摘要：口蹄疫嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的健康發(fā)展和人身健康，危害公共衛(wèi)安全，對(duì)口蹄疫病毒的檢測(cè)方法有多種，但使用準(zhǔn)確快捷的檢測(cè)方法鑒別感染活病毒和注射滅活疫苗動(dòng)物，防止FMD的發(fā)生、活畜檢疫等方面都是十分必要的，采用非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體間接ELESA試驗(yàn)進(jìn)行口蹄疫監(jiān)督檢驗(yàn)，對(duì)生豬口蹄疫免疫信息能夠作出正確的判斷，對(duì)免疫工作具有積極的推動(dòng)作用。

關(guān)鍵詞：生豬；宰前；檢測(cè)技術(shù)；探究

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒導(dǎo)致的以偶蹄動(dòng)物（牛、水牛、牦牛、綿羊、山羊、豬及所有野生反芻和豬科）為主均易感染的一種急性、熱性高度傳染性疫病，為人畜共患病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布明確規(guī)定《一、二、三類動(dòng)物疫病病種名錄》為一類傳染病及《人畜共患傳染病》中列為人畜共患病?？谔阋咴趪?guó)際貿(mào)易中被世界各國(guó)所關(guān)注，影響國(guó)際貿(mào)易的往來(lái)。

1 口蹄疫的流行病學(xué)

口蹄疫于1514年首次在意大利發(fā)現(xiàn)，口蹄疫傳播快發(fā)病率高，易造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，曾廣泛流行于世界各國(guó)，一般幼畜的易感性較老畜大，特別是哺乳的犢牛和仔豬常呈惡性，死亡率較高，病畜是主要傳染源，甚至在出現(xiàn)癥狀前帶病排毒，可通過(guò)分泌物、排泄物排毒，特別是發(fā)病初期排毒量最大、毒力最強(qiáng)，病豬以破潰的蹄水泡皮病毒最多，其次是呼出的氣體、糞便，甚至豬牛精液也含有病毒，并能傳染疾病，本病的感染途徑主要是消化道，特別是口腔黏膜，此外還可經(jīng)眼結(jié)膜、鼻黏膜、乳管、外生殖器黏膜以及損傷的皮膚而感染。病畜及其產(chǎn)品的流動(dòng)調(diào)運(yùn)，被污染的車船、水源、牧地、飼養(yǎng)工具、飼料等以及人員和非易感動(dòng)物都是重要的傳播媒介，空氣也是一種傳播媒介，近年來(lái)隨著我國(guó)畜牧業(yè)和對(duì)外貿(mào)易的發(fā)展，口蹄疫暴發(fā)流行的危險(xiǎn)也相應(yīng)增加。

2 口蹄疫的危害和對(duì)其防控措施

動(dòng)物的疫病是影響其產(chǎn)品質(zhì)量安全的重要因素，動(dòng)物疫病、特別是重大動(dòng)物疫病及人畜共患病一直被認(rèn)為是威脅人類生存與健康，阻礙社會(huì)及經(jīng)濟(jì)發(fā)展的最主要危害之一。動(dòng)物疫病的防治是關(guān)系到國(guó)家食品安全和公共衛(wèi)生安全， 動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)工作是貫徹落實(shí)《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》，全面提升獸醫(yī)公共衛(wèi)生服務(wù)和為社會(huì)負(fù)責(zé)的服務(wù)水平，口蹄疫高致病禽流感等16種是我國(guó)優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病，加強(qiáng)重大動(dòng)物疫病和人畜共患病的防控，強(qiáng)化風(fēng)險(xiǎn)管理，強(qiáng)化源頭防治，從而有效的控制、凈化、消滅重點(diǎn)疫病。對(duì)重點(diǎn)動(dòng)物疫病的監(jiān)測(cè)工作，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定頒布了《國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃（2021—2025）》（農(nóng)牧發(fā)〔2021〕11號(hào)）、《全國(guó)畜間人畜共患病防治規(guī)劃》（2022—2030），省、市縣都做出了部署，要求做好動(dòng)物疫病的普查和監(jiān)測(cè)工作，為人畜健康和畜牧業(yè)發(fā)展及社會(huì)經(jīng)濟(jì)可持續(xù)性發(fā)展的重要保證。加強(qiáng)動(dòng)物疫病的防控，做好人畜共患病的源頭監(jiān)管，保證畜牧業(yè)生產(chǎn)安全、公共安全和國(guó)家生物安全，推動(dòng)構(gòu)建人類衛(wèi)生健康共同體，為獸醫(yī)衛(wèi)生事業(yè)全面融入國(guó)家公共衛(wèi)生體系，推動(dòng)畜間人畜共患病防治工作，落實(shí)關(guān)鍵防治措施，實(shí)施科學(xué)精準(zhǔn)防治和有效防控。重大動(dòng)物傳染病嚴(yán)重影響了動(dòng)物源性食品衛(wèi)生與獸醫(yī)公共衛(wèi)生，認(rèn)識(shí)、研究動(dòng)物傳染病的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)，并充分發(fā)揮獸醫(yī)公共衛(wèi)生的第一防線作用，諸城市嚴(yán)格執(zhí)行《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》《重大動(dòng)物疫情應(yīng)急條例》《病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)范》和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定的各種動(dòng)物疫病防治技術(shù)規(guī)范，加強(qiáng)動(dòng)物傳染病的監(jiān)測(cè)，通過(guò)監(jiān)測(cè)信息平臺(tái)隨時(shí)掌握動(dòng)物傳染?。òㄈ诵蠊不疾。┓植技傲餍星闆r，以便及時(shí)制定必要的防治措施，對(duì)病害動(dòng)物及其產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)害化處理，避免傳播、蔓延，同時(shí)為制定科學(xué)管理方法和措

施提供依據(jù)，對(duì)保障畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的健康都有十分重要的意義。

我國(guó)一直高度重視口蹄疫疫病的防控工作，積極開(kāi)展防制，采取“早、快、嚴(yán)、小”的措施，為做好動(dòng)物疫病的防控、凈化、撲滅工作，出臺(tái)了法律法規(guī)和有關(guān)規(guī)定，如《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》《口蹄疫疫病防治技術(shù)規(guī)范》《突發(fā)重大動(dòng)物疫情應(yīng)急預(yù)防案》等，為了做好口蹄疫疫病的早發(fā)現(xiàn)、早處理，國(guó)內(nèi)外科技研究人員經(jīng)過(guò)多年來(lái)的努力，將口蹄疫診斷技術(shù)從最早的病毒分離鑒定到血清學(xué)試驗(yàn)再到分子生物學(xué)技術(shù)，逐漸實(shí)現(xiàn)敏感特異、快捷方便，又經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)技術(shù)[1]。諸城市是全國(guó)畜牧養(yǎng)殖業(yè)大市，2023年諸城市已連續(xù)十七年榮獲全國(guó)生豬調(diào)出大縣榮譽(yù)稱號(hào)，其中全市生豬存欄126.6萬(wàn)頭、出欄261萬(wàn)頭，諸城有7家生豬屠宰企業(yè)，年屠宰生豬近400萬(wàn)頭。口蹄疫是一種對(duì)人畜危害嚴(yán)重的重大動(dòng)物疫病，傳播迅速快，可形成大流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，并影響當(dāng)?shù)氐牡胤浇?jīng)濟(jì)發(fā)展，造成社會(huì)的恐慌和威脅著人身健康，給人民生活造成困難。在某些流行過(guò)程中口蹄疫病毒還可發(fā)生變異，也給防控和消毒帶來(lái)困難。為此，諸城市畜牧業(yè)發(fā)展中心作為諸城市畜禽屠宰行業(yè)主管單位，為保證進(jìn)入流通市場(chǎng)的畜產(chǎn)品質(zhì)量，確保屠宰企業(yè)出廠的產(chǎn)品質(zhì)量安全，加強(qiáng)動(dòng)物疫病監(jiān)督檢測(cè)，到目前為止，諸城市屠宰企業(yè)出廠的產(chǎn)品未發(fā)生過(guò)質(zhì)量安全事件。

3 生豬宰前口蹄疫的優(yōu)選檢測(cè)方法及應(yīng)用

口蹄疫檢測(cè)方法分為病原學(xué)檢測(cè)法和血清學(xué)檢測(cè)法。病原學(xué)主要檢測(cè)法：ELISA（OIE標(biāo)準(zhǔn)方法）、RT-PCR、RIHA和病毒分離鑒定；血清學(xué)主要檢測(cè)法：中和試驗(yàn)、液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、非結(jié)構(gòu)蛋白ELISA檢測(cè)法、IHA。諸城市充分發(fā)揮科技引領(lǐng)作用，緊跟時(shí)代的發(fā)展，不斷學(xué)習(xí)國(guó)內(nèi)外先進(jìn)的動(dòng)物疫病防控技術(shù)和措施，對(duì)動(dòng)物疫病的檢測(cè)方法進(jìn)行試驗(yàn)比對(duì)，探討快速、方便、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)、最適宜的動(dòng)物疫病的檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)方法，為保證屠宰動(dòng)物及其產(chǎn)品質(zhì)量安全合格做出了應(yīng)有的貢獻(xiàn)，根據(jù)試驗(yàn)比對(duì)分析和具體實(shí)際工作，最終確定生豬宰前口蹄疫病毒檢測(cè)最佳的方法為3ABC-I-ELISA試驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)。非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體間接ELESA檢測(cè)方法不但可以檢測(cè)隱性感染動(dòng)物，而且可以區(qū)分感染動(dòng)物和免疫動(dòng)物，將感染動(dòng)物和隱性帶毒動(dòng)物與疫苗免疫動(dòng)物加以區(qū)分，能夠?qū)Ξa(chǎn)地動(dòng)物口蹄疫免疫和感染情況作出評(píng)價(jià)，為口蹄疫的防控工作提供科學(xué)的依據(jù)。在對(duì)生豬屠宰企業(yè)入場(chǎng)的生豬進(jìn)行動(dòng)物疫病的監(jiān)督檢驗(yàn)中，做到逢宰必檢，確保所屠宰的生豬健康，出廠的產(chǎn)品合格。諸城市畜牧業(yè)發(fā)展中心嚴(yán)格按照《動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法》標(biāo)準(zhǔn)NYT541—2002和《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)范》等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范對(duì)全市7家生豬屠宰企業(yè)所屠宰的400多萬(wàn)頭生豬按批次5%的比例抽檢（每批次至少抽檢2頭）。樣品制備取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，無(wú)溶血。采用非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體間接ELESA試驗(yàn)進(jìn)行口蹄疫監(jiān)督檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果合格。其具體試驗(yàn)操作方法步驟：所用的主要儀器是恒溫培養(yǎng)箱ZCXMJC/YB-021、移液器ZCXMJC/YB-029、酶標(biāo)儀ZCXMJC/YB-022；檢驗(yàn)依據(jù)為本實(shí)驗(yàn)室作業(yè)指導(dǎo)書；主要操作步驟是在血清稀釋板上將待檢血清和陽(yáng)性、陰性對(duì)照按1∶21倍稀釋，陰、陽(yáng)對(duì)照血清平行加兩孔，混勻；取出反應(yīng)板，標(biāo)記號(hào)樣品和對(duì)照的位置；將樣品和陰陽(yáng)血清按次序轉(zhuǎn)移至ELISA板上，每孔100 μL，37 ℃結(jié)合30 min；取掉封板膜，每孔加滿洗滌液，洗滌5次，最后一次拍干；每孔加入1∶100的酶標(biāo)抗體100 μL，封板，37 ℃結(jié)合30 min；取掉封板膜，每孔加滿洗滌液，洗滌5次，最后一次拍干；每孔加入100 μL底物，封板，37 ℃避光作用15 min；每孔加入100 μL終止液，測(cè)定波長(zhǎng)450 nm吸光值。結(jié)果判定方法和依據(jù)是陽(yáng)性對(duì)照平均值應(yīng)＞0.6，陰性對(duì)照平均OD值應(yīng)＜0.2，此次試驗(yàn)成立。樣品效價(jià)＝（OD樣品-OD陰性）/（OD陽(yáng)性-OD陰性）。效價(jià)＜0.2，為陰性；效價(jià)介于0.2～0.3之間為可疑；效價(jià)＞0.3為陽(yáng)性[2]。

采用非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體間接ELESA試驗(yàn)進(jìn)行口蹄疫監(jiān)督檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果合格。檢驗(yàn)報(bào)告舉例如圖1。

4 結(jié)語(yǔ)

我國(guó)近幾年來(lái)未發(fā)生A型口蹄疫，2022年我國(guó)口蹄疫以O(shè)型為主，疫情風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)主要存在免疫環(huán)節(jié)，對(duì)口蹄疫疫情的監(jiān)測(cè)是預(yù)防疫情發(fā)生和流行的必要措施和方法，能夠?qū)ι罂谔阋呙庖叱尚ё鞒鲈u(píng)價(jià)，采用有效的口蹄疫病毒檢測(cè)技術(shù)方法是關(guān)鍵，檢測(cè) FMDV 非結(jié)構(gòu)蛋白 3ABC 抗體的 ELISA 方法不但可以檢測(cè)隱性感染動(dòng)物，而且可以區(qū)分感染動(dòng)物和免疫動(dòng)物。諸城市嚴(yán)格執(zhí)行農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)范》加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，按要求儀器設(shè)施配備標(biāo)準(zhǔn)配齊了儀器設(shè)備，建立和完善動(dòng)物疫病診斷和監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室，并達(dá)到國(guó)家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)，能夠按照國(guó)家、省、市動(dòng)物疫病普查和監(jiān)測(cè)方案的要求積極開(kāi)展工作，加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰廠動(dòng)物疫病的診斷和監(jiān)測(cè)及動(dòng)物疫情分析評(píng)估。

參考文獻(xiàn)：

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