【摘 要】目的：泛素特異性蛋白酶53（ubiquitin-specific protease 53，USP53）在結(jié)直腸癌（colon adenocarcinoma，COAD）中的臨床意義和潛在機制尚不清楚。本研究采用生物信息學(xué)結(jié)合體外細胞學(xué)實驗，觀察USP53對結(jié)直腸癌細胞的抗癌作用。方法：分析來自TCGA-COAD和GEO數(shù)據(jù)庫（GSE39582數(shù)據(jù)集）的USP53表達數(shù)據(jù)。通過KEGG、GO和GSEA富集分析，探討USP53可能參與的生物過程和信號通路。通過免疫浸潤分析、藥物敏感性分析結(jié)合CLUE平臺和分子對接技術(shù)，預(yù)測潛在可用于治療的小分子化合物。通過10種機器學(xué)習(xí)算法和101種集成組合構(gòu)建預(yù)后預(yù)測模型，通過體外實驗驗證USP53的生物功能。結(jié)果：USP53在COAD中具有抗腫瘤作用，低表達與較差的預(yù)后相關(guān)（Plt;0.05）。免疫浸潤分析顯示USP53低表達組有更高的免疫浸潤水平，以及更高的TIDE和功能障礙評分（Plt;0.01）。體外實驗表明，USP53過表達抑制了腫瘤細胞的增殖和遷移（Plt;0.05），并抑制了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）。結(jié)論：USP53通過影響EMT、凋亡、細胞周期調(diào)控和腫瘤免疫逃逸等機制發(fā)揮抗腫瘤作用，可能成為COAD的新型預(yù)后標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】泛素特異性蛋白酶53；結(jié)直腸癌；生物信息學(xué)；預(yù)后分析

【中圖分類號】R735.3 【文獻標(biāo)志碼】A 【收稿日期】2024-10-31

結(jié)直腸癌（colon adenocarcinoma，COAD）是全球第三大常見癌癥，也是癌癥相關(guān)死亡的第二大原因[1]。目前，東歐、亞洲和南美洲，COAD的發(fā)病率和死亡率正在急劇上升[2]。預(yù)計到2035年，全球?qū)⑿略?50萬例COAD病例[3-4]。在過去的十年中，盡管手術(shù)、化療、靶向治療和免疫治療明顯提高了COAD患者的生存率，但早期篩查和診斷的局限，致使這種疾病仍然是全球健康領(lǐng)域的一大挑戰(zhàn)?；颊叩念A(yù)后普遍較差，且復(fù)發(fā)率依然居高不下[5]。因此，識別新的治療靶點和預(yù)后標(biāo)志物對于改善COAD患者的臨床結(jié)局至關(guān)重要。

研究發(fā)現(xiàn)，COAD的發(fā)生與泛素化和去泛素化酶的異常表達和活性失常密切相關(guān)[6-7]。泛素特異性蛋白酶53（ubiquitin-specific protease 53，USP53）是一種去泛素化酶，被發(fā)現(xiàn)參與膽汁淤積、聽力損失以及促進人骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化[8-11]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)USP53作為一種抑癌基因發(fā)揮作用[12-13]。然而，其在COAD 中的作用仍不明確。在本研究中，利用生物信息學(xué)方法分析了TCGA-COAD和GSE39582數(shù)據(jù)集，探討了USP53在結(jié)直腸癌中的潛在作用，并通過細胞實驗驗證了其生物學(xué)功能。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)獲取與處理

從GEO（GSE39582）和TCGA（TCGA-COAD）數(shù)據(jù)庫下載了轉(zhuǎn)錄組和臨床數(shù)據(jù)。GSE39582數(shù)據(jù)集包括19個健康結(jié)腸組織樣本和566 個結(jié)直腸癌組織樣本。TCGA-COAD數(shù)據(jù)集包含41個健康組織樣本和480個結(jié)直腸癌組織樣本。

1.2 Kaplan-Meier曲線分析

采用“survminer”包中的surv_cutpoint函數(shù)確定最佳cutoff值，將樣本分為USP53高表達組和低表達組。隨后，通過“survival”包對分組進行l(wèi)og-rank檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。最后，利用“survminer”包進行數(shù)據(jù)可視化。

1.3 差異分析和富集分析

采用R 語言中的“l(fā)imma”包進行差異表達分析[14]，篩選標(biāo)準(zhǔn)為│Log2FC│gt;0.5且校準(zhǔn)后的P 值lt;0.05，以識別顯著差異表達的基因。使用“clusterProfiler”包進行基因本體（GeneOntology，GO）注釋和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia ofGenes and Genomes，KEGG）功能注釋以及基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）[15]。GSEA 結(jié)果通過“ggplot2”包進行可視化。從MSigDB 數(shù)據(jù)庫下載了“c2.all.v2023.1.Hs.symbols”和“c5.all.v2023.1.Hs.symbols”基因集，進一步用于執(zhí)行GSEA富集分析。

1.4 免疫浸潤分析

采用“estimate”包計算了TCGA-COAD 和GSE39582 數(shù)據(jù)集中每個樣本的免疫評分和基質(zhì)評分[16]。隨后，使用Wilcoxon 檢驗分析不同集群之間免疫評分和基質(zhì)評分的差異。使用“GSVA”包計算每個樣本的免疫浸潤情況[17-18]，并進行了腫瘤免疫功能障礙與排斥（Tumor Immune Dysfunctionand Exclusion，TIDE）分析[19]，該分析可用于檢查不同USP53表達組之間的免疫功能障礙和排斥差異。

1.5 scRNA-seq 分析

利用TISCH數(shù)據(jù)庫對GSE166555和GSE146771數(shù)據(jù)集中不同細胞類型的USP53表達水平進行了評估，并對腫瘤樣本、正常樣本和外周血單核細胞（peripheral blood mononuclearcell，PBMC）中不同細胞亞型的USP53表達水平進行了比較。

1.6 藥物敏感性及分子對接

采用“oncoPredict”包預(yù)測了半數(shù)抑制濃度（IC50）值，以便評估體外和體內(nèi)環(huán)境中藥物和生物標(biāo)志物的潛在作用?；诨虮磉_譜，利用Clue平臺將基因、靶向藥物和疾病聯(lián)系起來，并將USP53相關(guān)高表達組和低表達組的差異表達基因提交至Clue平臺，幫助識別可能改善癌癥進展的潛在治療藥物。為進一步獲得識別的小分子的三維結(jié)構(gòu)，查詢了PubChem 數(shù)據(jù)庫。進一步通過Swiss Model 數(shù)據(jù)庫預(yù)測了USP53的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。接下來，采用AutoDock Vina軟件進行了小分子與蛋白質(zhì)的分子對接，并使用PyMOL對對接結(jié)果進行可視化分析。

1.7 機器學(xué)習(xí)

應(yīng)用10種機器學(xué)習(xí)算法和101種集成組合，包括ElasticNet（Enet）、Lasso、隨機生存森林（RSF）、Ridge、Cox Boost、監(jiān)督主成分分析（SuperPC）、StepCox、Cox模型的偏最小二乘回歸（plsRcox）、生存支持向量機（survival-SVM）和廣義增強回歸模型（GBM），以系統(tǒng)性評估USP53相關(guān)基因的預(yù)后價值[20]。以TCGA數(shù)據(jù)集為訓(xùn)練集，排除了生存時間為0的數(shù)據(jù)樣本，并在GSE39582數(shù)據(jù)集上驗證了模型的穩(wěn)健性。模型的準(zhǔn)確性通過Kaplan-Meier（KM）生存分析曲線及時間依賴的ROC曲線進行了綜合評估。

1.8 細胞培養(yǎng)與質(zhì)粒

HCT116細胞購自中國科學(xué)院細胞庫（上海，中國），在含有10% 胎牛血清、100單位/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37 ℃、5% CO?。從淼靈生物平臺購得質(zhì)粒pCMV-USP53-FLAG（P21845）和pCMV-Script（P58978）質(zhì)粒，并使用Lipofectamine 3000試劑（Thermo Fisher Scientific，美國）進行細胞轉(zhuǎn)染。

1.9 實時熒光定量PCR（quantitative teal-time polymerasechain reaction，qPCR）與Western blot

對于qPCR 實驗，在Trizol 試劑（Invitrogen，美國）提取RNA后，使用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara，日本）合成cDNA。在Bio-Rad CFX96系統(tǒng)（Bio-Rad，美國）上進行了定量實時PCR實驗，并使用β-actin作為內(nèi)參基因，通過2-ΔΔCt方法計算mRNA水平。對于WB實驗，在用磷酸鹽緩沖液（phosphatebuffered salin，PBS）清洗細胞2 次后，使用細胞裂解緩沖液和蛋白酶抑制劑的混合物提取總蛋白。這一過程產(chǎn)生了20 mg的蛋白樣本，這些樣本于10%的聚丙烯酰胺SDS凝膠在120 V恒壓下分離，然后在200 mA恒流下轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。USP53一抗（Immunoway，美國）孵育過夜后，洗滌后，再用二抗（Abcam，英國）孵育，免疫反應(yīng)條帶通過增強型化學(xué)發(fā)光（ECL）系統(tǒng)（Bio-Rad，美國）顯影。

1.10 細胞增殖與劃痕試驗

將HCT116細胞以每孔1 500個細胞的密度接種于96孔板，進行細胞增殖實驗。連續(xù)5 d使用IncuCyte ZOOM活細胞成像系統(tǒng)（Essen BioScience，美國）進行細胞計數(shù)和分析。對于劃痕實驗，于96孔板中每孔接種40 000個細胞使得密度約為80%～90%。當(dāng)細胞貼壁后，使用WoundMaker?在細胞表面造成劃痕，并在36 h后由IncuCyte ZOOM活細胞成像系統(tǒng)記錄劃痕區(qū)域。

1.11 集落形成實驗

以每孔1 200個細胞的密度接種于六孔板，并在37 °C下培養(yǎng)。培養(yǎng)8 d后，細胞用4%的多聚甲醛固定，隨后用0.1%的結(jié)晶紫染色。使用ImageJ軟件拍攝照片并進行分析。

1.12 臨床樣本采集與免疫組化試驗

從重慶醫(yī)科大學(xué)病理教研室收集了8例結(jié)直腸癌及其癌旁組織的石蠟包埋切片。切片在4 ℃下與USP53一抗孵育過夜，隨后用ZSGB-BIO 的抗兔IgG 二抗孵育，并采用3，3′-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）染色。染色后的切片通過PannoramicScan 250 Flash 掃描儀掃描，圖像由PannoramicViewer 1.15.2軟件（3DHistech，匈牙利布達佩斯）采集并進行分析。這項研究遵循赫爾辛基宣言的相關(guān)規(guī)定，專門為人類參與者設(shè)計，并獲得了重慶醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究倫理委員會的批準(zhǔn)。

1.13 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析使用R軟件（版本4.1.1）進行。對于符合正態(tài)分布的連續(xù)變量，2組之間的比較采用t 檢驗。差異基因表達分析中，使用Benjamini-Hochberg（BH）方法調(diào)整P 值，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）的形式呈現(xiàn)。

2 結(jié) 果

2.1 USP53在結(jié)直腸癌中低表達并與不良預(yù)后相關(guān)

TCGA-COAD數(shù)據(jù)庫（癌旁組織：4.204 30±0.440 92，腫瘤組織：3.692 80±0.814 04，Plt;0.001）和GSE39582數(shù)據(jù)集（癌旁組織：6.520 90±0.495 78，腫瘤組織：5.651 20±0.590 94，Plt;0.001）分析結(jié)果顯示，USP53在結(jié)直腸癌的mRNA水平明顯降低（圖1A、B）。通過對TCGA數(shù)據(jù)庫中樣本進行配對t 檢驗，發(fā)現(xiàn)COAD組織中的USP53 mRNA水平明顯低于正常組織（癌旁組織：4.204 30±0.440 92，腫瘤組織：3.569 10±0.918 87，Plt;0.001，圖1C）。臨床數(shù)據(jù)樣本的KM生存曲線分析表明，USP53表達水平低與總生存率降低相關(guān)（TCGA數(shù)據(jù)集：Plt;0.001，GSE39582數(shù)據(jù)集：P=0.036，圖1D）。

2.2 USP53調(diào)控結(jié)直腸癌的生物信息學(xué)通路分析

使用2 組數(shù)據(jù)集的KM曲線分組數(shù)據(jù)進行了差異基因表達分析。基于篩選出的差異表達基因及其logFC值，進一步進行了KEGG和GO富集分析。KEGG富集分析結(jié)果顯示，這些差異表達基因明顯富集于細胞周期、FOXO信號通路、p53信號通路和趨化因子信號通路等關(guān)鍵途徑（圖2A、B）。GO富集分析則表明，USP53的過表達在鈣黏蛋白結(jié)合、DNA復(fù)制、細胞周期正向調(diào)控及免疫細胞趨化等生物過程中具有明顯作用（圖2A、B）。此外，基于所有基因的logFC值進行了KEGG基因集的GSEA富集分析。結(jié)果顯示，在2個數(shù)據(jù)庫中，USP53高表達組的T細胞信號通路和細胞凋亡通路明顯上調(diào)（圖2C）。上述結(jié)果表明，USP53的過表達可能通過調(diào)控以上信號通路，從而導(dǎo)致2組之間在預(yù)后結(jié)果出現(xiàn)明顯差異。

2.3 USP53在結(jié)直腸癌中的免疫浸潤分析

通過Estimate方法分析結(jié)果顯示，TCGA 數(shù)據(jù)集USP53高表達組的免疫分數(shù)（低表達組：778.42±710.76，高表達組：530.24±650.65，P=0.005）以及總分低于低表達組（低表達組：778.42±710.76，高表達組：530.24±650.65，P=0.020），GSE39582 數(shù)據(jù)集USP53 高表達組的基質(zhì)分數(shù)（低表達組：139.63±704.96，高表達組：-216.53±733.60，Plt;0.001）、免疫分數(shù)（低表達組：1 299.50±667.98，高表達組：983.05±644.44，Plt;0.001）以及總分（低表達組：1 439.10±1 267.60，高表達組：766.52±1 278.40，Plt;0.001）均低于低表達組（圖3A）。此外，ssGSEA結(jié)果顯示，高USP53表達組的免疫細胞浸潤和功能水平均有所降低（圖3B、C）。而在TIDE分析中，TCGA 數(shù)據(jù)集和GSE39582 數(shù)據(jù)集USP53 低表達組的TIDE評分和功能失調(diào)評分均高于高表達組（圖3D）。以上結(jié)果表明，雖然低表達組免疫浸潤情況較好，但低USP53表達組的免疫活性相對較低，同時具備更強的免疫逃逸能力。

2.4 USP53的單細胞RNA測序（scRNA-seq）分析

采用TISCH 數(shù)據(jù)庫中的GSE166555 數(shù)據(jù)集分析了USP53 基因在不同細胞類型中的表達情況，并結(jié)合GSE146771數(shù)據(jù)集進一步探討了USP53在多種免疫細胞中的表達特征。圖4A和4D展示了各細胞簇群的分布，圖4B和4E則顯示了細胞群中USP53基因的具體表達模式。結(jié)果顯示，USP53在基質(zhì)細胞和腫瘤細胞中的表達較高，在免疫細胞中主要存在于CD8 T細胞、CD8 Tex、CD4 T細胞及其他類型中。小提琴圖（圖4C）表明，USP53在基質(zhì)細胞中的表達相對較低，而在腫瘤細胞中明顯升高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。此外，圖4F進一步分層分析免疫細胞后顯示，盡管USP53在腫瘤細胞中的表達水平相對較低，但與免疫細胞的差異仍具有統(tǒng)計學(xué)意義。以上結(jié)果提示，USP53在多種細胞類型中均有表達，其表達水平與腫瘤的惡性程度及免疫細胞密切相關(guān)。

2.5 藥物敏感性與分子對接

通過“oncoPredict”包比較了高、低USP53表達患者對常用化療藥物的敏感性。結(jié)果顯示，低USP53表達組患者對奧沙利鉑（低表達組：6.206 9±2.450 2，高表達組：7.453 4±2.145 4，Plt;0.01）、5-氟尿嘧啶（低表達組：6.089 5±3.286 8，高表達組：7.178 2±3.442 0，Plt;0.01）和伊利替康（低表達組：3.649 1±2.877 9，高表達組：4.524 5±3.296 0，Plt;0.01）的敏感性明顯更高，這些藥物在該組患者中展現(xiàn)出更優(yōu)的臨床療效（圖5A）。進一步地，將2組間的差異表達基因上傳至Clue平臺，預(yù)測了對結(jié)直腸癌細胞系（HT29）具有效果的小分子化合物，包括積雪草酸（Asiatic Acid）、非索非那定（fexofenadine）、拓撲替康（topotecan）和牡荊素（vitexin）（圖5B）。

基于結(jié)構(gòu)的分子對接方法是一種用于藥物設(shè)計和篩選的關(guān)鍵技術(shù)，因而對這4種候選小分子化合物與USP53進行了分子對接分析，并展示了最低結(jié)合能量的結(jié)果。分子對接結(jié)果（圖5C）顯示，積雪草酸通過氫鍵在LEU-291和THR-268位點與USP53結(jié)合；非索非那定在TYR-1053位點形成氫鍵；拓撲替康則在ARG-222和ARG-236位點與USP53結(jié)合；牡荊素在PRO-176、ARG-1056和HIS-1054位點形成氫鍵。這些化合物的結(jié)合能分別為-8.1、-9.7、-8.8和-8.5，表明這些小分子與USP53之間的相互作用具有潛在的穩(wěn)定性和可行性。

2.6 通過機器學(xué)習(xí)方法建立USP53相關(guān)基因的預(yù)后模型

本研究以TCGA-COAD為訓(xùn)練集，GSE39582為驗證集，利用10 種機器學(xué)習(xí)算法和101 種集成組合構(gòu)建了預(yù)測模型。通過C-index對模型表現(xiàn)進行評估，最終選定StepCox[forward] + Ridge組合算法作為構(gòu)建預(yù)后模型的最佳方案（圖6A）。基于該模型，對測試集和驗證集進行了風(fēng)險分層分析。KM曲線結(jié)果顯示，高風(fēng)險組的死亡率明顯高于低風(fēng)險組（TCGA：Plt;0.001，GSE39582：P=0.002，圖6B）。為進一步驗證模型的預(yù)測能力，繪制了ROC 曲線。在TCGA-COAD數(shù)據(jù)集中，模型的1 年、2 年和3 年ROC 曲線下面積（areaunder curve，AUC）分別為0.835、0.802和0.782；在GSE39582驗證集中，1 年、2 年和3 年的AUC 分別為0.646、0.612 和0.641（圖6C）。這些結(jié)果表明，所建立的模型在訓(xùn)練集中具有較高的預(yù)測準(zhǔn)確性。

2.7 USP53過表達抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖和遷移能力

通過在HCT116 細胞中轉(zhuǎn)染pCMV-USP53-FLAG 質(zhì)粒以誘導(dǎo)USP53過表達，評估其對細胞生物學(xué)行為的影響（圖7A和7B）。細胞增殖實驗結(jié)果顯示，USP53過表達組在5 d培養(yǎng)期間的增殖速率明顯低于對照組（過表達組：5 624.80±477.76，對照組：7 399.00±215.16，P=0.042，圖7C），且這一結(jié)果在克隆形成實驗中得到進一步驗證（過表達組：280.33±7.571 9，對照組：482.330±36.665，P=0.000 7，圖7D）。此外，劃痕實驗表明，相較于對照組（59.128 0±1.855 5），USP53過表達組（43.833 0±4.637 3）的細胞遷移能力明顯降低（P=0.004，圖7E）。

進一步分析揭示，USP53的過表達不僅明顯抑制了結(jié)直腸癌細胞的遷移能力，還與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelialmesenchymaltransition，EMT）過程相關(guān)。在USP53過表達的結(jié)直腸癌細胞中，檢測到EMT相關(guān)蛋白的表達變化。Westernblot結(jié)果顯示，USP53過表達明顯降低了N-cadherin的表達，并明顯提高了E-cadherin 的表達水平（圖7F），提示USP53的過表達能夠有效抑制EMT過程，從而削弱結(jié)直腸癌細胞的侵襲性。

2.8 USP53在臨床結(jié)直腸癌組織中的表達

為研究USP53在臨床結(jié)直腸癌組織中的表達水平，收集了8例結(jié)直腸癌患者癌組織和癌旁組織切片，并進行了免疫組化染色（圖8）。結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌病變組織中的USP53表達明顯低于相鄰的正常組織。提示USP53可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展中扮演了重要的抑癌角色。

3 討 論

研究發(fā)現(xiàn)USP53在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著抑癌基因的重要作用。USP53通過抑制NF-κB信號通路，有效抑制透明細胞腎癌的增殖與遷移[21]。同時，異位表達的USP53能夠抑制肝細胞癌細胞的增殖、遷移和侵襲，并誘導(dǎo)其凋亡[13]。研究還發(fā)現(xiàn)，H3K27乙?；軌蚣せ頤SP53，進而通過調(diào)節(jié)細胞生長和代謝抑制食管癌（esophageal carcinoma，ESCA）的進展[22]。

在本研究中，通過分析TCGA-COAD和GSE39582數(shù)據(jù)集，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌組織中USP53的表達明顯降低，且與高表達相比，低USP53表達的患者預(yù)后更差，總體生存率明顯降低。臨床組織樣本的免疫組化實驗進一步證實，結(jié)直腸癌組織中的USP53表達明顯低于正常組織。KEGG富集分析提示了USP53抑制腫瘤進展的潛在機制，表明USP53過表達可能明顯影響細胞周期、凋亡及JAK-STAT 信號通路。以往研究表明，JAK-STAT信號通路的激活與不良預(yù)后密切相關(guān)[23-24]。USP22也是泛素特異性蛋白酶家族成員之一，并且通過組蛋白去泛素化影響染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因轉(zhuǎn)錄，促進STAT信號通路的激活[25]，與USP53的作用相反，有必要繼續(xù)深入研究。

GO富集分析顯示，各類免疫細胞的趨化活性明顯增加。研究表明，記憶性CD4+ T細胞和CD8+ T細胞在腫瘤微環(huán)境中的浸潤與遷移調(diào)控著腫瘤免疫，包括腫瘤清除、機體平衡和免疫逃逸3個階段[26]。免疫細胞的趨化活性差異可能是兩組生存率差異的原因之一。因此，本研究分析了兩組數(shù)據(jù)集的免疫浸潤狀態(tài)。結(jié)果顯示，與高表達組相比，USP53低表達組的免疫浸潤程度較高，但其預(yù)后較差。進一步的TIDE 分析表明，USP53 低表達組的TIDE評分和功能障礙評分更高，顯示出免疫活性降低和免疫逃逸增強，即雖然USP53低表達組免疫浸潤程度高，免疫細胞的功能可能較差，導(dǎo)致預(yù)后較差[27]。

化療是結(jié)直腸癌的主要治療手段。通過對TCGA-COAD數(shù)據(jù)庫的分析，發(fā)現(xiàn)USP53低表達（高風(fēng)險組）對多種化療藥物更為敏感。此外，利用CLUE平臺篩選出可能通過激活USP53途徑來抑制結(jié)直腸癌的小分子化合物，并通過分子對接預(yù)測其作用機制，為結(jié)直腸癌患者提供了潛在的治療策略。

在HCT116結(jié)直腸癌細胞中過表達USP53后，細胞增殖曲線、克隆形成和劃痕實驗提示USP53抑制結(jié)直腸癌細胞增殖和遷移能力。EMT是腫瘤細胞在發(fā)生、進展和轉(zhuǎn)移過程中的重要機制[28]，使上皮細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂懈咔忠u性和遷移能力的間質(zhì)細胞[29-30]。USP53 通過調(diào)控EMT 過程發(fā)揮抗腫瘤作用[31]?；谝陨辖Y(jié)果，USP53有望成為腫瘤預(yù)后重要標(biāo)志物。另外，本研究表明，腫瘤中USP53的表達水平可能與免疫療法的成功率密切相關(guān)。USP53可能成為預(yù)測免疫療法療效的生物標(biāo)志物，有助于開發(fā)個性化治療策略。

接下來，將通過體外實驗分析USP53與結(jié)直腸癌相關(guān)通路的調(diào)控，并在體內(nèi)實驗驗證；此外，USP53作為去泛素化酶在EMT過程中的調(diào)控作用尚未進行實驗驗證，將進行相關(guān)的探索。

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（責(zé)任編輯：周一青）

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