā)病的羊只要做到早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，有效降低大群暴發(fā)和死亡率。本病沒(méi)有特異性治療藥物，主要是采用對(duì)癥治療和防止繼發(fā)感染。3個(gè)月以內(nèi)羔羊可以靜脈注射治療；日齡較大的羊只可以采用青霉素、安痛定、復(fù)合維生素、黃芪多糖等藥物肌內(nèi)注射；口腔、眼瞼、乳房等破潰、結(jié)痂處涂抹聚維酮碘溶液。臨床實(shí)踐證明采用上述方案治療，大部分病羊10～15 d后治愈。

7 羊口瘡類癥鑒別

7.1 羊口炎

羊口炎不具有傳染性，所以一般為散發(fā)；羊口瘡具有傳染性，尤其是羔羊，多為群體發(fā)病。羊口炎發(fā)病后口腔黏膜僅會(huì)出現(xiàn)水皰、潰瘍，不結(jié)痂；羊口瘡結(jié)痂。

7.2 羊口蹄疫

口蹄疫在羊的蹄部有病變，而羊口瘡很少導(dǎo)致羊蹄部病變；在口蹄疫發(fā)病初期患病羊體溫就會(huì)升高，而單純的羊口瘡不會(huì)出現(xiàn)高燒癥狀。

7.3 羊痘

羊痘的痘疹結(jié)節(jié)突出、界限明顯，分布于全身各處；而羊口瘡的痘疹僅在嘴唇或外陰處。羊痘往往會(huì)伴隨有體溫升高，而單純的羊口瘡不會(huì)出現(xiàn)高燒癥狀。

8 總結(jié)與討論

8.1 重視皮膚和黏膜完整性在防制羊口瘡中的重要作用

皮膚和黏膜是動(dòng)物機(jī)體抵抗疾病的第一道防線，能夠?qū)雇饨?5%以上的病原微生物的侵襲。皮膚廣泛覆蓋在身體表面，由多層鱗狀上皮細(xì)胞構(gòu)成，并通過(guò)間質(zhì)緊密連接在一起，完整的皮膚僅允許水分、氣體等小分子物質(zhì)進(jìn)出，病毒、細(xì)菌等病原微生物通常不能夠通過(guò)完整的皮膚入侵體內(nèi)；黏膜是動(dòng)物機(jī)體表面積最大的免疫組織，是機(jī)體與外界接觸最廣泛的部位，是大多數(shù)病原微生物入侵機(jī)體的門戶，95%以上傳染病的病原微生物都由黏膜入侵機(jī)體。皮膚和黏膜的完整性和免疫狀況是決定動(dòng)物機(jī)體是否被病原微生物感染并入侵的重要因素——當(dāng)黏膜完整、無(wú)損傷及免疫功能正常時(shí)，病原微生物就不容易入侵機(jī)體或入侵?jǐn)?shù)量較少，反之則容易受到病原微生物大量入侵而發(fā)??！

防制羊口瘡，一方面要保護(hù)皮膚和黏膜、維護(hù)皮膚和黏膜的完整性；另一方面羊口瘡病毒會(huì)直接損害羊的皮膚和黏膜，在確診后注意修復(fù)受損傷的黏膜，減少繼發(fā)感染、并發(fā)感染，促進(jìn)康復(fù)；還有通過(guò)增加黏膜免疫細(xì)胞數(shù)量和功能，促使其產(chǎn)生分泌型免疫球蛋白A（sIgA）等免疫活性物質(zhì)來(lái)提高黏膜的免疫力。

維生素A是維持皮膚和黏膜上皮細(xì)胞發(fā)育和完整性、促進(jìn)皮膚和黏膜再生的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，具有保護(hù)皮膚和黏膜上皮細(xì)胞健全和完整、促進(jìn)皮膚和黏膜的發(fā)育再生、促進(jìn)結(jié)締組織中黏多糖的合成、維護(hù)細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜結(jié)構(gòu)的完整、改變細(xì)胞膜和溶菌膜的穩(wěn)定性等功能，同時(shí)維生素A又能促進(jìn)黏膜免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞功能，促進(jìn)sIgA等免疫活性物質(zhì)產(chǎn)生；當(dāng)維生素A不足時(shí)黏多糖合成受阻，黏膜上皮干燥和過(guò)度角化，使黏膜易被病原微生物感染。維生素E可作為細(xì)胞內(nèi)生理性抗氧化劑，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性。維生素C清除自由基，避免發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞膜，維護(hù)黏膜的完整性。這就是在防制羊口瘡時(shí)加入大劑量復(fù)合維生素的道理所在。

8.2 重視防止繼發(fā)感染

由于黏膜遭受破壞，會(huì)增加經(jīng)黏膜感染疾病的發(fā)生機(jī)會(huì)，如本病中后期往往會(huì)繼發(fā)壞死桿菌等感染，所以在治療過(guò)程中使用青霉素等抗生素十分必要。

8.3 重視選擇高效消毒劑徹底消毒

由于病毒抵抗力較強(qiáng)，羊口瘡可在羊群中連年發(fā)病，所以一旦確診，應(yīng)對(duì)圈舍、器具、車輛、排泄物要選擇高效消毒劑徹底消毒。

8.4 做好個(gè)人防護(hù)

羊口瘡屬于人畜共患病，在接觸病羊或者疑似病羊時(shí)，飼養(yǎng)員、獸醫(yī)應(yīng)做好個(gè)人防護(hù)，如穿戴防護(hù)服、手套、口罩等，如果人皮膚破潰，避免接觸病羊。