*基金項(xiàng)目：國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)名老中醫(yī)藥專家?guī)洜c傳承工作室項(xiàng)目（國(guó)中醫(yī)藥人教函〔2022〕75號(hào)）

第一作者簡(jiǎn)介：夏海梅（1990-），女，碩士，主管中藥師，研究方向：中藥藥理研究及中醫(yī)藥防治艾滋病研究。

△通信作者：瞿廣城，E-mail：277960224@qq.com

摘要：目的" 測(cè)定紅雀嘴茶4個(gè)不同部位的浸出率及其嫩葉芽的安全性研究。方法" 分別以70%乙醇和水為溶劑，加熱回流提取，測(cè)定嫩葉、老葉、嫩芽、果實(shí)的浸出率，比較2種不同溶劑提取后不同部位的浸出率；取各提取液進(jìn)行鹽酸-鎂粉、三氯化鋁實(shí)驗(yàn)鑒別其是否含黃酮類成分；不同溶劑提取嫩葉芽測(cè)定浸出率，急性毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)其安全性。結(jié)果" 同一溶劑提取，浸出率：嫩葉gt;嫩芽gt;果實(shí)gt;老葉；同一部位不同溶劑提取，浸出率：70%乙醇gt;水提取；紅雀嘴茶嫩葉、嫩芽、老葉、果實(shí)均含有黃酮類化學(xué)成分；不同溶劑提取測(cè)定嫩葉芽浸出率：70%乙醇（49.93%）gt;50%乙醇（46.17%）gt;水（45.40%）；急毒實(shí)驗(yàn)研究，觀察14d內(nèi)小鼠死亡率，水提組小鼠總死亡率15%，醇提組小鼠總死亡率50%。結(jié)論" 紅雀嘴茶嫩葉、老葉、嫩芽、果實(shí)均含黃酮類化合物，浸出率高，乙醇提取浸膏得率大于水提取，其中直接陰干嫩葉芽對(duì)機(jī)體有一定程度的損害，應(yīng)謹(jǐn)慎使用。其果實(shí)浸出率高，可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：紅雀嘴茶；浸出率；鑒別；安全性

中圖分類號(hào)：R285.5""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A""" 文章編號(hào)：1007-2349（2024）04-0092-04

雀嘴茶，杜鵑花科越橘屬樟葉越橘（vaccinium dunalianum Wight）植物的幼嫩葉芽［1］，因形似雀嘴呈鉤狀，在云南彝族民間稱為“雀嘴茶”，色紅者稱為紅雀嘴，色白者稱為白雀嘴。彝醫(yī)稱“那景弄”、“羅嘎丕”，用其干燥枝、葉，謂明目茶［2］，具有清熱養(yǎng)陰，祛風(fēng)明目，潤(rùn)腸通便，舒經(jīng)活絡(luò)的功效。雀嘴茶是云南滇中特有野生茶代用品，最早在明朝作為貢品使用，又稱“始祖茶”，多生于海拔1500～3600 m的灌木叢，主產(chǎn)于云南、貴州、四川、西藏等地［3］，紅雀嘴茶主要分布在云南省楚雄州武定縣，目前尚不可大量栽培，僅有移栽品，多野生。民間記載，常飲雀嘴茶可提神醒腦、健脾益氣、軟化血管、降血壓、降血脂等。研究發(fā)現(xiàn)，來(lái)源于杜鵑花科南燭屬植物的葉（Lyonia ovalifolia（W.）Drude）經(jīng)70%乙醇提取，LD50為39.9g/kg，對(duì)小鼠多個(gè)器官有不同程度的損傷［4］。木藜蘆烷型二萜是杜鵑花科植物特征成分，為天然非生物堿毒素，主要來(lái)源于杜鵑花屬、南燭屬、木藜蘆屬、馬醉木屬、山月桂屬［5］。紅雀嘴茶雖屬越橘屬但也來(lái)源于杜鵑花科，目前尚且缺乏實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，本研究對(duì)紅雀嘴茶四個(gè)不同部位的浸出率及嫩葉芽進(jìn)行安全性研究，為雀嘴茶的開(kāi)發(fā)研究提供依據(jù)。

1" 材料與儀器

1.1" 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物" 昆明種健康小鼠80只，SPF級(jí)，體質(zhì)量（20±2）g，雌雄各半，購(gòu)自昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，許可證號(hào)：SCXK（滇）K2020-0004，飼養(yǎng)于云南省中醫(yī)中藥研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，配置IVC獨(dú)立送風(fēng)系統(tǒng)，照明晝夜各半，溫度20℃～26℃，濕度40%～60%。實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)過(guò)云南省中醫(yī)中藥研究院動(dòng)物倫理審批。

1.2nbsp; 藥物與試劑" 陰干紅雀嘴茶，采自云南省武定縣大麥地村；75%乙醇，購(gòu)自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司。

1.3 "主要儀器" 分析天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；ZF-1紫外分析儀，漢諾。

2" 實(shí)驗(yàn)方法

2.1" 測(cè)定4個(gè)部位浸出率" 取自然陰干的紅雀嘴茶嫩芽、嫩葉、老葉及果實(shí)粉碎，過(guò)二號(hào)篩，分別精密稱取供試品2.00g，置于100mL錐形瓶中，按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2020）的方法，分別以純凈水、70%乙醇為溶劑，測(cè)定4個(gè)供試品的浸出率。

浸出率%=V總×（M2-M1）25×M0

M2：坩堝+浸膏恒重，M1：坩堝恒重，M0：供試品重量

2.2" 黃酮類成分鑒定" 鹽酸-鎂粉、三氯化鋁實(shí)驗(yàn)鑒定紅雀嘴茶嫩芽、嫩葉、老葉及果實(shí)中是否含黃酮類成分。

2.3" 熱浸法測(cè)定紅雀嘴茶嫩葉芽浸出率" 取自然陰干的紅色雀嘴茶嫩葉芽（1～2葉），不同溶劑（純凈水、50%乙醇、70%乙醇）提取，按照2020版藥典方法測(cè)定浸出率。

2.4" 急性毒性試驗(yàn)" 制備實(shí)驗(yàn)用藥：取自然陰干紅雀嘴茶幼嫩葉芽（1～2葉）300 g，加入3000mL純凈水（70%乙醇）加熱回流提取2 h，濾過(guò)藥液，加純凈水至原刻度，繼續(xù)提取1 h，過(guò)濾，合并濾液，濃縮干燥備用。水提：3.82g生藥/g干粉，70%醇提：3.04g生藥/g干粉。

選SPF級(jí)健康昆明種小鼠80只，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組、水提組（50g生藥/kg）、70%醇提組（64.8g生藥/kg），禁食不禁水""" 12，24 h內(nèi)灌胃給藥3次，給藥劑量40mL/kg，隔天稱量體重，持續(xù)14d，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察動(dòng)物飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應(yīng)（中毒反應(yīng)的癥狀、嚴(yán)重程度、起始時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、是否可逆等）。試驗(yàn)結(jié)束，處死小鼠，觀察內(nèi)臟變化。明目茶成人（70kg）用藥劑量10～20g/d，按成人用量均值15g/d換算合成人用藥倍數(shù)。

3" 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1" 測(cè)定紅雀嘴茶4個(gè)部位的浸出率" 見(jiàn)表1。同一溶劑提取，浸出率：嫩葉gt;嫩芽gt;果實(shí)gt;老葉；同一部位不同溶劑提取，浸出率：70%乙醇gt;水提取。對(duì)比同一部位兩個(gè)不同溶劑的浸出率，雖然70%乙醇浸膏得率大于水提取，但差距較小，提示紅雀嘴茶中水溶性成分較多，可溶于熱水。同一溶劑不同部位的浸膏得率均在32%以上，提示4個(gè)部位活性成分含量均很高。

3.2" 對(duì)紅雀嘴茶嫩葉、老葉、嫩芽、果實(shí)4個(gè)部位的水提液及70%乙醇提取液進(jìn)行鹽酸-鎂粉和三氯化鋁實(shí)驗(yàn)鑒別是否含黃酮類成分" 見(jiàn)表2。四個(gè)部位均含有黃酮類化合物。黃酮類成分難溶于水，天然黃酮多以苷類形式存在，黃酮苷易溶于極性較大的溶劑，如水、乙醇等，提示紅雀嘴茶中天然黃酮成分較多，水溶性較好，開(kāi)水泡日常茶飲可溶出較多的化學(xué)成分。

3.3" 不同溶劑提取幼嫩葉測(cè)浸出率" 見(jiàn)表3。發(fā)現(xiàn)70%乙醇gt;50%乙醇gt;水。提取率均gt;45%，得率較高。

3.4" 急性毒性實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)表4。觀察小鼠14d，灌胃

給藥12h后，水提給藥組雌鼠死亡2只，70%醇提給藥組雌鼠死亡6只，雄鼠死亡2只；給藥24h后，水提給藥組雄鼠死亡1只，70%醇提給藥組雌、雄鼠各死亡1只，之后實(shí)驗(yàn)期間無(wú)小鼠死亡，水提組小鼠總死亡率15%，70%醇提組小鼠總死亡率50%。觀察小鼠排泄物有腹瀉現(xiàn)象，精神狀態(tài)、行為尚可，飲食無(wú)變化，解剖死亡小鼠，肉眼未觀察到臟器明顯異常。結(jié)合水提浸出率及日常茶飲的使用方式，提示陰干雀嘴茶嫩葉芽對(duì)機(jī)體有毒性，應(yīng)選擇經(jīng)炮制后的雀嘴茶食用。

4" 討論

目前，紅雀嘴茶的藥用部位主要是干燥枝、葉（明目茶）及幼嫩葉芽。走訪茶農(nóng)發(fā)現(xiàn)，紅雀嘴茶主要采集芽苞使用，舍棄嫩葉，存在過(guò)早采摘、資源浪費(fèi)現(xiàn)象，而據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，嫩葉的藥用價(jià)值可能大于芽苞，筆者認(rèn)為可適當(dāng)推遲采收時(shí)間，擴(kuò)大采集部位，提高雀嘴茶的資源利用率。據(jù)報(bào)道，稀乙醇或水提取條件下，紅色雀嘴茶浸出率均高于白色雀嘴茶，稀乙醇提取浸膏得率高于水提?。?］，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與本次研究結(jié)果大體一致。雀嘴茶主要含6′-O-咖啡酰熊果苷（6-O-Caffeoylarbutin，CA）、熊果苷（arbutin）、綠原酸（Chlorogenic acid）等，三者均屬天然植物多酚，在熱水中溶解度大，易溶于乙醇。研究發(fā)現(xiàn)，乙醇提取后不同溶劑萃取，乙酸乙酯部位總酚和總黃酮含量最高［7］，雀舌茶花芽、葉、莖、根打粉，超純水超聲處理，HPLC法測(cè)定含量，不同部位均顯示6′-O-咖啡酰熊果苷含量最高，不同部位主要活性成分含量：花芽gt;葉gt;莖gt;根［8］。而自然風(fēng)干比熱風(fēng)干燥可顯著保存雀嘴茶中主要有效成分熊果苷、綠原酸及6′-O-咖啡酰熊果苷的含量［9］。本研究選用自然陰干紅色雀嘴茶的幼嫩葉芽為研究對(duì)象，水、50%乙醇、70%乙醇3種溶劑提取測(cè)定浸出率，所得結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道50%乙醇浸出率48%、乙醇提取得率大于水提取一致。

文獻(xiàn)報(bào)道雀嘴茶可提高小鼠免疫功能［10］，其化學(xué)成分烏金苷和熊果苷可降低血清尿酸，保護(hù)腎臟，改善高尿酸所致的糖脂代謝及炎性病變［11］，6′-O-咖啡酰熊果苷可有效改善四氧嘧啶誘導(dǎo)的Ⅰ型糖尿病小鼠血糖及血脂水平，降低腎臟、肝臟、胰腺的病理?yè)p傷［12］。6-O-咖啡酰熊果苷、β-熊果苷和綠原酸具有良好的抗氧化活性，6′-O-咖啡酰熊果苷可同時(shí)抑制單酚酶和二酚酶活性，β-熊果苷可抑制單酚酶活性［13］，酪氨酸酶是一種多酚氧化酶，具有單酚酶和二酚酶活性，是調(diào)控黑色素生成的限速酶，抑制酪氨酸酶活性是抑制黑素生成最主要的手段，而抑制黑色素生成是當(dāng)下美白祛斑劑最主要的作用機(jī)理。熊果苷是一種糖苷，是國(guó)際公認(rèn)的21世紀(jì)理想的植物皮膚美白祛斑活性劑［14］，可抑制酪氨酸酶，阻止黑色素生成，增白祛斑活性顯著。XU-Min等［15］利用斑馬魚(yú)模型，發(fā)現(xiàn)雀嘴茶中6-O-咖啡酰熊果苷可顯著抑制黑色素生成，其抑制活性約是熊果苷的2倍，而毒性比熊果苷低2倍，停止使用后黑色素合成可逆。提示6-O-咖啡酰熊果苷較傳統(tǒng)美白劑具有更顯著的美白活性且安全性更高，是美白產(chǎn)品理想的天然綠色添加劑。

綜合文獻(xiàn)報(bào)道，目前對(duì)雀嘴茶的研究報(bào)道相對(duì)較少，主要集中在化學(xué)成分、資源栽培、糖脂代謝性疾病研究等方面，研究單位相對(duì)集中，西南林業(yè)大學(xué)及昆明理工大學(xué)的報(bào)道較多，但未見(jiàn)對(duì)紅雀嘴茶安全性研究的報(bào)道。筆者認(rèn)為目前研究較為局限與紅雀嘴茶資源分布較為集中有關(guān)，紅雀嘴茶屬云南民域特色資源，其資源優(yōu)勢(shì)及市場(chǎng)優(yōu)勢(shì)尚未凸顯。幼嫩葉芽是雀嘴茶目前普遍使用的部位，毒性實(shí)驗(yàn)研究評(píng)價(jià)其安全性發(fā)現(xiàn)，小鼠在給藥后48h出現(xiàn)大量死亡，且醇提組小鼠死亡率gt;水提組，提示食用直接陰干雀嘴茶嫩葉芽具有一定的毒性，乙醇提取毒性大于水提取。但因70%醇提組給藥劑量大于水提組，不能因此準(zhǔn)確評(píng)價(jià)兩種溶劑下雀嘴茶的毒性。本研究雖未能全面研究報(bào)道紅雀嘴茶的LD0、LD50、LD100，但也一定程度說(shuō)明紅雀嘴茶對(duì)機(jī)體具有一定的毒性損害，應(yīng)謹(jǐn)慎使用。研究結(jié)果顯示，70%醇組小鼠死亡率更高，筆者分析可能是因?yàn)槠溆盟幜扛?，也可能是醇提后溶出了更多的化學(xué)成分加大毒性，提示食用雀嘴茶的同時(shí)應(yīng)避免飲酒。結(jié)合市售紅雀嘴茶“三蒸三露”或是“拌蜂蜜后文火炒干”的炮制工藝，此炮制工藝可能具有減毒效果。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者認(rèn)為，企業(yè)、科研學(xué)者等應(yīng)該根據(jù)不同需求選擇不同炮制工藝的雀嘴茶使用，不宜混淆。

本次研究有不足之處，（1）未對(duì)不同炮制工藝的紅雀嘴茶進(jìn)行全面研究，所得結(jié)果較為局限，不能全方位評(píng)價(jià)不同炮制工藝下紅雀嘴茶不同藥用部位的浸出率和安全性。（2）實(shí)驗(yàn)未能全面研究報(bào)道紅雀嘴茶的LD0、LD50、LD100，深入病理、毒理研究進(jìn)一步揭示紅雀嘴茶的毒性成分及損傷靶器官或組織等。紅雀嘴茶為民域特產(chǎn)，資源寶貴，現(xiàn)為特產(chǎn)飲品銷售，所以對(duì)其進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)非常有必要，下一步筆者將進(jìn)一步明確其毒性靶標(biāo)。另外，樟葉越橘陰干果實(shí)富含粗纖維（36.3%），氨基酸配比合理，必需氨基酸、鮮味氨基酸分別占總氨基酸的38.9%、26.2%，有典型的高鉀低鈉特征：鉀＞鈣＞鎂＞磷＞鈉，有極高的營(yíng)養(yǎng)劑保健價(jià)值［16］，但目前對(duì)雀嘴茶果實(shí)的研究及應(yīng)用較少，結(jié)合樟葉越橘果實(shí)較高的浸出率，提示其重要的開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值。

越橘被FAO列為人類五大健康食品之一，且樟葉越橘富含6-0-咖啡酰熊果苷（20%～25%）、熊果苷（12%～18%）是天然的美白原料，紅雀嘴茶資源寶貴，應(yīng)盡可能擴(kuò)大藥用部位深入研究。

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（收稿日期：2023-10-19）